田代真一
- 作品数：24 被引量：244H指数：10
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- 血竭素高氯酸盐诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的机制被引量：23
- 2004年
- 目的 研究血竭素高氯酸盐诱导HeLa细胞凋亡机制。方法 MTT法测定血竭素高氯酸盐对HeLa细胞 的细胞毒作用。通过显微镜,荧光染色观察细胞形态学变化,用琼脂糖凝胶电泳检测DNA片断化。用Western印迹 法分析药物对蛋白质表达的影响。结果 血竭素高氯酸盐明显抑制HeLa等细胞的增殖,诱导HeLa细胞调亡。 Caspase 1, 3, 8, 9及家族抑制剂可明显抑制血竭素高氯酸盐诱导的凋亡。Western印迹结果显示血竭素高氯酸盐 作用12h后Bax及Bcl XL的表达明显改变,caspase 3, 8前体及caspase 3底物ICAD和PARP发生降解。结论 血 竭素高氯酸盐(60μmol·L-1)通过改变Bax/Bcl XL的表达激活caspase途径诱导HeLa细胞凋亡。
- 夏明钰王敏伟王浩然田代真一池岛乔
- 关键词：血竭素高氯酸盐HELA细胞细胞凋亡抗肿瘤活性
- 水飞蓟素和Fas激动性抗体CH11共同作用诱导A375-S2细胞凋亡被引量：4
- 2006年
- 目的水飞蓟素和CH11共同作用诱导人黑色素瘤细胞A375-S2凋亡的分子机制。方法结晶紫法测定细胞生长抑制率;细胞凋亡的形态学观察,LDH法测定凋亡与坏死的比率;用免疫印迹法检测凋亡抑制性的去乙酰化酶SIRT1、Bc l-2家族成员(抗凋亡蛋白Bc l-2,Bc l-xL和促凋亡蛋白Bax)、细胞色素C和Caspase-3的表达。结果水飞蓟素和CH11共同作用能诱导A375-S2细胞发生凋亡;形态学观察可见凋亡小体的形成;免疫印迹法检测发现水飞蓟素和CH11共同作用的A375-S2细胞中Bax蛋白的表达增加,Bc l-2蛋白和Bc l-xL蛋白的表达降低,细胞色素C释放增加,pro-caspase-3表达量明显降低。结论水飞蓟素协同CH11能明显促进A375-S2细胞的凋亡。
- 杨小珂李林昊周蓓吴立军田代真一小野寺敏池岛乔
- 关键词：水飞蓟素A375-S2细胞凋亡
- 土槿皮乙酸体外诱导A375-S2细胞凋亡被引量：10
- 2005年
- 目的 :研究土槿皮乙酸 (pseudolaricacidB)诱导A375 S2细胞凋亡的作用 ,探讨其抗癌作用机制。方法 :采用噻唑蓝 (MTT)法、形态学观察、DNA凝胶电泳及Westernblot检测法。结果 :土槿皮乙酸可剂量 时间依赖性的诱导A375 S2细胞凋亡 ,5 μmol·L-1土槿皮乙酸处理 36h的细胞 ,Hoechst 332 5 8荧光染色后有明显的凋亡小体出现 ;凝胶电泳法显示有明显的DNAladder出现。细胞内抑制凋亡蛋白Bcl 2 ,Bcl xL和caspase激活的DNA酶抑制物(ICAD)表达量时间依赖性地减少 ,而促凋亡蛋白Bax表达量增加。结论 :土槿皮乙酸对A375 S2细胞的杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡 ,降低Bcl 2 ,Bcl xL和ICAD蛋白的表达 ,增加Bax蛋白表达为其诱发A375
- 龚显峰王敏伟田代真一小野寺敏池岛乔
- 关键词：A375-S2细胞土槿皮凋亡BEL-2体外诱导乙酸
- 人白细胞介素1β(IL-1β)在诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡过程中的细胞周期阻滞作用和对线粒体Bcl-2家族蛋白的调节
- 2005年
- 目的研究人白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)体外诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的机制。方法通过Hoechst33258荧光染色,观察A375-S2细胞在IL-1β作用下的形态学变化。使用琼脂糖凝胶电泳法检测IL-1β对细胞DNA降解的影响。应用流式细胞分析技术研究IL-1β对A375-S2细胞周期的影响。利用Westernβlot方法检测IL-1β对细胞线粒体内Bcl-2家族蛋白表达的调节作用。结果IL-1β(1nM)能够诱导A375-S2细胞凋亡,72h时细胞体变小,细胞核呈现固缩、断裂,并出现因凋亡引起的DNA梯状条带。IL-1β可将细胞周期阻滞在G0/G1期,并具有时间依赖性。IL-1β诱导细胞凋亡过程中,抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL的表达减少,促凋亡蛋白Bax的表达增加。结论IL-1β通过将细胞周期阻滞在G0/G1期,上调线粒体内Bax/Bcl-2和Bax/Bcl-xL的表达比例诱导A375-S2细胞凋亡。
- 王澈王敏伟田代真一小野寺敏池岛乔
- 关键词：白细胞介素1Β人黑色素瘤凋亡细胞周期
- 水飞蓟宾对异丙肾上腺素引起的大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及其机制被引量：12
- 2007年
- 水飞蓟宾(silibinin)为从菊科植物水飞蓟(Silybum marianum)的种子和果实中提取得到的黄酮类单体成分。本研究观察水飞蓟宾对β-肾上腺素受体激动剂异丙肾上腺素对培养乳鼠心肌细胞损伤的影响,并对其机制进行研究。采用MTT法测定细胞存活率,酶联法测定细胞丙二醛(maleic dialdehyde,MDA)和细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的含量以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性,流式细胞仪测定线粒体膜电位(ΔΨ),以及Western blotting检测与线粒体相关蛋白的表达。与模型组相比,水飞蓟宾使细胞受损伤的程度降低,并且增加SOD的活性,抑制了细胞膜电位的降低,并且改善Bcl-2家族蛋白中Bax/Bcl-2的表达比率,上调Bax上游去乙酰化酶SIRT1蛋白的表达。水飞蓟宾通过上调线粒体上游Bax/Bcl-2的表达比率与SIRT1蛋白的表达,改善了线粒体的功能,从而对由异丙肾上腺素引起的培养乳鼠心肌细胞损伤有明显的保护作用。
- 周蓓吴立军田代真一小野寺敏内海文彰池岛乔
- 关键词：水飞蓟宾心肌细胞线粒体膜电位BCL-2家族蛋白
- 吴茱萸碱诱导人黑色素瘤A375-S2细胞的两种死亡机制被引量：26
- 2003年
- 目的 研究吴茱萸碱诱导A375 S2细胞死亡机制。方法 MTT法测定吴茱萸碱对A375 S2的细胞毒作用。通过倒置光显微镜 ,荧光染色 ,DNA电泳观察细胞形态学变化。应用流式细胞分析技术研究药物对细胞周期的影响。结果 吴茱萸碱明显抑制A375 S2生长 ,在 2 4h前可诱导A375 S2凋亡 ,亚二倍体峰出现 ,caspase蛋白酶被激活 ,2 4h后启动坏死途径 ,caspase蛋白酶抑制剂不能抑制细胞死亡。结论 吴茱萸碱诱导A375 S2死亡时早期启动了caspase依赖性的非经典凋亡途径 。
- 张莹吴立军田代真一小野寺敏池岛乔
- 关键词：吴茱萸碱凋亡抗肿瘤活性
- 吴茱萸碱诱导A375-S2细胞死亡过程中对ERK激酶的调控被引量：4
- 2004年
- 目的对比吴茱萸碱与化疗药物对A375-S2细胞的细胞毒活性,并且研究PKC及ERK激酶在吴茱萸碱诱导A375-S2细胞死亡中的作用。方法MTT法,Western印迹法。结果虽吴茱萸碱对A375-S2细胞毒作用比化疗药物放线菌素D、顺铂和5-氟尿嘧啶弱,但对药物撤除后细胞继续增殖能力的影响远胜于3种化疗药物。低浓度(10μg/L)佛波酯(PMA)引起的PKC的激活可部分抑制吴茱萸碱引起的细胞死亡,PKC及ERK抑制剂可逆转这种作用,而且吴茱萸碱减少了ERK蛋白表达,并降低了ERK的磷酸化水平。结论吴茱萸碱对A375-S2细胞的细胞毒作用即使在药物撤除后仍对细胞继续增殖能力产生抑制作用。吴茱萸碱可通过减少ERK及磷酸化ERK的蛋白表达而阻断ERK激酶对细胞的保护作用。
- 张莹张起辉吴立军田代真一小野寺敏池岛乔
- 关键词：吴茱萸碱黑色素瘤A375-S2细胞有丝分裂素激活蛋白激酶类
- 水飞蓟素在紫外线照射诱导A375-S2细胞凋亡中发挥抑制作用被引量：7
- 2005年
- 目的:从天然药物中筛选出抑制紫外线照射诱导人黑色素瘤细胞A375-S2凋亡的有效单体。方 法:MTT法测定细胞生长抑制率;形态学观察,DNA凝胶电泳及LDH法;用半胱天冬酶活力检测试剂盒测定半胱天 冬酶活力;用免疫印记法检测Bcl-2家族成员(Bcl-2,Bcl-xL和Bax)的表达。结果:紫外线照射(2．4 J／cm2,5 min)能显著诱导A375-S2细胞发生凋亡,其作用呈明显时间依赖性。形态学观察可见凋亡小体的形成,琼脂糖凝 胶电泳可见凋亡典型的DNA梯带;水飞蓟素具有抑制紫外线照射(2．4 J／cm2,5 min)诱导A375-S2细胞凋亡的作 用,水飞蓟素作用于紫外线照射(2．4 J／cm2,5 min)的A375-S2细胞,培养12 h,使紫外线照射诱导的半胱天冬酶 -9、半胱天冬酶-3的活力降低;免疫印记法检测发现水飞蓟素作用的A375-S2细胞(紫外线照射)中Bcl-2蛋 白和Bcl-xL蛋白的表达增加。结论:水飞蓟素明显抑制紫外线照射诱导的A375-S2细胞的凋亡,其抑制凋亡作 用与半胱天冬酶途径和线粒体途径相关。
- 李林昊吴立军田代真一小野寺敏内海文彰池岛乔
- 关键词：紫外线A375-S2细胞水飞蓟素半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶
- 蛋白激酶C在吴茱萸碱诱导A375-S2细胞死亡中的作用被引量：4
- 2005年
- 目的研究蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)在吴茱萸碱(evodiamine)诱导的A375-S2细胞死亡过程中的作用。方法TUNEL法检测吴茱萸碱诱导细胞凋亡的比例。MTT法测定药物对A375-S2细胞的细胞毒作用。Westernblotting法分析药物作用后对ERK及其磷酸化蛋白和Bcl-2家族蛋白的影响。结果吴茱萸碱诱导A375-S2细胞的死亡在24h以前以凋亡为主。PKC抑制剂staurosporine和ERK抑制剂PD98059均能促进吴茱萸碱诱导的A375-S2细胞死亡。吴茱萸碱能够抑制PKC的活力,下调ERK及其磷酸化蛋白的表达水平,并使Bax/Bcl-2表达比例上升。而staurosporine对吴茱萸碱抑制PKC活力,降低ERK及其磷酸化蛋白和Bcl-2的表达有进一步增强的作用。结论在吴茱萸碱诱导的A375-S2细胞死亡中,PKC位于ERK和Bcl-2的上游发挥其调节作用。
- 王澈王敏伟田代真一小野寺敏池岛乔
- 关键词：吴茱萸碱蛋白激酶C
- 冬凌草甲素通过诱导人宫颈癌HeLa细胞自噬下调凋亡的机制被引量：25
- 2007年
- 研究冬凌草甲素通过诱导人宫颈癌HeLa细胞自噬拮抗凋亡的机制。MTT法测定冬凌草甲素对HeLa细胞的细胞毒作用。通过相差显微镜观察细胞形态学变化,用琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化,用流式细胞仪检测细胞自噬和凋亡水平,用Westernblotting检测分析药物对蛋白质表达的影响。冬凌草甲素明显抑制HeLa细胞的增殖,诱导HeLa细胞凋亡,同时诱导HeLa细胞发生自噬。Westernblotting检测结果表明,冬凌草甲素作用24h后,促凋亡蛋白Bax、细胞色素c和控制Bax活力的去乙酰化酶SIRT-1的表达明显改变。冬凌草甲素(64μmol.L-1)诱导的自噬通过影响SIRT-1和线粒体途径蛋白的表达下调凋亡。
- 崔侨田代真一小野寺敏池岛乔
- 关键词：冬凌草甲素HELA细胞自噬
