杨旭
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 供职机构：郑州大学基础医学院更多>>
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- Leber病14484原发合并新继发位点突变频谱研究被引量：1
- 2012年
- 目的:分析中国人Leber遗传性视神经病变14484位点突变的频谱及其遗传特征。方法:针对57例疑似LHON 14484位点突变的患者设计引物进行PCR扩增,PCR产物用限制性片段长度多态性(RFLP)和单链构象多态性(SSCP)并联合DNA测序的方法进行分析。同时选取20例正常健康成人作为对照。结果:57例LHON疑似14484位点突变者中,确诊9例为14484位点突变,占15.8%。其中2例单纯性14484位点突变,占22.2%;3例14484位点联合14502位点突变,占33.3%;3例14484位点联合14470位点突变,占33.3%;1例14484位点联合14569位点突变,占11.1%。对照组正常健康成人测序结果均为正常序列。结论:中国人线粒体LHON14484原发性位点突变中,存在与其他继发性位点联合致病的倾向,其中以14484+14502和14484+14470这两个突变位点为主。
- 安慧娟张艳敏宋丹孙艳艳杨旭鲍玉洲
- 关键词：LEBER遗传性视神经病线粒体DNA
- 叶黄素对H2O2诱导的人视网膜Muller细胞氧化应激干预的作用机制被引量：4
- 2015年
- 背景氧化应激是年龄相关性黄斑变性（AMD）的主要因素之一。研究表明叶黄素对AMD有预防作用，但是其抗氧化机制仍不明确。Mμller细胞是视网膜氧化应激反应的靶细胞之一，研究叶黄素对MUller细胞的氧化应激是否具有保护作用及其作用机制对于视网膜疾病的治疗具有重要意义。目的研究叶黄素对视网膜Mμller细胞核因子E2相关转录因子2／抗氧化反应原件（Nrf2／ARE）信号途径的影响。方法人Muller细胞株进行常规培养，将对数生长期的细胞接种于96孔培养板，在培养液中分别加入不同浓度（40、80、160、320、640ixmol／L）HO2，绘制Mμller细胞的凋亡曲线，取H2O2的半数致死量，即160μmol／L制备Mμller细胞氧化应激模型。将模型细胞分为模型对照组和不同质量浓度（12．5、25．0、50．0mg／L）叶黄素组，根据分组情况分别在培养液中加入相应质量浓度的叶黄素，用常规培养的细胞作为空白对照组。采用MTT比色法测定各组中Maller细胞增生值（吸光度，A值）和凋亡率；采用流式细胞仪检测各组细胞中活性氧簇（ROS）的荧光强度；采用实时荧光定量PCR检测细胞中Nrf2mRNA和血红素加氧酶-1（HO-1）mRNA的相对表达量；采用Westernblot法检测各组细胞中Nrf2和HO-1蛋白的表达水平（灰度值）。结果MTT比色法检测显示，随着H2O2浓度的增加，细胞增生抑制率逐渐增加，各组间总体比较差异有统计学意义（F=43．890，P〈0．01）。空白对照组、模型对照组及12．5、25．0、50．0mg／L叶黄素组细胞凋亡率的总体比较差异有统计学意义（F=346．770，P=0．000），其中随着叶黄素质量浓度的增加，细胞凋亡率逐渐下降，组间比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）。空白对照组、模型对照组及12．5、25．0、50．0mg／L叶黄素组细胞中ROS含量分别为1．92±0．18、64．89±2．86、52．70±2．80、3
- 杨旭王明臣孙艳艳安慧娟李庆福鲍玉洲
- 关键词：MULLER细胞
- 银杏叶提取物对体外培养的人Müller细胞氧化损伤的保护作用被引量：2
- 2015年
- 背景 氧化应激是视网膜损伤中重要的病理生理过程,探讨保护视网膜免受氧化应激损伤的方法具有重要的临床意义.研究证实银杏叶提取物具有抗氧化、抗凋亡、抗血栓、抗炎等多种功能,但其对人Müller细胞的抗氧化作用研究较少. 目的 研究银杏叶提取物（EGb）对氧化剂三氧化二砷（As2O3）诱导的人Müller细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制. 方法 人Müller细胞株用含体积分数10％胎牛血清（FBS）、2μmol/L谷氨酰胺和质量分数1％青链霉素双抗的DMEM/F12培养液进行培养和传代,取对数生长期的Müller细胞分为5个组,阴性对照组细胞采用常规培养法进行培养,在培养基中加入终质量浓度为5 mg/L的As2 O3处理细胞24 h以建立细胞氧化损伤模型,然后将5、10和20 mg/L EGb分别加入模型细胞培养液中作用24 h,采用MTT法检测各组细胞的活力;采用CM-H2DCFDA荧光探针法测定各组细胞活性氧簇（ROS）含量;采用逆转录PCR（RT-PCR）法检测细胞中easpase-3 mRNA的相对表达量;采用Western blot法分别检测细胞质和细胞核中Nrf2蛋白的表达. 结果 Müller细胞接种至培养瓶后24 h,倒置显微镜下可见接种细胞贴壁良好,培养6～7d时Müller细胞的细胞体积较大,细胞质丰富,呈镶嵌样排列.As2O3处理组部分细胞凋亡,呈卵圆形悬浮在培养液中.MTT法测定结果表明,阴性对照组细胞活力（A值）最高,As2 O3处理组细胞活力最低,而As2O3 ＋5 mg/L EGb组、As2O3＋10 mg/L EGb组和As2O3＋20 mg/L EGb组A值随着EGb质量浓度的增加而逐渐增加,各组间总体比较差异有统计学意义（F=163.57,P=0.00）.阴性对照组细胞中ROS荧光强度最弱,As2O3处理组最强,As2O3 ＋5 mg/L EGb组、As2O3＋10 mg/L EGb组和As2 O3 ＋20 mg/L EGb组细胞中ROS荧光强度值随着EGb质量浓度的升高而逐渐减弱,各组间细胞中ROS荧光强度值的总体比较差异有统计学意义（F=4 013.61,P=0.00）.细胞内ca
- 孙艳艳杨旭安慧娟李庆福鲍玉洲
- 关键词：银杏科细胞缺氧
