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Apelin基因促进人脐带华通胶间充质干细胞定向心肌样细胞诱导分化的实验研究: 我国的心血管患病率处于持续上升阶段，据不完全统计显示，目前全国患病人数已达2.3亿，即平均每5个成年人中就有1人患有心脏疾病，全国每年死于心脏疾病的患者约有350万，其中急性心肌梗死是主要死因。虽然药物、介入、外科搭桥等...; 王力; 关键词：间充质干细胞细胞分化慢病毒属细胞分化 APELIN 5-氮胞苷; 文献传递

5-氮胞苷联合碱性成纤维生长因子诱导人胚胎干细胞定向心肌样细胞分化的实验研究被引量：1: 2017年; 目的探讨5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)联合碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)体外诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,h ESCs)定向分化为心肌样细胞的可行性。方法采用小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEF)作为饲养层细胞体外培养h ESCs,经悬浮培养形成拟胚体(embryoid bodies,EB),贴壁后分为无诱导剂组(对照组)、5-aza诱导组、b FGF诱导组、5-aza+b FGF联合诱导组4组诱导培养。诱导时间为2周。倒置相差显微镜下连续动态观察细胞形态学变化,并计算各组出现自发搏动的EB,以定量聚合酶链反应检测心肌细胞特异性基因NKX2.5、GATA4、α-actin,免疫荧光法检测心肌特异性肌钙蛋白T(cardiac troponin T,c Tn T)。结果 EB克隆贴壁诱导3~4 d后部分细胞出现自发性节律性搏动,以5-aza+b FGF联合诱导组为著。14 d后定量聚合酶链反应检测示5-aza+b FGF联合诱导组NKX2.5、GATA4、α-actin表达显著高于其他3组(P<0.05)。免疫荧光法示5-aza+b FGF联合诱导组c Tn T的表达最为明显(P<0.05)。结论 h ESCs在体外经5-aza+b FGF联合诱导后可定向心肌细胞分化,该诱导方案为心肌再生与组织工程领域的研究奠定了基础。; 王力方志荣高连如张宁坤徐小红朱智明; 关键词：心肌细胞细胞分化人胚胎干细胞 5-氮胞苷碱性成纤维生长因子

心脏发育的信号调控与先天性心脏病的关系被引量：3: 2013年; 心脏发育起源于原肠胚阶段位于前侧板中胚层的生心区,生心区祖细胞在特异细胞因子、诱导信号及核心转录因子构成的调控网络作用下分化为心肌前体细胞,心脏发育过程中的基因变异或发育环境变化可影响调控网络中的多个环节,最后导致先天性心脏病的发生。因此,研究心脏发育过程中的信号调控机制对于探讨先天性心脏病的发生机制具有重要的理论及临床意义。目前研究证实Nkx2.5、GATA4、Tbx5、Isl-1等众多早期转录因子均参与了心脏发育的基因调控网络,但网络中大部分信号通路的研究尚不深入。本文就目前研究较多的心肌前体细胞、Nkx2.5、GATA4、Tbx5、Isl-1等转录因子以及Apelin/APJ信号通路的近期研究进展作一简要综述。; 王力汤楚中朱智明; 关键词：心脏胚胎发育先天性心脏病信号转导转录因子

慢病毒载体介导apelin基因转染人脐带间充质干细胞的实验研究被引量：2: 2013年; 目的构建带有荧光标记基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和apelin基因的重组质粒pUbi-apelinFLAG-pSV40-EGFP并进行慢病毒包装,探讨其转染人脐带间充质干细胞的最佳感染复数(MOI)值及目的基因表达情况。方法化学合成目的基因片段并扩增。采用In-Fusion技术将酶切后的目的基因片段与线性质粒载体连接,转化入感受态DH5α细胞中后筛选阳性克隆并进行测序。重组质粒慢病毒载体转染293T细胞,包装慢病毒并测定滴度。将重组质粒慢病毒按不同MOI值转染人脐带间充质干细胞,根据转染效率得到最佳MOI值,并采用Real-timePCR及Western blot方法检测目的基因表达情况。结果通过PCR扩增获得酶切位点碱基修饰后的大小约284 bp的目的基因片段,与慢病毒质粒载体连接后形成pUbi-apelin-FLAG-pSV40-EGFP重组质粒,测序结果与预期完全符合,并成功包装慢病毒颗粒。最佳MOI值为20,转染效率为(90.32±3.61)%。慢病毒载体能高效转染人脐带间充质干细胞且2周内持续稳定上调目的基因mRNA及蛋白的表达。结论重组质粒慢病毒载体pUbi-apelin-FLAGpSV40-EGFP可有效转染人脐带间充质干细胞,并可持续高表达apelin基因。; 王力张宁坤徐小红郑楠高连如朱智明; 关键词：间质干细胞慢病毒属转染 APELIN

可注射水凝胶在心肌梗死治疗中的研究进展被引量：1: 2013年; 急性心肌梗死后由于大量心肌细胞坏死、纤维瘢痕形成等原因造成心室重构和心功能下降，严重影响心梗患者的远期预后。天然材料或人工合成的水凝胶是一种新兴的生物替代材料，具有良好的亲水性和组织相容性，可模拟心肌细胞微环境的生化和机械特性，目前已广泛地应用于心肌梗死的治疗研究中。水凝胶可单独应用，也可作为细胞腐物运载工具和平台。研究表明：将水凝胶一干细胞一药物复合物进行心肌注射后，可以增加室壁厚度，促进新生血管形成，提高移植干细胞的存活率，并实现生物活性药物的控释，在一定程度上抑制梗死后心室重构，促进心功能的恢复。就目前可注射水凝胶在治疗心肌梗死方面的相关研究进展作一综述。; 王力朱智明; 关键词：干细胞细胞治疗心室重构心肌梗死

华通胶源间充质干细胞经冠状动脉移植治疗慢性缺血性心肌病的实验研究被引量：9: 2015年; 目的探讨华通胶源间充质干细胞(WJMSCs)经冠状动脉移植治疗猪慢性缺血性心肌病(CIMP)的安全性和有效性。方法巴马小型猪29头,其中25头行左冠状动脉前降支球囊闭塞制作心肌梗死后CIMP模型,以超声心动图检查左室射血分数(LVEF)≤45%为CIMP成功标准,其余4头为假手术(Sham)组。造模成功17头,3头未成功,5头死亡,研究初始6头CIMP模型猪(3头成功造模+3头造模未成功)先行WJMSCs经冠状动脉移植剂量选择安全性实验,依次以6×106、1×107、2×107剂量经冠状动脉移植,每剂量组小型猪2头,造模成功与未成功者各1头,以TIMI 3级为安全剂量。余14头CIMP模型猪被随机分为WJMSCs移植组和对照组(n=7),分别经冠状动脉移植WJMSCs(2×107),或注入生理盐水。在WJMSCs移植8周后,对两组模型猪进行超声心动图、病理组织学、免疫荧光学检测。结果 CIMP小型猪在WJMSCs移植8周后,LVEF较移植前增高11.6%(P<0.01),左室收缩末容积减少4.1ml(P<0.05),而对照组心室功能进一步恶化(LVEF从42.8%下降为35.9%,P<0.01),左室进一步扩张(左室舒张末容积从42.8±1.2ml进展为46.7±1.3ml,P<0.05)。病理组织学检查显示WJMSCs移植组梗死区心室壁厚度明显增厚,梗死边缘区血管密度明显增加。免疫荧光检测可见带有Myc标志的WJMSCs在梗死心肌内存活,且与心肌肌钙蛋白T、α-actin和Connexin-43共表达。结论经冠状动脉移植WJMSCs治疗猪慢性CIMP是安全、有效的。; 张宁坤陈宇王志国李俊风王丽华朱智明王力高连如; 关键词：间质干细胞移植冠状血管心肌缺血

左西孟坦治疗扩张型心肌病急性心力衰竭的疗效观察被引量：7: 2018年; 扩张型心肌病（dilatedcardiomyopathy，DCM）的主要特征是单侧或双侧心腔扩大，心肌收缩功能减退，发生充血性心力衰竭的风险较高，临床病死率高，预后不良。既往临床研究认为，DCM患者在症状出现后5年内的存活率约40％。如何对DCM患者进行长期、有效的抗心衰治疗，从而降低病死率成为心力衰竭研究领域的一个热点问题。; 刘丽丽王力方志荣; 关键词：扩张型心肌病急性心力衰竭临床疗效无病生存率

Apelin-13对5-Aza诱导脐带间充质干细胞向心肌细胞分化的影响被引量：7: 2013年; 目的探讨apelin-13蛋白在体外对5-氮胞苷(5-Aza)诱导人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)向心肌细胞分化的影响。方法采用组织块贴壁法培养hUC-MSCs,胰酶消化传代;取P2代细胞置于不同分化条件的培养液中分化培养14d,实验分为A、B、C、D组(apelin-13浓度分别为0、1×10-6、2×10-6和10×10-6mol/L),各组培养基中5-Aza浓度均为10×10-6mol/L。采用流式细胞仪检测hUC-MSCs表面免疫标记,MTT法检测细胞在570nm处的吸光度(A)值,RTPCR检测肌钙蛋白T(cTnT)、GATA-4 mRNA表达水平,免疫组织化学染色法检测心肌细胞表面标志物cTnT的表达。结果流式细胞仪鉴定结果表明,hUC-MSCs表达CD44、CD90、CD105、CD73、经典人类白细胞抗原Ⅰ类抗原(HLAABC),不表达CD34、CD45、经典人类白细胞抗原Ⅱ类抗原(HLA-DR)。MTT检测显示,0、10×10-6mol/L apelin-13处理的hUC-MSCs在570nm处的A值分别为0.841±0.290、0.875±0.325,差异无统计学意义(P>0.05)。B、C、D组cTnT mRNA表达水平分别是A组的2.09±1.35、5.24±1.30、1.17±0.63倍,B、C、D组GATA-4 mRNA表达水平分别是A组的2.68±1.18、4.82±0.14、2.14±0.27倍;C组与B、D组比较,cTnT、GATA-4 mRNA表达差异具有统计学意义(P<0.05)。免疫组化染色显示,诱导14d后C组细胞cTnT蛋白表达呈阳性。结论 10×10-6mol/L apelin-13对hUC-MSCs无毒性作用,一定浓度的apelin-13蛋白可增强5-Aza诱导hUC-MSCs向心肌细胞分化的效率,浓度为2×10-6mol/L时增强作用最明显。; 徐小红王力张宁坤郑楠高连如朱智明; 关键词：脐带间质干细胞细胞分化 APELIN-13 5-氮胞苷

外源性apelin-13对心肌梗死大鼠心肌干细胞的动员作用观察: 2013年; 目的探讨给予外源性apelin-13对急性心肌梗死(AMI)后大鼠心脏的保护作用及其可能机制。方法 SD大鼠随机分为3组,即假手术组(n=6)、对照组(AMI+生理盐水,n=12)和实验组(AMI+apelin-13,n=12),其中对照组死亡4只,实验组死亡5只,其余对照组和实验组大鼠于冠脉结扎术后5min内分别向心肌内注射生理盐水20μl或apelin-130.2μg/20μl,假手术组大鼠仅开胸,未进行冠脉结扎也未进行药物注射。采用超声心动图和心肌梗死面积测定来评价心脏功能的变化。采用免疫组化染色法检测心肌组织C-kit、Flk1、Sca1蛋白阳性表达情况,Western blotting和Real TimePCR法定量检测前述蛋白和mRNA的表达情况。结果超声心动图及心肌梗死面积测定结果显示实验组大鼠心功能较对照组有所改善(左室射血分数:实验组为68.43%±2.06%,对照组为46.40%±15.18%;左室短轴缩短率:实验组为33.70%±1.55%,对照组为20.73%±8.14%;梗死心肌面积百分比:实验组为16.10%±3.08%,对照组为33.83%±5.64%),差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫组化染色显示,假手术组心肌组织C-kit、Flk1、Sca1表达呈阴性,实验组和对照组染色呈阳性或强阳性。Western blotting和RT-PCR方法检测结果显示,实验组C-kit、Flk1、Sca1蛋白及mRNA表达较对照组明显增加(蛋白水平:C-kit 0.48±0.17 vs 1.05±0.08,Flk1 0.40±0.26 vs 0.88±0.10,Sca1 0.39±0.08 vs 0.70±0.08,P<0.05;mRNA水平:C-kit 2.89±1.89 vs 18.77±14.19,Flk1 2.14±0.95 vs 4.59±0.92,Sca1 4.32±2.44 vs 29.39±11.90,P<0.05),而假手术组C-kit、Flk1、Sca1蛋白无明显表达。结论外源性apelin-13蛋白对心肌梗死大鼠具有保护作用,其机制可能与刺激内源心肌干细胞的分裂增殖有关。; 郑楠张宁坤高连如徐小红王力朱智明; 关键词：APELIN 心肌干细胞

携带标记基因的慢病毒载体转染人脐带华通胶间充质干细胞的实验研究被引量：5: 2013年; 目的探讨含有增强型绿色荧光蛋白标记基因的慢病毒（Lentivirus—EGFP）体外转染人脐带华通胶间充质干细胞（HUWMSCs）的最佳方案及其对细胞增殖活性的影响。方法设计A、B、C、D共4种转染方案，分别以1、10、100的感染复数（MOI）转染体外培养的HUWMSCs，荧光显微镜及流式细胞仪检测各组荧光表达强度及转染效率，MTT法检测细胞增殖倍数。结果转染4d后所有实验组转染率在10．6％～87．3％，并与MOI值存在量效关系，聚凝胺（5mg／L）可显著增加病毒转染效率（P〈O．05）。MTT实验结果显示，与对照组比较，不同转染方案细胞增殖存在显著差异（P〈0．001）。A方案MOI=10组及B方案MOI=10组细胞增殖情况较其他组好。结论B方案MOI=10实验组为最佳转染方案。Lentivirus—EGFP能高效转染HUWMSCs且在2周内稳定表达转染基因，是一种安全、有效的基因转移载体。; 王力徐小红张宁坤高连如朱智明; 关键词：间质干细胞流式细胞术慢病毒属基因疗法转染

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