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杨林

作品数：58 被引量：136H指数：7
供职机构：中山大学附属第三医院更多>>
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相关领域：医药卫生生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 44篇期刊文章
  • 13篇会议论文
  • 1篇科技成果

领域

  • 57篇医药卫生
  • 3篇生物学

主题

  • 32篇细胞
  • 22篇肝炎
  • 22篇肝炎病毒
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  • 18篇病毒
  • 16篇乙型肝炎病毒
  • 15篇乙型肝炎
  • 13篇凋亡
  • 12篇基因
  • 11篇细胞凋亡
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  • 9篇癌细胞
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  • 8篇肝癌
  • 8篇肝癌细胞
  • 7篇阿霉素
  • 7篇阿霉素诱导
  • 7篇HBV
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机构

  • 58篇中山大学附属...
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  • 1篇华中科技大学
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  • 1篇广州医科大学

作者

  • 58篇杨林
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传媒

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年份

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  • 2篇2010
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  • 5篇2008
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  • 9篇2005
  • 4篇2004
  • 4篇2003
共 58 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
GFP/HBxn、GFP/HBxc融合蛋白重组载体的构建和稳定表达细胞系的建立
2017年
目的分别构建绿色荧光蛋白(GFP)与氨基端或羧基端缺失突变乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)的重组表达载体,建立稳定表达GFP/HBxn、GFP/HBxc融合蛋白的HepG2细胞系,以进一步研究HBx缺失突变对其生物功能的影响。方法 PCR法分别扩增氨基端缺失50aa的HBx及羧基端缺失50aa的HBx基因,用HindⅢ和KpnⅠ双酶切定向插入pEGFP-C1相应酶切位点并转化宿主菌DH5α,双酶切鉴定pGFP/HBxn、pGFP/HBxc;脂质体转染法转染HepG2细胞,G418筛选出抗性细胞克隆,荧光显微镜下观察GFP的表达,挑选抗性克隆细胞扩大培养并传代。RT-PCR法、Western blot法检测转染细胞HBxn、HBxc基因、蛋白的表达。结果扩增的HBxn、Hbxc基因片段琼脂糖凝胶电泳显示符合预估大小。重组质粒pGFP/HBxn、pGFP/HBxc经HindⅢ和KpnⅠ双酶切后电泳,符合预估大小;转染pGFP/HBxn及pGFP/HBxc的HepG2细胞可见抗性细胞克隆形成,并可见阳性克隆细胞均有GFP表达。RT-PCR与Western blot法检测到HBxn、HBxc的表达。结论成功构建了GFP/HBxn、GFP/HBxc真核重组表达载体pGFP/HBXn、pGFP/HBxc,获得了稳定表达GFP/HBxn、GFP/HBxc融合蛋白的HepG2细胞系,为进一步研究HBx缺失突变对其生物功能的影响奠定了基础。
姚雪兵杨林高珍罗杰孙水林
关键词：乙型肝炎病毒X蛋白缺失突变HEPG2细胞系
HBV X蛋白对阿霉素诱导的肝癌细胞凋亡的影响
2010年
目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis BvirusX protein,HBVX)对阿霉素诱导的肝癌细胞凋亡及p53、PTEN表达的影响。方法:用阿霉素(2.5g/mL)分别处理HepG及稳定表达GFP、GFP-HBVX融合蛋白的细胞系HepG/GFP、22HepG/GFP-HBVX,处理后不同时间在显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:流式细胞术检测显2示阿霉素处理后36h,HepG/GFP-HBVX细胞凋亡率为3.94%,明显低于HepG(59.03%)、HepG/GFP细胞(61.38%)222(P<0.05),而与未处理对照组细胞(2.12%、2.78%、2.55%)无明显差别(P>0.05)。结论:HBVX蛋白能够抑制阿霉素诱导的细胞凋亡。
佘吉佳杨林王霞范红梅张富程陈幼明谢奇峰
关键词：乙型肝炎病毒X蛋白阿霉素细胞凋亡
HBV X蛋白转录激活细胞DNA甲基转移酶启动子进而上调其表达
[目的]证实HBV X蛋白(HBx)对细胞DNA甲基转移酶(DNMT)基因转录表达的影响以明了HBx调控细胞DNA甲基化的机制.[方法]以人肝母细胞瘤细胞HepG2、表达绿色荧光蛋白(GFP)的GFP/HepG2、稳定表...
康艳红杨林
关键词：HBX
乙型肝炎病毒X蛋白通过活化ERK1/2上调DNA甲基转移酶1表达
2016年
目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白对DNA甲基转移酶1表达的影响及调控机制。方法以Hep G2、Hep G2/EGFP及Hep G2/EGFP-HBx细胞作为实验细胞,采用Real-time PCR法及Western blot法检测细胞DNMT1的m RNA及蛋白表达水平。用不同剂量的MEK1/2特异性抑制剂U0126处理Hep G2/EGFP-HBx细胞,采用Western blot法检测总ERK1/2、磷酸化ERK1/2及DNMT1蛋白表达水平。结果 Hep G2/EGFP-HBx细胞的DNMT1 m RNA相对表达量平均值为9.464±0.22,明显高于Hep G2细胞(1.00±0.0)(t=60.64,P=0.0002)及Hep G2/EGFP细胞(0.95±0.29),差异有统计学意义(t=32.78,P=0.0011)。与Hep G2、Hep G2/EGFP细胞相比,Hep G2/EGFP-HBx细胞磷酸化ERK1/2及DNMT1蛋白表达水平有明显升高;而MEK1/2特异性抑制剂U0126处理细胞后,磷酸化ERK1/2磷酸化水平及DNMT1蛋白表达水平明显降低。结论 HBx可通过活化ERK1/2信号通路上调DNMT1的表达,这可能是HBx调控细胞基因甲基化及参与HBV相关肝细胞癌发生的机制之一。
吴英杰杨林朱建芸康艳红胡朝霞高志良
关键词：乙型肝炎病毒X蛋白DNA甲基转移酶1ERK1/2信号通路
HBV X蛋白对阿霉素诱导的肝癌细胞凋亡的影响研究
2015年
目的探讨HBV X蛋白对阿霉素处理后的Hep G2细胞凋亡影响及可能机制。方法用阿霉素处理Hep G2、Hep G2/GFP、Hep G2/GFP-HBx细胞,分别用台盼兰染色和流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;并通过RT-PCR和Western blot检测P53、PTEN的基因及蛋白表达。结果阿霉素处理36小时后,Hep G2/GFP-HBx细胞凋亡率明显低于另外两组(P<0.01);Hep G2/GFP-HBx细胞PTEN mRNA和蛋白水平均低于另外两组(P<0.01),而p53 mRNA和蛋白水平与另外两组无明显差别(P>0.05)。结论 HBV X蛋白能够抑制阿霉素诱导的Hep G2细胞凋亡和PTEN的表达,HBV X蛋白可能通过影响p53-PTEN环路而抑制细胞凋亡。
范红梅杨林孙士敏别彩群钟志民
关键词：X蛋白阿霉素HEPG2细胞细胞凋亡PTEN
丙型肝炎病毒包膜蛋白E2的原核表达及鉴定
目的构建丙型肝炎病毒(HCV)包膜蛋白E2基因的重组原核表达质粒,并获得E2蛋白的高效表达。方法通过RT-PCR法从HCV RNA阳性的血清标本中扩增出HCV E2区基因595bp,PCR产物分别经BamHⅠ和HindⅢ...
代志琰李刚徐启桓姚集鲁韩晓燕杨林陈文恩
文献传递
病毒性肝炎的基因治疗现况被引量：2
2004年
梅咏予杨林肖杰生
关键词：病毒性肝炎基因治疗反义技术核酶基因免疫
β-catenin基因多态性与乙型肝炎病毒相关肝细胞癌易感性的关系被引量：4
2009年
背景与目的:Wnt信号通路在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)相关肝细胞癌(肝癌)发生发展中起重要作用,β-catenin基因编码的β-catenin是该通路的关键因子,已在肝癌组织检测到β-catenin基因变异且存在于exon3的condons32～45之间。本研究旨在探讨β-catenin宿主基因多态性与人肝癌易感的关系。方法:对162例有慢性HBV感染的肝癌患者进行肝癌家系和流行病学调查后,对有和无肝癌家族史病例按匹配条件进行1:1配对。采用DNA聚合酶链反应-基因测序方法对入选患者进行β-catenin基因exon3扩增及序列检测,并结合肝癌家系调查结果比较分析SNP rs28931588、rs28931589和codons31～46基因序列。结果:162例中有肝癌家族史者16例(9.87%)。选择24例(包括有肝癌家族史12例和与之匹配的无肝癌家族史12例)进行基因exon3扩增及测序。24例患者在SNP rs28931588、rs28931589位点均为"G",其中3例exon3的codons32～46序列有差异,存宿主基因多态性。但是未能见到明确的突变规律和特异性热点突变位点。结论:β-catenin基因exon3中SNP rs28931588、rs28931589和codons31～46序列可能不是HBV相关肝癌的遗传学标志。
赖菁高志良杨林陈伟周翔柯伟民
关键词：肝肿瘤Β-CATENIN基因
SV40LTag基因诱导永生化大鼠肝星状细胞系的建立及鉴定被引量：3
2007年
目的:建立长期传代、形态和生物学特性稳定的永生化HSC。方法:采用Pronase E、Ⅳ型胶原酶原位灌流消化及Nycodenz密度梯度离心分离大鼠原代肝星状细胞(HSC),并进行免疫组化SABC法鉴定和培养。用Effectene Transfection Reagent方法将携带SV40LTag基因的质粒PSV3neo(该质粒由意大利学者Giovanni Gaud-ino PhD惠赠)转染第1代HSC,以G418筛选直至获得阳性克隆细胞,经体外长期培养和传代后,以PCR方法检测其SV40LT抗原mRNA的表达,观察细胞形态学,绘制细胞生长曲线,MTT法检测细胞增殖能力,用免疫组化SABC法对α-SMA、SV40LTag、Ⅰ、Ⅲ型胶原(collagenⅠ、collagenⅢ)、desmin、转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍生的生长因子受体β型(PDGFRβ)进行免疫细胞化学检测,用β-actin做半定量RT-PCR检测I型胶原的表达,对其生物学特性进行研究。结果:本研究通过使用质粒PSV3neo转染正常大鼠HSC,经20 d抗性筛选,获得G418阳性克隆细胞,长期传代后细胞形态和结构保持完好,SV40LTag mRNA的表达检测和免疫组化染色结果阳性,经扩大筛选培养,该HSC细胞系目前已传了50代,保持着星形外观的HSC形态学特征,生长曲线显示转染阳性细胞倍增速度快,MTT法测定570 nm波长下A值显著高于对照组(P<0.01)。半定量RT-PCR法检测collagenⅠmRNA的表达明显高于对照组(P<0.01)。免疫组化染色显示能表达α-SMA、collagenⅠ、collagenⅢ、desmin、TGF-β1、PDGFRβ。结论:利用SV40LTag基因序列诱导建立了永生化大鼠HSC系,新建HSC系在体外可长期传代,倍增速度快,其形态和生物学特性与原代HSC形态相似。
庄鹏马会慧江元森陈伟杨林姚集鲁
关键词：肝星状细胞细胞培养永生化
HBV X siRNA与5-氮-2’-脱氧胞苷对裸鼠肝癌皮下移植瘤作用的研究被引量：1
2012年
目的目的探讨靶向HBVX的siRNA（X-siRNA）和5-氮-2’-脱氧胞苷（5-aza-dC）对HBV相关肝细胞癌生长的影响及可能机制。方法设计合成X-siRNA及对照siRNA，用siRNA处理HepG2／GFP-HBx细胞，RT-PCR法测定处理细胞的HBVX基因表达；将HepG2／GFP、HepG2／GFP—HBx细胞接种于裸鼠皮下建立裸鼠肝癌皮下移植瘤，分别用X-siRNA、5-aza-dC单独或联合处理裸鼠并观察移植瘤生长；甲基化PCR测定移植瘤组织p16基因甲基化。结果RT—PCR检测示X—siRNA处理的细胞HBVX mRNA水平明显降低；裸鼠体内实验显示HepG2／GFP—HBx组的皮下移植瘤体积明显大于HepG2／GFP组（P〈0．05）；X-siRNA与5-aza-dC处理组移植瘤体积明显小于未处理组（P〈0．05）；甲基化PER检测示HepG2／GFP—HBx组移植瘤组织存在p16甲基化而HepG2／GFP组未检出p16甲基化；X-siRNA、5-aza—dC处理的移植瘤组织中p16基因甲基化减低。结论X-siRNA及甲基化抑制剂可能通过逆转p16甲基化而能有效抑制肝细胞癌生长，具有潜在应用价值。
麦丽杨林邝建玉张绍全康艳红徐启桓谢奇峰
关键词：肝炎病毒乙型
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