柳海燕
- 作品数：26 被引量：64H指数：5
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- 急性疼痛应激状态下SD大鼠睾丸内膜联蛋白A5的表达变化
- 2009年
- 目的观察急性疼痛应激状态下,睾丸中annexin 5表达变化。方法福尔马林注射建立急性疼痛模型,分别在注射后1 h,6h,24 h,72 h取睾丸,免疫组织化学和western blot分析annexin 5免疫定位和蛋白表达,荧光定量PCR方法检测annexin 5 mRNA水平变化。结果免疫组化显示,annexin 5在急性应激组和对照组中定位在间质细胞、支持细胞,应激组与对照组相比定位无明显的变化。Western blot分析发现疼痛应激1 h和6 h后,annexin 5的表达分别降低16.9%和12.8%,而在疼痛应激24 h和72 h后,annexin 5的表达分别升高33.7%和25%。组间比较发现,在1 h和24 h时annexin 5表达较对照组差异有统计学意义(P<0.05)。荧光定量方法检测annexin 5 mRNA水平变化,发现疼痛应激1 h和6 h annexin 5 mRNA相对含量降低,随后在24 h和72 h升高,但各组间差异均无统计学意义。结论急性疼痛应激主要影响annexin 5蛋白的表达,而不影响annexin 5的转录。Annexin 5作为睾丸应激因子之一可能介导了应激对生殖功能的抑制作用。
- 韩雪峰卢坤刚张艳梅时姗姗柳海燕陶晓倩姚兵
- 关键词：应激膜联蛋白A5
- 光照应激对SD大鼠睾丸促性腺激素释放激素受体表达的影响被引量：5
- 2011年
- 目的多种应激方式均能抑制生殖功能,但其对调控机制仍缺少系统的研究。通过观察光照应激状态下SD大鼠睾丸内促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)受体蛋白和mRNA表达变化,为寻找应激状态下生殖系统调节机制提供依据。方法建立SD大鼠光照应激模型,将70只大鼠随机分为14组,其中7组(实验组)24 h持续光照,包括短期光照应激(2、3、4和7d)和长期光照应激(14、21和28d),另7组按正常昼夜节律并作为对照组;分别取实验组和相应对照组的睾丸组织,采用Western blot和RT-PCR分析GnRH受体在各时间段大鼠睾丸组织中的蛋白和mRNA表达变化,并用化学发光法检测血清中睾酮的含量。结果 Western blot结果显示:与对照组比较,持续光照2、3、4和7 d后,实验组大鼠睾丸GnRH受体表达无明显变化;持续光照14d和21d后,实验组大鼠睾丸GnRH受体的表达分别升高了27.8%±11.2%和40.6%±24.8%,差异具有统计学意义(P<0.05);持续光照28 d后,实验组大鼠睾丸GnRH受体的表达升高了26.1%±33.6%,但差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR结果显示:GnRH受体的mRNA表达和其蛋白表达呈现相同的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。随着光照时间的延长,睾酮分泌量与对照组相比持续上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GnRHR随着光照应激时间的延长,在大鼠睾丸中蛋白表达量发生改变。提示在光照应激中,GnRH受体对生殖功能具有潜在的生理调节功能。
- 时姗姗马恒辉章如松周航波陶晓倩柳海燕林杈英姚兵
- 关键词：光照应激睾丸促性腺激素释放激素
- 促性腺激素释放激素激动剂通过ERK MAPK途径调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA表达被引量：12
- 2009年
- 目的:促性腺激素释放激素(GnRH)是下丘脑分泌的10肽激素,通过刺激促性腺激素释放激素的合成和分泌,调节性激素的合成。GnRH对睾丸间质细胞也具有直接的刺激作用。文中研究GnRH激动剂(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞ERK MAPK信号通路和3β-HSD mRNA表达的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,血清饥饿2 h。GnRHa(10-7mol/L)和ERK抑制剂PD98059(50μmol/L)刺激细胞后Western blot检测磷酸化ERK(p-ERK)、总ERK(t-ERK)的蛋白表达,荧光实时定量PCR检测3β-HSD mRNA表达。结果:结果显示GnRHa刺激间质细胞0、5、10、30、60和90 min后,p-ERK水平在5 min时达到最高,与对照组比较升高了约3.5倍(P<0.05);10 min时开始下降,但与对照组相比较仍显著升高2.2倍(P<0.05);90 min时恢复到正常水平。加入ERK选择性抑制剂PD98059后,p-ERK水平显著下降50%(P<0.05);再用GnRHa刺激细胞5 min,p-ERK水平仍无法恢复正常水平。用PD98059处理细胞后,再加入GnRHa培养24 h,3β-HSD mRNA水平也显著下降(与GnRHa组相比,P<0.05)。结论:GnRH激动剂可能通过ERKMAPK信号通路来调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA的表达,进而调控睾酮的分泌。
- 柳海燕时姗姗陶晓倩卢坤刚韩雪峰张艳梅崔英霞李晓军姚兵
- 关键词：促性腺激素释放激素ERK睾丸间质细胞3Β-HSD
- 膜联蛋白5对人精子膜及DNA完整性的影响
- 2011年
- 目的:研究膜联蛋白5(Annexin5)对人精子细胞膜及DNA完整性的影响。方法:①精子膜完整性测定:按精子浓度>20×106/ml;活率>60%选取标准收集精液标本53份,分为3组,实验组为47.5μl精液中加入2.5μl10-6mol/L的Annexin5;阴性对照组为47.5μl精液标本中加入2.5μl1mol/L的Tris-HCl(pH8.0,25℃);空白对照组为47.5μl精液标本中加入2.5μl0.01mol/L的PBS(pH7.4),作用20min后,通过精子低渗肿胀试验(HOS)检测精子膜的完整性。②DNA完整性测定:同方法①,3组实验标本作用20min后,每份标本加入2.5μl0.02mol/L的H2O2,作用60min,通过吖啶橙(AO)荧光染色检测精子核DNA的完整性。结果:An-nexin5处理20min后低渗肿胀精子百分率与空白对照组及阴性对照组比较均具有极显著差异[(66.17±12.02)%vs(58.13±13.08)%,P<0.01;(66.17±12.02)%vs(59.94±11.91)%,P<0.01];空白对照组与阴性对照组比较无显著性差异。加入H2O2后,Annexin5组的DNA碎片指数与空白对照组及阴性对照组比较均具有极显著差异[(6.39±1.07)%vs(11.16±1.16)%,P<0.01;(6.39±1.07)%vs(10.86±1.05)%,P<0.01],空白对照组与阴性对照组比较无显著性差异。结论:Annexin5蛋白能在体外提高低渗肿胀精子百分率,对精子膜的完整性具有保护作用,同时对HO作用引起的精子核DNA破坏起保护作用。
- 路榕郭萃陶晓倩柳海燕时姗姗林钗英姚兵
- 关键词：精子膜低渗肿胀试验DNA完整性
- 坐骨神经选择性损伤应激对大鼠颌下腺中annexin 5表达的影响被引量：1
- 2010年
- 目的研究坐骨神经选择性损伤引起的慢性疼痛应激态下SD大鼠颌下腺中annexin 5表达的变化。方法72只SD大鼠随机均分为3组:手术组、假手术组和对照组(每组24只)。手术组:用氯胺酮(40mg/kg)腹腔注射麻醉后,切开左后肢侧面皮肤和股二头肌,暴露大鼠坐骨神经干及其3个分支:胫神经、腓总神经和腓肠神经,结扎并切断胫神经和腓总神经,保留腓肠神经以建立坐骨神经分支选择性损伤(SNI)模型。假手术组:只暴露坐骨神经干及其分支而不损伤神经。对照组:不做任何处理。分别于手术后14、21、28d从各组中取8只大鼠,麻醉后处死,分离颌下腺组织置于液氮内保存备用。然后通过免疫组织化学和Western blotting检测坐骨神经选择性损伤后14、21、28d时各组大鼠颌下腺中annexin 5蛋白定位及表达的变化。结果免疫组化结果显示,annexin 5主要定位在颌下腺润管、分泌管及排泄导管上皮细胞中。术后14d,annexin 5在颌下腺的定位明显减少,Western blotting结果显示术后14d时与对照组比较,手术组大鼠颌下腺中annexin 5表达水平显著降低(P<0.01),与假手术组比较,手术组annexin 5表达水平也显著下降(P<0.05)。但术后21和48d手术组与对照组、假手术组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论坐骨神经选择性损伤引起的慢性疼痛应激能下调SD大鼠颌下腺中annexin 5的表达,annexin 5可能参与了颌下腺对应激的反应。
- 卢坤刚韩雪峰张艳梅柳海燕陶晓倩时姗姗戈一峰崔英霞李晓军姚兵
- 关键词：神经损伤应激ANNEXIN颌下腺
- 膜联蛋白5对大鼠睾丸间质细胞中类固醇急性调节蛋白和睾酮合成相关酶表达的影响被引量：3
- 2011年
- 目的:研究膜联蛋白5(annexin 5)对大鼠睾丸间质细胞(Leydig细胞)睾酮合成相关蛋白和酶表达的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞24 h后,用10-9mol/L的annexin 5处理间质细胞12 h和24 h,分别提取细胞总RNA和总蛋白;反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测类固醇急性调节蛋白(steroidogenic acute regulatory,StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)、17α-羟化酶(17α-hydroxylase,CYP17A)、17β-羟基类固醇脱氢酶Ⅹ型(17β-HSD10)mRNA表达的改变,并用蛋白免疫印迹方法(Western blotting)检测蛋白表达水平的变化。结果:与对照组相比,在mRNA水平上,annexin 5处理细胞12 h后,只有17β-HSD10的表达升高了26%(P<0.05),其他差异均无统计学意义,而处理24 h后,StAR、P450scc和3β-HSD的表达分别升高55%、69%和59%(P<0.05),17β-HSD10升高了104%(P<0.01),17α-hydroxylase表达则无显著差异;在蛋白水平上,annexin 5处理细胞12 h后,17β-HSD的表达升高了39%(P<0.05),而处理24 h后发现,除StAR表达无显著变化外,P450scc、3β-HSD和17β-HSD的表达分别升高了35%、88%(P<0.05)和47%(P<0.01)。结论:Annexin 5对睾酮合成具有调节作用,这种作用是通过在基因水平和蛋白水平上影响P450scc、3β-HSD和17β-HSD的表达而实现的。
- 陶晓倩林钗英柳海燕时姗姗路榕黄宇烽李晓军戈一峰崔英霞姚兵
- 关键词：睾丸间质细胞
- 大鼠睾丸间质细胞中促性腺激素释放激素激动剂调控睾酮合成的机制被引量：10
- 2009年
- 目的:研究促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞睾酮合成的调控机制。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞,GnRHa(10-7 mol/L)分别处理间质细胞6、12、24、36、48 h后,Western blot方法分析3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)蛋白的变化;MEK1/2抑制剂PD98059(50μmol/L)和GnRHa共作用于间质细胞后,分析3β-HSD蛋白表达和睾酮水平的变化。结果:GnRHa处理间质细胞不同时间后,结果显示3β-HSD蛋白的表达对GnRHa的刺激具有时间依赖性。GnRHa处理12 h后,3β-HSD蛋白表达与对照组相比显著上升45%(P<0.05),24 h达到最高水平,升高1.0倍(P<0.05);48 h后3β-HSD恢复至正常水平。加入PD98059后,显著抑制了GnRHa对3β-HSD的刺激作用,3β-HSD水平下降了61%(与GnRHa组相比,P<0.05),睾酮水平也随之显著下降45%(与GnRHa组相比,P<0.05)。结论:GnRHa可能通过细胞外信号调节激酶(ERK1/2)途径调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD的表达,进而促进睾酮的合成。
- 柳海燕陶晓倩时姗姗张艳梅卢坤刚韩雪峰崔英霞戈一峰黄宇烽李晓军姚兵
- 关键词：促性腺激素释放激素激动剂ERK1/2间质细胞
- 光照应激对雄性大鼠生殖相关参数的影响被引量：3
- 2009年
- 目的观察比较光照应激状态下不同应激时间段SD大鼠生殖相关参数的变化。方法建立SD大鼠的光照应激模型分为光照应激短期(2d、3d、4d、7d)和光照应激长期(14d、21d、28d),并分别取应激状态下SD大鼠睾丸、附睾称重,对附睾尾精子计数,HE染色观察睾丸结构,应用免疫组织化学和westernblot分析3β-HSD表达,比较各实验组和对照组间上述指标的变化。结果短期光照应激组(2d、3d、4d、7d)与对照组相比,大鼠体重、睾丸重量、附睾重量、精子数量没有明显变化(P>0.05),HE染色显示睾丸结构无明显变化,免疫组化和western blot显示3β-HSD表达无明显变化。长期光照应激组与对照组相比,大鼠重量、睾丸和附睾重量都有明显增加。与对照组相比,14 d实验组的附睾重量有显著性差异(P<0.05);21 d、28 d实验组的睾丸重量有显著差异(P<0.05),21 d、28 d实验组的体重、附睾重量和精子相对计数都有极显著差异(P<0.01)。HE染色显示睾丸内生精小管变粗,管腔内生精细胞增多,免疫组化和western blot显示长期应激组14 d的3β-HSD相对表达量增加20.3%,有显著性差异(P<0.05);21d和28d实验组3β-HSD的相对含量分别增加30.4%和43.3%,差异极显著(P<0.01)。结论短期光照应激不能破坏大鼠机体内稳态的调节机制,对生殖的影响并不明显;而长期处于光照应激状态下的雄性大鼠,超出机体内稳态的调节能力,对生殖的影响不仅表现在体重、睾丸、附睾和附睾尾的重量增加,而且精子相对计数及睾丸结构都发生相应变化,3β-HSD表达量也明显增加。提示光照是影响大鼠生殖功能的一个因素。
- 时姗姗柳海燕陶晓倩韩雪峰卢坤刚张艳梅姚兵
- 关键词：光照应激生殖
- 慢性疼痛应激对雄性SD大鼠生殖相关参数的影响
- 2010年
- 目的观察不同时间段慢性疼痛应激后,SD大鼠生殖相关参数的变化。方法建立坐骨神经分支选择性损伤模型。经不同时间疼痛应激后,于14 d、21 d和28 d处死大鼠,取睾丸、附睾称重,并对附睾尾精子计数,HE染色显示睾丸结构变化,western blot检测3 β-HSD蛋白表达的改变。结果 14 d和21 d手术组大鼠体重均略低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。不同时间段各组大鼠睾丸和附睾系数均无明显变化。28 d后手术组附睾尾精子相对计数显著低于对照组(P<0.05)。HE染色显示,坐骨神经分支选择性损伤诱导疼痛应激28 d后睾丸生精上皮中生精细胞减少,生精小管腔内精子数量减少。Western blot结果显示28 d手术组3 β-HSD表达显著低于正常照组和假手术组(P<0.05)。结论慢性疼痛应激如其他方式应激一样,能引起大鼠附睾尾精子相对计数减少,睾丸生精上皮中生精细胞减少,睾丸内3 β-HSD含量降低,慢性疼痛应激降低了大鼠的生精功能。
- 卢坤刚时姗姗韩雪峰张艳梅柳海燕陶晓倩姚兵
- 关键词：疼痛应激生殖
- 促性腺激素释放激素激动剂对In-R1-G9细胞中胰升血糖素表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的研究促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂(GnRH agonist,GnRHa)对In-R1-G9细胞内胰升血糖素表达的调控作用。方法分别用终浓度为0.1 nmol/L、10 nmol/L、1000 nmol/L的GnRHa处理培养的In-R1-G9细胞2 h(对照组用生理盐水处理),通过Western blot和荧光定量PCR技术观察胰升血糖素在蛋白水平及转录水平的变化。结果与对照组相比,低浓度的GnRHa(0.1nmol/L)使胰升血糖素在蛋白水平和转录水平的表达均有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05);而高浓度的GnRHa(10 nmol/L、1000 nmol/L)能明显增强胰升血糖素的表达(P<0.05或P<0.01)。结论一定浓度的GnRHa能增强In-R1-G9细胞内胰升血糖素的表达。
- 张艳梅陶晓倩时姗姗柳海燕卢坤刚韩雪峰崔英霞戈一峰李晓军姚兵
- 关键词：胰升血糖素
