杨晓宁
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 成骨细胞诱导乳腺癌侧群细胞获得骨模拟特性的研究被引量：2
- 2013年
- 目的以乳腺癌细胞株MDA-MB231和成骨细胞株MC3T3-E1为对象,研究在共培养条件下乳腺癌侧群细胞向成骨细胞转化的能力。方法通过流式细胞技术分选出MDA-MB231乳腺癌侧群细胞,将其与成骨细胞株MC3T3-E1按照1∶1的细胞比例分别置于Transwell间接共培养体系的上、下小室中(实验组),设置相同密度的单纯乳腺癌侧群细胞为对照组,观察侧群细胞的形态变化。通过细胞免疫荧光技术及Western blot,比较2组侧群细胞中OPN、Runx2、Wnt-1表达水平的改变。结果实验组细胞分化明显,细胞免疫荧光技术检测实验组侧群细胞中OPN、Runx2、Wnt-1表达水平明显高于对照组。Western blot检测表明实验组侧群细胞中OPN(5.15±0.35)、Runx2(6.22±0.36)、Wnt-1(9.30±0.28)的蛋白表达水平均高于对照组OPN(1.00±0.15)、Runx2(1.00±0.14)、Wnt-1(1.00±0.13),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论与成骨细胞株共培养后,乳腺癌侧群细胞获得成骨细胞相关生物学特性。
- 杨晓宁周艳齐晓伟王明浩范林军姜军
- 关键词：乳腺癌侧群细胞
- Wilms瘤基因1低表达和过表达乳腺癌细胞模型的建立被引量：1
- 2013年
- 目的应用RNA干扰(RNAi)和RNA激活(RNAa)技术,分别构建小干扰RNA(siRNA)和双链RNA(dsRNA),建立Wilms瘤基因1(WT1)低表达和过表达的乳腺癌细胞模型。方法以国外学者提供的3条序列(siRNA-516、siRNA-803、siRNA-1029)构建WT1 siRNA干扰表达WT1,以研究已证实可上调WT1表达的序列(dsRNA-319)构建dsRNA过表达WT1,通过脂质体(LipofectamineTM2000)分别将siRNA和dsRNA转入MDA-MB-321和MCF-7细胞。WT1有效siRNA筛选实验分为6组:WT1siRNA-516、WT1 siRNA-803、WT1 siRNA-1029、阴性对照、脂质体组和空白细胞组;观察转染效率的时间点为转染后24、48、72 h。WT1 dsRNA的筛选实验分为3组:WT1 dsRNA-319、阴性对照组和空白细胞组;观察转染效率的时间点为转染后48、72、96 h。通过实时定量PCR(qRT-PCR)和Western Blotting筛选作用效果最明显的siRNA和dsRNA。使用单因素方差分析进行统计学分析。结果成功构建WT1siRNA-516、WT1 siRNA-803和WT1 siRNA-1029共3个siRNA,并转染到MDA-MB-231细胞中,转染效率达90%以上。上述3个WT1 siRNA均能够抑制WT1 mRNA和蛋白的表达,以转染后48 h WT1 siRNA-1029的效果最为显著[WT1 siRNA-1029组WT1 mRNA表达水平与空白细胞组相比显著降低(0.49±0.02比1.00±0.08,P=0.00),其蛋白表达水平也明显降低]。成功将WT1 dsRNA-319转染到MCF-7细胞中,转染效率达90%以上。50μmol/L的WT1 dsRNA-319转染后96 h,MCF-7细胞的WT1过表达最为显著[WT1 dsRNA-319组的WT1 mRNA表达水平与空白细胞组相比显著升高(319.06±14.84比1.00±0.07,P=0.00),其蛋白表达水平也明显升高]。结论成功建立低表达WT1的MDA-MB-231细胞和过表达WT1的MCF-7细胞模型,为后续进一步研究WT1在乳腺癌中的生物学行为奠定了基础。
- 齐晓伟杨新华张毅范林军张帆陈莉唐振宁张彦杨晓宁宗贝歌胡保全王明浩姜军
- 关键词：RNA干扰乳腺肿瘤
