杜长青
- 作品数：7 被引量：16H指数：2
- 供职机构：潍坊医学院药学与生物科学学院更多>>
- 发文基金：山东省高等学校科技计划项目山东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CyclinB1、CDK1在食管鳞癌组织中的表达及临床意义被引量：9
- 2009年
- 目的:探讨食管鳞癌组织中细胞周期蛋白CyclinB1和细胞周期蛋白依赖性激酶CDK1表达及其临床病理学意义.方法:应用免疫组织化学SP法对52例食管鳞癌(组织学Ⅰ级8例,Ⅱ级20例,Ⅲ级24例;有淋巴结转移20例,无淋巴结转移32例;原位癌16例,侵袭性癌36例包括浸润至黏膜下层、肌层、全层)及其配对的癌旁正常组织进行CyclinB1、CDK1的检测,分析其阳性表达与食管鳞癌患者临床病理因素的关系.结果:食管鳞癌组织中CyclinB1、CDK1的阳性表达高于癌旁正常食管黏膜组织,2组差异都有统计学意义(71.2%vs2.0%,65.4%vs3.9%,均P<0.05).食管鳞癌组织中CyclinB1、CDK1的表达都与性别、年龄无关;与组织学分级、浸润深度及淋巴结转移有关(均P<0.05).CyclinB1阳性表达强度与CDK1的阳性表达强度之间呈正相关(r=0.697,P<0.05).结论:CyclinB1、CDK1的高表达会促进食管鳞癌的发生与发展.而且食管鳞癌中CyclinB1与CDK1的表达密切相关,可作为食管鳞癌生物学行为预测的参考指标.
- 赵春玲陈丽梅高志芹杜长青潘智芳于文静
- 关键词：食管鳞癌CYCLINB1细胞周期蛋白依赖性激酶
- PLK1基因RNAi慢病毒载体的构建及对食管鳞癌细胞侵袭转移的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:研究慢病毒介导的PLK1(Polo-like kinase1)基因RNAi对食管鳞癌细胞侵袭转移的影响.方法:利用RT-PCR和Western blot检测不同食管鳞癌细胞中PLK1的表达.根据人PLK1mRNA序列设计干扰片段,Western blot检测干扰效率;利用划痕愈合实验及Transwell实验研究靶向PLK1的RNAi对食管鳞癌细胞体外侵袭转移能力的影响.将有效干扰序列构建至慢病毒干扰载体pGLV/H1/GFP+Puro中,测序鉴定.重组慢病毒载体与包装质粒共转染293T细胞包装病毒,制备的重组病毒感染食管鳞癌细胞,利用荧光定量PCR和Western blot检测干扰效率;利用裸鼠肺转移模型实验研究慢病毒介导的PLK1基因RNAi对食管鳞癌细胞在体内侵袭转移能力的影响.结果:筛选出一种高表达PLK1的食管鳞癌细胞株TE-8用于实验研究;筛选出有效的干扰片段,并成功构建靶向干扰PLK1基因的慢病毒载体,制备重组病毒颗粒用于感染食管鳞癌细胞;靶向PLK1的RNAi在体内外均能明显抑制食管鳞癌细胞的侵袭与转移.结论:靶向干扰PLK1基因的重组慢病毒能够抑制食管鳞癌细胞的侵袭与转移,PLK1基因影响着食管鳞癌的恶性进展.
- 于文静张宝刚陈丽梅王守训冯卫国杜长青刘顺梅赵春玲
- 关键词：PLK1慢病毒载体RNAI食管鳞癌
- 单环刺螠纤溶酶UFE-Ⅱ的分离纯化及其酶学性质被引量：4
- 2010年
- 目的分离纯化单一组分的单环刺螠纤溶酶UFE-Ⅱ,并分析其酶学性质。方法单环刺螠体腔液经离心、超滤、离子交换层析、凝胶过滤等方法进行分离纯化,得到单一洗脱峰酶组分,经Native-PAGE、SDS-PAGE和飞行质谱分析,测定其纯度和相对分子质量;并以酪蛋白为底物,Folin-酚试剂法测定酶活力,对其酶学性质进行分析。结果分离纯化的UFE-Ⅱ具有水解纤维蛋白的活性,其水解酪蛋白的比活力达到375.6U/mg,纯化倍数为10.3倍,回收率为14.0%。UFE-Ⅱ为单一组分,纯度达99%以上,相对分子质量为24329。UFE-Ⅱ的最适反应温度约为45℃;最适反应pH值为7.0;Ca2+、Mn2+和Fe2+是该酶的强激活剂;Fe3+、Cu2+和Pb2+对该酶活力具有一定的抑制作用;SBTI和PMSF能完全抑制酶活力,表明该酶为丝氨酸蛋白酶;糜蛋白酶抑制剂可部分抑制酶活力,亮抑酶肽、抑蛋白酶肽、苯甲脒可较弱地抑制酶活力。结论从单环刺螠体内成功分离纯化出纤溶酶UFE-Ⅱ,并分析了其酶学性质,该酶具有进一步开发利用价值。
- 初金鑫蔡文娣韩宝芹刘万顺杜长青谭永林
- 关键词：单环刺螠纤溶酶纯化酶学性质
- 慢病毒介导的人PLK1RNA干扰对食管鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及机制被引量：2
- 2013年
- 目的研究靶向人PLK1的RNA干扰对食管鳞癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其机制。方法介导PLK1 siRNA表达的重组慢病毒感染食管鳞癌细胞,通过荧光定量PCR和Western blot检测PLK1基因的干扰效率;应用裸鼠皮下移植瘤模型,进行慢病毒载体介导PLK1基因的RNA干扰治疗,研究PLK1对体内食管鳞癌移植瘤生长的影响,并通过瘤组织免疫组化检测Caspase-3和CD31的表达及计算新生血管密度的方法,探讨PLK1影响移植瘤生长的相关机制。结果介导PLK1 siRNA表达的重组慢病毒能明显抑制食管鳞癌细胞中PLK1的表达及裸鼠体内移植瘤的生长。下调的PLK1可能通过调控Caspase-3的表达而诱导食管鳞癌细胞凋亡,通过抑制食管鳞癌的血管生成而抑制了食管鳞癌的恶性进展。结论 PLK1促进了食管鳞癌的恶性生长。PLK1有可能是治疗食管鳞癌的一个新靶点。
- 刘晓影陈丽梅张宝刚冯卫国王守训杜长青刘顺梅赵春玲
- 关键词：RNA干扰食管鳞癌CD31
- 利用慢病毒载体介导PLK1 RNAi在治疗食管鳞癌转移中的应用
- 本发明涉及一种针对PLK1基因RNA干扰的重组慢病毒载体的构建及其在治疗食管鳞癌转移中的应用。重组慢病毒载体包括：一段核苷酸序列和慢病毒载体pGLV/H1/GFP+Puro，能够表达人PLK1基因siRNA分子的正义链和...
- 赵春玲刘晓影陈丽梅高志芹冯卫国杜长青
- 文献传递
- 斑马鱼TK1基因的克隆表达
- 2012年
- 目的:克隆斑马鱼TK1基因的cDNA序列,并在大肠杆菌中诱导表达,对其产物进行生物学活性鉴定。方法:采用RT-PCR和RACE方法,克隆TK1的cDNA全长序列。表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。表达蛋白利用镍离子柱纯化。结果:获得TK1基因的cDNA全长序列,编码一个分子量为26kD的蛋白。结论:TK1融合蛋白在28℃条件表现出比较高的生物学活性,达到0.45 U/mg。
- 杜长青初金鑫赵春玲刘顺梅
- 关键词：斑马鱼胸苷激酶克隆表达生物活性
- 海蚯蚓蛋白酶基因的原核表达及其抗肿瘤活性被引量：1
- 2015年
- 目的原核表达海蚯蚓蛋白酶基因,探讨其对肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法根据环节动物门蚯蚓和单环刺螠丝氨酸蛋白酶c DNA序列多重比对获得的保守序列设计引物,从海蚯蚓肠道组织提取总RNA,经3′RACE和5′RACE技术分别克隆海蚯蚓蛋白酶c DNA序列的3′端和5′端,并进行拼接,对其编码的蛋白质作生物信息学分析;将海蚯蚓蛋白酶成熟肽的编码序列亚克隆至原核表达载体p ET-21a(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行诱导表达,采用组氨酸亲和层析柱纯化;MTT法检测重组蛋白的抗肿瘤活性。结果经3′端RACE技术获得约250 bp的海蚯蚓蛋白酶基因c DNA 3′端序列,再经5′RACE技术扩增获得约770 bp的c DNA 5′端序列,拼接可得海蚯蚓蛋白酶c DNA序列全长为880 bp,其编码蛋白含270个氨基酸,具有高度保守的GDSGGP序列;重组蛋白相对分子质量为27 000,主要以包涵体形式表达,约占菌体总蛋白的30%,上清纯化后纯度可达95%;重组蛋白酶对人肿瘤细胞增殖具有明显的抑制作用。结论原核表达了海蚯蚓蛋白酶,可明显抑制人肿瘤细胞的增殖,为抗肿瘤基因工程药物的研发提供了实验依据。
- 于文静鞠吉雨初金鑫张金宝连波杜长青赵春玲
- 关键词：丝氨酸蛋白酶原核细胞基因表达抗肿瘤活性
