王吉庆
- 作品数：9 被引量：31H指数：4
- 供职机构：解放军第210医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- N-甲基-D-门冬氨酸受体主亚基单克隆抗体抗谷氨酸兴奋毒性的体外实验研究被引量：7
- 2003年
- 目的 研究人N 甲基 D 门冬氨酸受体 (NMDAR ,NR)主亚基 (NR1)单克隆抗体mAbN1是否对兴奋毒性脑损害有防护作用。方法 取 10只新生大鼠海马神经细胞进行体外原代培养 ,建立了谷氨酸对培养海马神经细胞兴奋毒性神经损伤模型 ,观察抗体保护后神经细胞形态 ,检测细胞存活率 (锥虫蓝拒染法 )和细胞培养上清乳酸脱氢酶漏出量 ,每组 2个平行皿 ,实验重复 4次。结果 经 0 .3μmol/LmAbN1预处理后 ,神经元具有明显抗谷氨酸兴奋毒性损伤能力 ,存活率提高 35 % ;抗体表位合成肽可以阻断这种保护 ,提示该抗体的保护功能是特异性的。结论 NR1单克隆抗体mAbN1具有体外抗兴奋毒作用 。
- 康晓楠孙长凯范明丁爱石赵杰王吉庆韩大跃施广霞
- 关键词：N-甲基-D-门冬氨酸受体体外实验细胞培养缺血性脑损伤
- 红藻氨酸诱导性癫痫中IL-6与c-Fos表达的比较被引量：4
- 2003年
- 目的 探讨红藻氨酸 (KA)诱导性癫痫发作中相关脑区白细胞介素 6(IL 6)表达的时空规律和细胞学特征及其与c Fos的比较。方法 采用惊厥剂量KA(1 0mg·kg- 1 ,ip)诱导大鼠癫痫发作 ,记录行为 ,并分别取KA处理后 1 5、30min ,1、3、6、1 2及 2 4h的大鼠脑片 ,用免疫组化方法观察海马结构、梨状区及大脑皮层等相关脑区IL 6免疫反应 (IL 6ir)的变化特征 ,并与相应时空内的c Fos免疫反应 (Fos ir)相比较。结果 IL 6和c Fos均出现了在癫痫发作早期的快速表达 ,但IL 6ir的早期反应更为明显。KA后 1 5min海马结构内若干血管壁出现了明确的IL 6ir,30min时海马各亚区、梨状区、大脑皮层部位开始出现较强的IL 6ir阳性神经元 ,其数量明显多于阳性胶质细胞 ,KA后 3h以上各脑区IL 6ir进一步增强 ,6h后阳性神经元免疫反应性减弱 ,1 2～2 4h继续减弱 ,但阳性胶质细胞数量及IL 6ir强度变化不明显。与IL 6ir相比 ,Fos ir的变化较为短暂并且强度较弱 ,KA后 30min ,齿状回颗粒细胞层、海马各亚区锥体细胞层及梨状区等部位出现了微弱的Fos ir。结论 KA诱导癫痫发作过程中IL 6在相关脑区神经元内的表达迅速增加 ,明显早于c Fos。
- 孙艺平孙长凯范明赵杰韩大跃王吉庆付雷王冬梅彭岩宫德正戴淑芳徐红
- 关键词：癫痫红藻氨酸白细胞介素6免疫反应性
- 北方驻岛官兵症状性腰腿痛调查被引量：2
- 2001年
- 钟远声孙成信尹安民王吉庆韩涛张雪冰位应显
- 傅里叶变换红外光谱分析NMDA受体单克隆抗体抗兴奋毒损伤机理被引量：3
- 2003年
- 人N 甲基 D 门冬氨酸受体 (NMDAR ,NR)单克隆抗体MABN1具有明确的抗兴奋毒保护作用 ,但其机制不明 .以MABN1和MK 80 1分别预处理海马细胞 ,拮抗谷氨酸兴奋毒损伤作用 ,采用傅里叶变换红外光谱(FTIR)技术 ,对不同处理后的海马细胞红外光谱特性进行比较 .将去卷积的酰胺Ⅰ带进行曲线拟合后发现 ,MABN1组与MK 80 1组的蛋白质二级结构有明显不同 。
- 康晓楠孙长凯范明宋占军赵杰王吉庆施广霞
- 关键词：NMDA受体单克隆抗体海马神经元中枢神经系统
- NO对红藻氨酸癫痫发作和IL-6表达的影响被引量：4
- 2003年
- 目的 探讨脑内一氧化氮 (NO)介质对癫痫发作及白细胞介素 6(IL 6)表达的影响。方法 采用红藻氨酸 (KA)诱导大鼠癫痫发作 ,以一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂L 硝基精氨酸 (L NNA)和NO前体L 精氨酸 (L Arg)进行干预 ,从行为学评估及形态学的角度 ,对KA癫痫发作和IL 6的相关变化做了观察。结果 一次惊厥剂量的KA (1 0mg·kg- 1 )可使动物发生明显的时间相关性癫痫发作 ,并伴随着海马结构、梨状区及大脑皮层等相关脑区IL 6免疫反应(IL 6ir)的快速升高与增强。而经L NNA(50mg·kg- 1 )或与其等摩尔量的L Arg(40mg·kg- 1 )预处理后 ,其癫痫行为发生了明显变化。L NNA促进和加重了癫痫发作 ,KA给药后 3h许多动物死亡 ,而L Arg可使癫痫发作行为减缓。与行为干预相对应 ,L NNA对海马结构等相关脑区内的IL 6ir有明显的上调作用 ,L Arg则显示出相反的效应。结论 内源性NO介质对KA癫痫发作具有抑制作用 ,对IL 6的快速表达具有下调作用 。
- 孙艺平孙长凯范明赵杰韩大跃王吉庆宫德正戴淑芳徐红
- 关键词：L-硝基精氨酸L-精氨酸红藻氨酸癫痫白细胞介素6
- 人NR1靶片段的原核表达被引量：5
- 2002年
- 目的 :克隆人N_甲基_D_门冬氨酸受体 (NMDAR ,NR)靶片段cDNA ,构建其原核表达载体并建立相应的表达体系。方法 :用常规RT_PCR法从脑肿瘤切除组织中克隆人NR1靶片段cDNA ,测序鉴定后构建其原核表达载体 ,并在大肠杆菌DH5α中升温诱导表达 ,表达产物通过SDS_PAGE分析及免疫印迹分析进行鉴定。结果 :成功克隆了人NR1靶片段 4 89bp长cDNA ,测序结果与文献报道一致 ,原核表达载体在宿主菌中诱导表达后得到了NR1蛋白靶片段的高效表达产物 ,占全菌体 15 %～ 30 %。SDS_PAGE及免疫印迹分析与预计相同。结论
- 刘淑红孙长凯张玉梅范明韩大跃王吉庆袁博
- 关键词：基因克隆原核表达
- 人N-甲基-D-门冬氨酸受体主亚基受体激活相关多肽的理化特性与抗原性分析被引量：10
- 2002年
- 目的 分析人N 甲基 D 门冬氨酸受体 (NMDAR)主亚基NR1a上两个受体激活相关多肽P1、P2的抗原性及其理化特性。方法 用GOLDKEY软件从蛋白质数据库中调出人NR1a分子的氨基酸序列 ,分别在其第一、第三跨膜域前后逆向、顺向截取 15 1和 14 4个氨基酸长度的多肽片段P1与P2 ,选取Hopp&Woods与Kyte亲水性、Janin表面可及性、Karplus Schulz主链柔韧性及Welling抗原性等参数予以多参数分析 ,采用Prosite程序与Chou Fasman方法比较其氨基酸位点与二级结构特征 ,以此为基础综合判定P1与P2片段的抗原位点并与已有的实验结果相比较。结果 P1、P2多肽片段上可能分别有 6和 7个 8～ 15aa长序列具有良好的抗原性。P1相关序列主要分布于其氨基端 ,与配体结合关键氨基酸残基相距较远。P2上的相关序列分布较均匀 ,包含有受体激活重要相关位点或与配体结合关键氨基酸残基距离较近。P2片段的总体抗原性、亲水性与可及性均强于P1,尤以其近膜的 15个残基为著。P1、P2多肽片段均含有一定数量的 β 转角 ,但P1片段含有较多的半胱氨酸残基和无规卷曲 ,而P2片段则含有较多的芳香族残基并以α螺旋结构为主。结论 人NMDAR主亚基NR1a上的两个受体激活相关多肽P1、P2均具有一定数量的抗原位点 ,与P1相比较 ,P2可能更易成为NMDAR免?
- 孙长凯赵杰李伍举冯健男刘淑红朱克王吉庆尹安民韩大跃张万琴姜潮姜长斌聂志余王耀山包礼平范明
- 关键词：神经免疫调节抗原氨基酸类
- 计算机辅助设计提高人NMDA受体主亚基M3-M4环在E.coli中的表达被引量：1
- 2003年
- 基于对螺旋区随机堆积的RNA二级结构的预测和密码子偏性计算 ,建立了pBV2 2 0载体中外源基因高效表达的判别模型。该模型认为 ,外源基因的表达水平与其 5′端 30～ 39区域 ,以及 3′端 30～ - 39区域的RNA二级结构自由能具有显著的统计学意义 ;其次与 3′端 9bp的局部密码子偏性相关。据此模型 ,使用RNAfold和Goldkey软件优化改构设计了用于克隆表达人NMDA受体主亚基M3 M4环的引物。将PCR扩增的基因克隆入pBV2 2 0载体中 ,在大肠杆菌DH5α宿主中获得了高效表达 (表达水平在 2 0 %以上 )。
- 张玉梅孙长凯范明李伍举赵杰韩大跃王吉庆吴加金
- 关键词：计算机辅助设计基因克隆N-甲基-D-门冬氨酸受体
- L-精氨酸、L-硝基精氨酸对红藻氨酸诱导大鼠癫痫及其海马结构中iNOS mRNA表达的影响被引量：2
- 2003年
- 目的 观察诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)在红藻氨酸(KA)癫痫大鼠海马内的表达及L 精氨酸 (L Arg)和L 硝基精氨酸 (L NNA)慢性干预的影响。方法 采用惊厥剂量的KA(1 0mg·kg- 1 )诱导大鼠癫痫发作 ,以NOS抑制剂L NNA(50mg·kg- 1 )和NO前体L Arg(40mg·kg- 1 )进行干预 ,对大鼠的癫痫发作行为及KA后不同时间点的海马内i NOSmRNA ,通过RT PCR观察其表达。结果 KA可使动物发生时间相关性癫痫发作 ,L NNA预处理后使KA诱导的癫痫发作明显加重 ,而L Arg预处理后使KA诱导的癫痫发作减弱。iNOSmRNA在KA处理后 3h开始有微弱的表达 ,且随着时间的延长逐渐增加 ,2 4h达到最高水平 ,2d及3d时未见表达 ,但 7d时又出现高表达 ;经L NNA预处理的动物 ,KA后 1h其海马结构中未出现iNOSmRNA ,但L Arg预处理后再给予KA后 1h ,可见微弱的iNOSmRNA表达。结论 红藻氨酸给药后一定时间 ,癫痫大鼠海马结构中可出现iNOSmRNA表达 ,L
- 孙艺平孙长凯范明赵杰韩大跃王吉庆王冬梅彭岩宫德正傅雷戴淑芳徐红
- 关键词：诱导型-氧化氮合酶L-硝基精氨酸L-精氨酸红藻氨酸癫痫
