李锋
- 作品数：12 被引量：26H指数：3
- 供职机构：中国疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- PrP的胞内运输与朊病毒病被引量：3
- 2005年
- 朊病毒病,即传染性海绵状脑病(transmissiblespongiformencephalopathies,TSEs),是一类致死性的神经退行性疾病,存在散发性、感染性和遗传性3种形式。在朊病毒病的病理过程中,细胞正常朊蛋白PrPC(cellularPrP)转化为异常构象的PrPSc(scrapiePrP)是至关重要的,但是朊病毒的增殖如何导致神经元凋亡仍不清楚。PrPC的胞内运输在朊病毒病中发挥重要作用,朊病毒感染后PrPC转化为PrPSc,及遗传性朊病毒病中PrP突变可能影响PrP的生物合成、亚细胞定位及转运过程,通过干扰PrPC的正常功能或产生毒性中间体而导致神经系统病变。现对近年来关于PrP胞内运输在朊病毒病中的作用进行综述。
- 王小凡韩俊高建梅万言珍李锋董小平
- 关键词：朊病毒病传染性海绵状脑病神经退行性疾病亚细胞定位病理过程
- 人基质金属蛋白酶9片段的表达和纯化及多克隆抗体制备
- 基质金属蛋白酶(matrixmentaloproteases，MMPs)是一类锌依赖性肽链内肽蛋白酶大家族，目前已经发现至少28个成员，MMPs涉及到正常组织的发育与再塑型、创伤修复、骨骼塑型、胚胎种植及肿瘤的侵袭和转移...
- 李锋
- 关键词：基质金属蛋白酶蛋白纯化多克隆抗体
- 文献传递
- 微管相关蛋白Tau与朊蛋白PrP的相互作用的研究
- ＜正＞微管相关蛋白tau被认为与某些prion疾病发病有关,我们利用RT-PCR技术,从人神经母细胞瘤系SSY-5Y克隆出tau微管结合区序列;亚克隆至原核表达载体pGEX-2T,纯化出重组tau蛋白,制备了tau多克隆...
- 韩俊张瑾姚海兰王小凡李锋陈岚高晨高建梅聂凯董小平
- 关键词：TAUPRP微管蛋白蛋白相互作用
- 文献传递
- 一种新的PrP无细胞构象转化系统的建立
- 2005年
- PrP细胞外构象转化系统已经被一些实验室用于朊病毒的研究,但在反应体系中往往需要使用放射性同位素。为了建立一种安全方便的PrP无细胞构象转化系统用于TSE发病机制的研究,通过PCR方法获得仓鼠PrP(HaPrP)全长基因,克隆至原核表达载体pQE30,在大肠杆菌中表达并纯化出分子量为27kDHaPrP蛋白,Westernblot证实可与PrP特异性单克隆抗体反应。将纯化蛋白在体外标记生物素(Biotin-7-NHS),与纯化的scrapie263K毒株仓鼠感染脑组织PrPSc蛋白共同孵育4天后,经蛋白酶K消化,Westernblot检测,证明存在一条抵抗蛋白酶K消化的、被亲和素特异性识别的条带,其分子量约为20kD。这表明HaPrPsen可以被转化为HaPrPres。实验表明,可以利用原核系统取代真核系统表达PrP,并用生物素标记取代35S标记纯化蛋白,建立一个更加安全方便的无细胞构象转化系统,用于朊病毒的研究。
- 张瑾王小凡高建梅李锋韩俊陈岚张宝云周伟刘勇董小平
- 关键词：PRP原核表达生物素标记
- PrP可抑制tau介导的体外微管形成作用被引量：3
- 2005年
- 目的研究朊蛋白(PRP)对微管相关蛋白(TAU)介导的体外微管形成的影响。方法我们从兔脑组织中纯化出微管蛋白,并纯化出原核表达的TAU和PRP蛋白。利用电子显微镜技术显示微管蛋白的聚集、TAU对微管蛋白的聚集的影响,及PRP对TAU介导的微管蛋白形成微管的影响。通过GST PULL DOWN实验研究TAU与微管蛋白的相互作用,PRP对TAU与微管蛋白相互作用的影响。结果电子显微镜负染显示纯化的微管蛋白在一定的实验条件下可聚集形成直径为25 NM的微管结构。在反应体系中加入TAU后微管样结构的形成明显增加,而加入PRP后可显著地抑制TAU对微管结构形成的促进作用。重组TAU能与提取的天然微管蛋白在体外结合,而PRP可明显地抑制TAU与微管蛋白的结合作用,并呈现剂量依赖关系。结论 TAU蛋白可促进微管蛋白形成微管结构,而PRP可通过与TAU的相互作用抑制微管的形成。
- 韩俊王小凡姚海兰高晨李锋张宝云姜慧英董小平
- 关键词：朊蛋白微管蛋白微管
- 早老素蛋白的研究进展被引量：4
- 2005年
- 早老素蛋白(presenilin.PS)的基因多态性与阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)发病关系密切。P5是具有多个跨膜区的膜蛋白,在神经细胞中表达最广泛,主要定位在内质网(endoplasmic reticulum,ER)。PS与Notch蛋白、sel-12及δ-catenin蛋白都有相关性,因此可能在一定程度上参与lin-12/Nocth、Wingless/Wnt信号传导途径。另外,P5可使Aβ42分泌增多,PS-2使神经细胞对凋亡刺激物敏感性增强,同此在AD的发生中起到重要作用。
- 石琦李锋高晨周玉玲董小平
- 关键词：阿尔茨海默病细胞凋亡
- 微管相关蛋白tau与朊蛋白的相互作用被引量：6
- 2006年
- 微管相关蛋白tau参与了许多神经退行性疾病的发生, 其中包括一些人类可传播性海绵状脑病. 为了探讨tau与朊蛋白（PrP）之间可能存在的关系, 首先通过GST pull-down和免疫共沉淀等技术发现重组tau蛋白可通过微管结合区与来源于正常叙利亚仓鼠脑组织中的正常细胞膜朊蛋白（PrP^C）和羊瘙痒因子263K感染仓鼠脑组织的异常朊蛋白（PrP^Sc）相结合. 利用免疫共沉淀实验发现在正常和羊瘙痒因子感染的仓鼠脑组织中存在tau蛋白与PrP^C和PrP^Sc的相互作用, 并且利用激光共聚焦方法检测到PrP和tau蛋白在CHO细胞内具有共定位的关系. 为了确定PrP与tau蛋白相互作用的部位, 构建了不同区域的PrP片段, 从而证明PrP与tau蛋白相互作用的区域位于PrP的N端序列（23～91 aa）. PrP与tau蛋白分子间相互作用的直接实验证据提示tau蛋白可能参与PrP的正常生理功能以及朊病毒病的病理过程.
- 韩俊张瑾姚海兰王小凡李锋高晨周伟张宝云董小平
- 关键词：朊蛋白蛋白相互作用
- Tau融合蛋白及其缺失突变体与朊蛋白的体外作用分析被引量：1
- 2006年
- 在部分朊病毒病(priondiseases)中,高度磷酸化的微管相关蛋白tau与朊蛋白(prionprotein,PrP)发生共定位,tau蛋白可能在朊病毒病的病理机制中有重要作用.本室已经证明二者可以发生分子间相互作用,本文进一步分析了tau蛋白与prion的体外相互作用及作用位点.利用RTPCR方法从人源细胞系SHSY5YcDNA中扩增出微管相关蛋白tau全长cDNA序列,克隆至质粒pGEX2T载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白GSTtau.利用GSTpulldown及免疫共沉淀方法检测全长tau蛋白与PrP23231的分子间相互作用.进一步表达tau蛋白的各种缺失突变体,确定tau蛋白与PrP蛋白的相互作用位点.结果表明,所表达的全长tau蛋白及各种缺失突变体均为可溶性蛋白,Western印迹结果显示,各种蛋白均能很好的被tau蛋白单抗识别.GSTpulldown和免疫共沉淀实验均显示,原核表达的全长tau蛋白可与全长的PrP蛋白在体外发生相互作用,并确定相互作用位点位于tau蛋白的N端序列及中段的重复区.上述结果为研究tau蛋白与PrP的相互作用在朊病毒病的发病机制中的意义提供了一定的理论基础.
- 王小凡韩俊董辰方韩露万言珍李锋安润董小平
- 关键词：朊蛋白分子间相互作用
- 淀粉样前体蛋白的原核表达、纯化及抗血清的制备和应用被引量：1
- 2006年
- 提取SH-SY5Y细胞的总RNA并合成单链cDNA,用PCR方法扩增出APP基因羧基端片段.测序后克隆至表达载体,在大肠杆菌M15中分别表达APP-C100和GST-APP-C100融合蛋白,纯化的GST-APP-C100分子量约为38kD,APP-C100约为18kD,此外在APP-C100纯化产物中还存在有超过97kD的聚合物.体外蛋白酶消化实验显示纯化的GST-APP-C100和APP-C100单体对蛋白酶K消化敏感,而APP-C100聚合物具有抵抗蛋白酶消化能力.以GST-APP-C100免疫实验用兔后得到的APP抗血清经Western印迹鉴定可特异性识别重组及细胞内源性APP.
- 石琦韩俊高晨李锋张宝云周玉玲董小平
- 关键词：淀粉样前体蛋白原核表达多克隆抗体
- 郑州市预防接种禁忌证与不良反应认知及其告知的现状调查
- 研究目的：了解郑州市县级免疫规划管理者、预防接种工作人员和儿童家长对预防接种禁忌证、不良反应知识掌握及其告知执行情况，从中找出存在的问题，为更好地执行和完善预防接种告知制度，提高预防接种服务质量提供参考依据。
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- 李锋
- 关键词：预防接种禁忌证知情同意书
- 文献传递
