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牛静宜: 作品数：10 被引量：12H指数：1; 供职机构：暨南大学附属第一医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金山东省优秀中青年科学家科研奖励基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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TGFBI及其R124位突变体的构建及在角膜营养不良分子发病机制方面的应用: 目的：TGFBI突变是导致人类多数角膜营养不良的因素，但具体的分子和细胞机制尚不清楚。本研究构建对应于人类野生型TGFBI及R124三个常见突变体的小鼠TGFBI真核表达载体，为采用实验研究手段探讨TGFBI突变致病的机...; 牛静宜; 关键词：TGFBI 重叠区扩增基因拼接法角膜营养不良发病机制真核表达载体; 文献传递

重叠区扩增基因拼接法定点突变TGFBI及其真核表达载体的构建: 本实验主要利用基因拼接定点突变TGFBI124位精氨酸并构建其真核表达载体。通过脱臼处死正常五周龄Balb/c鼠，取下角膜，提取总RNA，反转录为cDNA。根据需要突变位点来设计和合成突变引物，PCR合成TGFBI-WT...; 牛静宜王晔陈鹏王宜强; 关键词：定点突变真核表达载体

抗真菌抗体在真菌性角膜炎发病和转归中的作用: 张宏波陈豪杨玲玲牛静宜任胜卫张峰王宜强

砷致健康危害生物标志物研究进展被引量：10: 2008年; 尿、发、指(趾)甲中砷水平可以反应短期砷接触内剂量,可作为人体内灵敏有效的砷暴露标志物。长期慢性砷接触可以诱发皮肤色素代谢异常和掌跖角化等典型的皮肤病变,尿中MMA(V)可认为是暴露的生物有效剂量。活性氧和抗氧化能力、炎性分子基因表达、外周血淋巴细胞微核和姊妹染色单体互换和染色体畸变是无机砷摄入的早期生物效应标志物。砷易感性标志物包括DNA修复酶、氧化和抗氧化酶、氧化应激相关酶以及异物代谢酶基因组多态性。砷对健康的危害是由于基因组不稳定性和氧化应激等毒理机制而导致的基因-基因、基因-环境交互作用的慢性复杂的渐进性损害。; 安艳银丽娟王三祥王正辉李贞商希梅乔建维牛静宜; 关键词：砷效应标志物环境健康

转化生长因子β诱导基因在人角膜组织及细胞中的表达被引量：1: 2012年; 背景临床研究表明多数角膜营养不良的发病与转化生长因子β诱导（TGFBI）基因突变有关，但其发病的分子机制尚不完全清楚。目的研究TGFBI基因在人角膜组织及体外培养的角膜上皮细胞和基质细胞中的表达，为进一步研究角膜营养不良的发病机制奠定基础。方法对人角膜上皮细胞和基质细胞进行培养和传代，应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测TGFBImRNA在人角膜组织及细胞中的表达，将供体角膜组织制成石蜡包埋切片，利用免疫组织化学法检测TGFBI蛋白在角膜组织、人角膜上皮细胞和角膜基质细胞中的表达，采用免疫荧光技术检测TGFBI蛋白在细胞爬片的表达。结果RT—PCR检测显示人角膜组织和基质细胞中在1274bp处可见TGFBImRNA的清晰条带，而角膜上皮细胞中亦有TGFBImRNA表达。免疫组织化学检测显示，TGFBI蛋白在人角膜组织中基质细胞的细胞质中呈阳性表达，但人角膜上皮细胞中未见TGFBI蛋白表达。免疫荧光检测技术显示，人角膜基质细胞胞质中TGFBI蛋白呈红色荧光，而角膜上皮细胞未见TGFBI蛋白表达。结论TGFBI主要在人角膜基质层表达，而在上皮层几乎不表达，有助于进一步研究TGFBI在角膜营养不良发病机制中的作用。; 牛静宜刘婧刘莲吕依洋陈建苏徐锦堂钟敬祥; 关键词：角膜营养不良角膜上皮细胞角膜基质细胞

a、b和r-晶体蛋白在哺乳类动物角膜中的表达分布及其功能的初步探讨: 任胜卫张峰牛静宜李长优杨玲玲张宏波谢立信王宜强

TGFBI及其R124位突变在角膜基质细胞中的作用的实验研究: 牛静宜任胜卫谢立信王宜强

小鼠TGFBI基因真核表达载体的构建和表达: 2009年; 目的构建小鼠TGFBI基因的真核表达载体,为研究角膜营养不良的发病机制奠定基础。方法提取BALB/cBy小鼠正常角膜组织总RNA,经反转录-PCR合成TGFBI cDNA,克隆入真核表达载体pcDNA3.1并测序验证。用不同剂量重组质粒pcDNA3.1-TGFBI转染NIH3T3细胞,通过SYBR荧光实时定量PCR和Western blot检测TGFBI在细胞中的表达。结果测序结果显示扩增到的TGFBI cDNA以正确序列和方式插入载体,实时定量PCR和Western blot结果显示TGFBI在NIH3T3细胞中表达增强。结论成功构建了小鼠TGFBI基因真核表达载体,并在细胞中进行表达,为进一步研究TGFBI在角膜内的生理、病理功能奠定基础。; 牛静宜陈鹏王晔谢立信王宜强; 关键词：TGFBI 真核表达载体角膜营养不良

特异性免疫反应在白色念珠菌角膜炎中的作用: 张宏波陈豪牛静宜王宜强谢立信

人转化生长因子β诱导基因真核表达载体的构建及其对人角膜上皮细胞增生的影响被引量：1: 2011年; 背景人转化生长因子-β诱导（TGFBI）基因是第一个被确定的角膜营养不良的致病基因，而TGFBI引起角膜营养不良的机制目前尚不清楚，研究TGFBI的功能对于揭示角膜营养不良的发病机制及了解角膜生理及病理功能都具有重要意义。目的构建人TGFBI基因的真核表达载体并将其转染于人角膜上皮细胞，探讨其对角膜上皮细胞增生及相关基因表达的影响。方法从角膜移植后剩余的供体角膜中提取人正常角膜组织总RNA，经逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）合成TGFBI cDNA，将TGFBI胶回收产物与载体pCMV—N-HA分别进行双酶切，取连接产物10μl转化100μl大肠杆菌感受态DH5α克隆入真核表达载体pCMV—N—HA，以菌落PCR和EcoRV、XhoI双酶切法测序鉴定。设置重组质粒pCMV—N—HA—TGFBI转染组、空质粒pCMV—N—HA转染组、阴性对照组及pGFP—C2转染对照组，以测定重组质粒转染率。重组质粒pCMV-N—HA—TGFBI转染人角膜上皮细胞，激光共焦显微镜下观察转染pGFP—C2后增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的表达，用细胞计数试剂盒8（CCK-8法）检测转染细胞的增生情况，SYBR荧光实时定量PCR和Western blot法检测TGFBI、基质金属蛋白酶（MMPs）、组织金属蛋白酶抑制剂（TIMP）蛋白及其mRNA在转染后角膜上皮细胞的表达。结果pCMV—N-HA—TGFBI阳性克隆质粒进行经EcoRV和XhoI双酶切鉴定测序结果显示，扩增的TGFBI cDNA以正确序列和方式插入载体，pGFP—C2载体转染人角膜上皮细胞后48h共焦显微镜下可见EGFP的表达，转染效率为70％。重组质粒pCMV—N—HA-TGFBI转染组TGFBI mRNA的表达明显高于空质粒pCMV—N—HA转染组和阴性对照组，TGFBI蛋白仅在pCMV—N-HA．TGFBI转染组表达。CCK-8法显示重组质粒pCMV—N-HA-TGFBI转染组、空质粒pCMV—N—HA转染组和阴性对照组间角膜上皮的吸光度（A450）值的差异无统计学意义（F=3．34，P〉0; 牛静宜刘婧李晓霞陈建苏徐锦堂钟敬祥; 关键词：角膜上皮细胞基质金属蛋白酶真核表达载体

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