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杆状病毒表达SARS冠状病毒核蛋白抗原性的研究被引量：3: 2005年; 目的　对杆状病毒表达SARS冠状病毒NP抗原性进行分析与比较。方法　利用SDS PAGE、Western Blot和ELISA证明重组核蛋白(rSN)在昆虫细胞获得高效表达,具有特异免疫反应原性。结果　表达rSN的昆虫细胞裂解、稀释后直接包被ELISA板,来检测SARS CoV康复病人血清特异抗体,敏感性稍高于Vero细胞培养的全病毒(OD分别为2 .8和0 .6 ) ,与健康人血清不发生特异反应(OD值为0 .0 1) ;表达rSN昆虫细胞用于间接免疫荧光,快速检测血清特异抗体反应,同样表现了良好的敏感性和特异性。结论　昆虫细胞表达rSN有望替代SARS CoV全病毒,作为安全、敏感和特异的诊断抗原,应用于ELISA和IFA血清学检测。; 胡森王喜军王清华吴东来邓国华王笑梅步志高; 关键词：SARS冠状病毒核蛋白重组杆状病毒 IFA

杆状病毒表达SARS冠状病毒核蛋白作为诊断抗原的研究: 研究结果表明,昆虫细胞表达的重组SARS-CoV N蛋白具有免疫反应原性良好,制备简便,来源丰富,有望替代VeroE6细胞生产的SARS-CoV全病毒抗原,研制安全经济、敏感特异的ELISA和IFA诊断试剂,应用于动物或...; 胡森王喜军王清华邓国华王笑梅吴东来步志高; 关键词：杆状病毒 SARS冠状病毒诊断抗原严重急性呼吸道综合症昆虫细胞; 文献传递

重组杆状病毒表达尼帕病毒融合蛋白和受体结合蛋白的研究被引量：6: 2006年; 构建了表达尼帕病毒（Nipahvirus，NiV）囊膜功能糖蛋白F和G的重组杆状病毒rBac—NF、rBac-NG。Westem-blot证实大小分别为61kD和66kD的重组融合蛋白（rNF）和受体结合蛋白（rNG）分别在rBac—NF、rBac-NG感染的昆虫细胞中获得表达，并且rNF前体F0可在昆虫细胞内进一步有效裂解为F1（～49kD）和F2；采用兔抗NiV病毒高免血清间接免疫荧光检测重组杆状病毒表达F和G蛋白显示出良好的特异免疫反应原性。以rBac。NF、rBac—NG感染的昆虫细胞裂解液稀释后直接包被ELISA板，间接ELISA检测兔抗灭活NiV全病毒高免血清中的F和G蛋白特异性抗体，同样具有良好的敏感性和特异性；以rBac—NF和rBac—NG感染昆虫细胞培养物直接免疫BALB／c小鼠，可诱导显著的NiVF和G蛋白特异体液免疫反应，产生的特异抗体可有效中和NiV囊膜蛋白F和G介导的伪型VSV重组病毒侵入NiV易感宿主细胞的感染性。结果表明，杆状病毒表达重组F和G蛋白抗原具有替代NiV全病毒，作为安全、经济、敏感和特异的诊断抗原的潜力，并为重组病毒亚单位疫苗防制尼帕病毒性脑炎的探索研究奠定了基础。; 王喜军胡森葛金英王清华秦立廷步志高

杆状病毒表达SARS冠状病毒核蛋白作为诊断抗原的研究: 2004年; 　　严重急性呼吸道综合症(SARS)是新出现的人类病毒性传染.作为新发传染病,人类对SARS-CoV具有高度的易感性.SARS-CoV感染者大量表现为隐形感染或一过性非典型肺炎症状.同时,种种迹象显示动物,特别是野生动物可能是该病毒的自然储藏宿主或传播宿主.开展广泛、严密的血清学调查,对流行病学监测、查清自然或传播宿主SARS-CoV源意义重大.……; 胡森王喜军王清华邓国华王笑梅吴东来步志高

裂谷热诊断与免疫防制技术的研究: 本研究构建了分别表达 RVFV 囊膜蛋白 G/(N+C/)、GN 及 GC 的重组杆状病毒rBac-G/(N+C/)、rBac-GN 及 rBac-GC。SDS-PAGE、Western-blot 表明分子量分别为56K...; 王清华; 关键词：囊膜蛋白重组杆状病毒; 文献传递

重组布氏杆菌BP26蛋白和OMP31蛋白作为间接ELISA诊断抗原的研究被引量：16: 2006年; 目的传统布氏杆菌病血清学方法因其抗原构成复杂,存在较严重的交叉免疫反应性,导致结果判定困难。BP26及OMP31分别为布氏杆菌细胞周质蛋白及外膜蛋白,在感染牛、绵羊、山羊、犬和人类均为优势免疫原,且在抗原性上具有较好的布氏杆菌种属特异性。方法以大肠杆菌表达、纯化的BP26和OMP31重组蛋白为包被抗原,初步建立了检测血清特异抗体的间接ELISA方法,并以现地牛布氏杆菌普查检测血清100份为样本,与传统的试管凝集试验进行了比较研究。结果试管凝集试验血清样本阳性率为15%(15/100);BP26包被抗原ELISA检测判为阳性的12个样本中有11为试管凝集反应阳性,相对阳性率为73.3%,二者阳性符合率为92%(11/12);而采用OMP31为包被抗原,阳性检出率为0(图5)。结论被检测区域阳性牛主要感染布氏杆菌为牛种布氏杆菌(B.abortus天然缺失OMP31基因);BP26作为间接ELISA包被抗原用于牛布氏杆菌血清学检测具有良好的特异性及较好的敏感性。; 陈伟业王淑杰王永胡森王清华辛九庆佟有恩黄克和步志高; 关键词：间接ELISA 试管凝集试验

重组杆状病毒表达裂谷热囊膜蛋白的研究被引量：1: 2006年; 裂谷热(Rift valley fever,RVF)是由裂谷热病毒(RVFV)引起的烈性人兽共患传染病。囊膜糖蛋白G是病毒的主要结构蛋白,由基因组M节段编码,翻译后裂解为GN和GC,其中GN为诱导中和抗体的主要免疫原。本研究构建了分别表达RVFV囊膜蛋白G(N+C)、GN及GC的重组杆状病毒rBac-GCN+Cr、Bac-GN及rBac-GC。SDS-PAGE、Western-Blot表明分子量分别为56 Ku、58 Ku左右的重组GN和GC在rBac-GCN+Cr、Bac-GN及rBac-GC感染sf9昆虫细胞中获得表达,并具有特异免疫反应原性。以rBac-GNr、Bac-GC和rBac-G(N+C)感染的昆虫细胞裂解物稀释后直接包被ELISA板,检测灭活RVFV免疫小鼠血清特异囊膜蛋白GN、GC特异抗体,显示出高度敏感性和特异性。结果表明,杆状病毒表达rGNr、GC和rG(N+C)具有替代RVFV全病毒(尤其是rGN),作为非疫区安全、敏感和特异的诊断抗原的潜力,并为RVF重组亚单位疫苗的探索研究奠定了基础。; 王清华王喜军胡森步志高; 关键词：囊膜蛋白重组杆状病毒 ELISA

表达尼帕病毒G囊膜糖蛋白重组牛痘病毒的研究被引量：6: 2006年; 采用牛痘病毒WR株,构建了表达哺乳动物密码子优化的NiV G蛋白基因的重组病毒rWR-NiV-G。Westernblot证实大小为66kDa的重组G蛋白在rWR-NiV-G感染的Hela细胞中获得表达;采用兔抗NiV高免血清间接免疫荧光检测重组痘病毒表达G蛋白显示出良好的特异免疫反应原性。rWR-NiV-G感染NiV敏感的BHK细胞系,并与NiV融合蛋白F共同表达,可形成强烈细胞融合现象。rWR-NiV-G感染免疫BALB/c小鼠,可诱导显著的NiV G蛋白特异体液免疫反应。以原核表达NiV G蛋白片段为包被抗原,间接ELISA检测rWR-NiV-G感染免疫小鼠血清中的G蛋白特异抗体,具有良好的敏感性和特异性。同时,rWR-NiV-G感染免疫小鼠血清中的G蛋白特异抗体可有效中和NiV囊膜蛋白F和G介导的伪型VSV重组病毒侵入NiV易感宿主细胞的感染性。结果表明,重组牛痘病毒表达的NiV G蛋白有良好的免疫原性和生物学活性功能,为进一步深入研究NiV G蛋白生物学功能、免疫原性及重组活载体疫苗研究奠定了重要基础。; 王喜军王清华葛金英胡森步志高; 关键词：尼帕病毒 G蛋白

重组痘病毒表达裂谷热病毒囊膜蛋白及其免疫原性分析被引量：4: 2007年; 裂谷热(Rift valley fever,RVF)是由裂谷热病毒(Rift valley fever virus,RVFV)引起的烈性人畜共患传染病。囊膜糖蛋白G是病毒的主要结构蛋白,由基因组M节段编码,翻译后裂解为Gn和Gc,其中Gn为诱导中和抗体的主要免疫原。本研究分别构建了表达RVFV囊膜蛋白G(n+c)和Gn的重组痘病毒rVV-G (n+c)和rVV-Gn。SDS-PAGE、Western blot结果表明分子量分别为56 Ku(Gn)、58 Ku(Gc)左右的重组蛋白在rVV-G(n+c)和rVV-Gn哺乳动物细胞获得准确表达[G(n+c)裂解为Gn和Gc],并具有特异免疫反应原性。以rBac-G(n+c)和rBac-Gn感染的昆虫细胞裂解物为包被抗原,间接ELISA检测血清抗体结果显示,rVV-G (n+c)和rVV-Gn免疫小鼠可诱导显著的Gn、Gc特异抗体反应,并且rVV-G(n+c)免疫诱导主要保护性免疫原Gn特异抗体反应效果优于rVV-Gn。结果表明,表达全长囊膜糖蛋白重组痘病毒rG(n+c)具有作为安全有效的重组病毒活载体疫苗的潜力,为RVF重组亚单位疫苗的探索研究奠定了基础。; 王清华胡森王喜军步志高; 关键词：囊膜蛋白 ELISA

重组痘病毒表达SARS冠状病毒纤突蛋白及其免疫原性分析被引量：1: 2007年; 对牛痘病毒弱毒株表达的SARS冠状病毒纤突蛋白(Spike protein,S)的免疫原性进行分析与比较。以减毒痘病毒(WR株)为载体重组了SARS冠状病毒全长S基因(rWR-SARS-S)。SDS-PAGE和Western blot试验表明,迁移率约为190kD的重组SARS S蛋白可在HeLa细胞中表达,而且可以被鸡抗SARS全病毒高免血清识别,具有特异免疫反应原性。进一步研究表明,rWR-SARS-S感染的细胞在IFA试验中可与鸡抗SARS的高免血清发生特异反应,具有良好的敏感性和特异性。以104PFU的rWR-SARS-S免疫BALB/c小鼠产生的抗体在间接ELISA试验中可以被S蛋白识别,产生特异抗原抗体反应。利用痘病毒表达的SARS冠状病毒S蛋白具有良好的抗原性和生物学活性,可替代SARS冠状病毒全病毒,为研究安全、敏感和特异的重组诊断抗原奠定了重要基础。; 胡森王清华王喜军王笑梅步志高; 关键词：SARS冠状病毒纤突蛋白 IFA

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王清华

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