王馨
- 作品数：8 被引量：17H指数：3
- 供职机构：天津医科大学第二医院更多>>
- 发文基金：默沙东科研基金天津市自然科学基金天津市科委基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人天然Fab段噬菌体抗体库的构建被引量：2
- 2005年
- 目的通过构建人天然F ab段噬菌体抗体库为恶性肿瘤的免疫治疗提供新方法。方法取4个健康献血员新鲜血液各200m l,分离淋巴细胞,提取总RNA,经逆转录合成cDNA,设计多对引物,以PCR扩增抗体轻链和重链Fd段cDNA。轻链PCR产物和质粒载体pCom b3经SacⅠ和X baⅠ酶切,由T 4 DNA连接酶连接,电穿孔转化感受态大肠杆菌XL 1-B lue,扩增后提取质粒,构建轻链库。轻链库和重链Fd段PCR产物经X hoⅠ和SpeⅠ酶切,同样方法连接转化XL 1-B lue,加入辅助噬菌体VCSM 13产生噬菌体抗体全库。酶切鉴定轻链库和全库有无插入片段。结果提取的淋巴细胞总RNA质量好,部分重链Fd片段、部分κ轻链和λ轻链cDNA得到扩增。F ab全库库容达5.4×106,酶切证实有插入片段。结论本研究构建的人天然F ab段噬菌体抗体库可为进一步筛选特异性抗体及从肿瘤组织中提取肿瘤抗原用于免疫治疗奠定基础。
- 马小兵畅继武王海涛王馨马腾骧
- 关键词：噬菌体抗体库抗体FAB段抗体工程
- 糖基化磷脂酰肌醇锚定型人B7-1融合蛋白在CHO/DHFR-细胞的稳定表达被引量：2
- 2005年
- 目的建立稳定表达糖基化磷脂酰肌醇锚定型人B71(GPIB71)的CHO/DHFR-细胞表达体系。方法用Lipofectin介导法将真核细胞高效表达载体pCDNA3GPIB71和pSV40DHFR共转染CHO/DHFR-细胞,经免疫荧光流式细胞术检测,并提取膜蛋白进行Westenblot检测。结果经G418筛选和MTX加压扩增,获得高效表达目的蛋白的细胞株。膜蛋白经WesternBlot检测具有生物活性。结论GPIB71在CHO/DHFR-细胞中高效表达,为临床应用与研究奠定了基础。
- 张淑敏畅继武随志方李振莉马富玲王馨
- 关键词：真核表达
- 肾恶性横纹肌样瘤三例报告被引量：3
- 2005年
- 张淑敏畅继武王馨张新赵津辉
- 关键词：肾恶性横纹肌样瘤免疫组织化学
- 糖基化磷脂酰肌醇锚定型人B7-1基因重组蛋白锚定自体肿瘤细胞膜提高抗肿瘤免疫反应的实验研究被引量：2
- 2005年
- 目的研制抗肿瘤免疫治疗的新疫苗。方法用含目的基因的质粒pcDNA3-GPI-B7-1转染CHO/DHFR+细胞,提取膜蛋白GPI-B7-1,经Western blot鉴定后,用蛋白转化法锚定在肿瘤细胞膜上,免疫C57BL/6小鼠后,取小鼠脾细胞进行T细胞扩增和CTL功能检测,并检测细胞培养液和小鼠血清中IL-2、TNF-α和IFN-γ水平。结果用GPI-B7-1修饰的肿瘤细胞膜免疫小鼠后可诱发肿瘤特异性T细胞扩增和CTL活性增强,细胞培养液中细胞因子检测为阳性。结论该疫苗能激发小鼠的免疫功能,具有一定的保护小鼠免受肿瘤细胞侵袭的作用。
- 张淑敏畅继武马富玲王海涛王馨张新刘凤勇
- 关键词：基因重组蛋白自体细胞肿瘤细胞膜抗肿瘤免疫反应
- 强化树突状细胞诱导特异性CTL的疗效观察
- 畅继武李振莉隋志方汤洋庞志宇张淑敏马富玲李宝成王馨马腾骧马腾骧
- 该项目为两种肿瘤疫苗体内外激活CTL效应的比较性研究，包括体内、体外两部分实验。建立了利用实体瘤提取肿瘤相关抗原肽，冲击抗原递呈细胞，转化自体T淋巴细胞为CTL的技术路线。对60例肿瘤志愿者进行了回输2-3个疗程，取得了...
- 关键词：
- 用糖基化磷脂酰肌醇B7-1锚定肿瘤细胞膜进行免疫治疗被引量：4
- 2007年
- 目的研制抗肿瘤免疫治疗的新疫苗。方法用蛋白转化法将B7-1锚定在肿瘤细胞膜上,免疫C57BL-6小鼠后,一组小鼠取脾细胞进行T细胞扩增和细胞毒T淋巴细胞(CTL)功能检测,另一组小鼠进行肿瘤细胞接种试验。结果用GPI-B7-1修饰的肿瘤细胞膜免疫小鼠后诱发了肿瘤特异性T细胞扩增和CTL。且该疫苗有一定的保护小鼠免受肿瘤细胞侵袭的作用。结论GPI蛋白转化法为人类抗肿瘤免疫治疗提供了新的、有效的修饰肿瘤细胞膜的方法。
- 张淑敏畅继武马富玲隋志方王馨张新刘凤勇
- 关键词：肿瘤细胞膜免疫治疗
- 人天然Fab段噬菌体抗体库的构建及初步鉴定被引量：5
- 2006年
- 目的构建人天然Fab段噬菌体抗体库,建立人源抗体制备技术平台,为恶性肿瘤的免疫治疗提供新方法。方法从一个健康献血员取200ml新鲜血液,分离淋巴细胞,提取总RNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增抗体轻链和重链Fd段cDNA,依次将PCR产物插入载体pComb3相应位点,电穿孔转化感受态大肠杆菌XL1-Blue,加入辅助噬菌体VCSM13产生噬菌体抗体库,酶切和PCR鉴定有无插入片段,用白蛋白和IL-2作为抗原进行筛选富集。结果部分重链Fd片段、部分κ轻链和λ轻链cDNA得到扩增。Fab表达库容达约1·2×106,酶切和PCR显示有插入片段。用不同蛋白进行几轮筛选,抗体库得到了不同程度的富集。结论本研究构建的人天然Fab段噬菌体抗体库可为进一步筛选特异性抗体,用于免疫治疗打下基础。
- 马小兵畅继武王海涛王馨马腾骧
- 关键词：噬菌体抗体库抗体FAB段抗体工程
- 人天然噬菌体抗体库的构建及抗gp96抗体的初步筛选
- 2009年
- 目的构建人天然Fab段抗体库，并用从膀胱尿路上皮癌组织中提取纯化的gp96筛选抗gp96特异性抗体，为恶性肿瘤的免疫治疗提供新方法。方法取4个健康献血员新鲜血液各200ml，分离淋巴细胞，提取总RNA，经逆转录合成cDNA，设计多对引物，以PCR扩增抗体轻链和重链Fd段cDNA。轻链PCR产物和噬粒载体pComb3经Sac Ⅰ和Xba Ⅰ酶切，由T4 DNA连接酶连接，电穿孔转化感受态大肠杆菌XL1-Blue，扩增后提取噬粒，构建轻链库。轻链库和重链Fd段PCR产物经Xho Ⅰ和Spe Ⅰ酶切，以同样方法连接后转化XL1-Blue，加入辅助噬菌体VCSM13，产生噬菌体抗体全库。提取噬粒酶切鉴定轻链库和全库有无插入片段。分别以噬菌体全库和提取的噬粒为模板，以轻、重链不同引物组合进行PCR扩增。应用亲和层析和离子交换层析从膀胱癌组织中提取纯化gp96，并以此为抗原对构建的抗体库进行3轮筛选。结果提取的淋巴细胞总RNA及逆转录合成的cDNA质量好，部分重链Fd片段、部分κ轻链和λ轻链cDNA得到扩增。Fab全库库容达6．6×10^6，酶切和PCR显示有插入片段。用从膀胱尿路上皮癌组织中提取出的gp96进行3轮筛选，抗体库得到68倍的富集。结论本研究构建的人天然Fab段噬菌体抗体库可为进一步筛选特异性抗体、肿瘤免疫治疗打下基础。
- 马小兵畅继武李成文李慧忠王馨
- 关键词：噬菌体抗体库抗体FAB段GP96膀胱尿路上皮癌
