李连峰
- 作品数：15 被引量：34H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 核内小体的复杂结构与多样化功能被引量：2
- 2021年
- 核内小体是定位于细胞核内的无膜结构,为多蛋白-RNA复合体,通过招募相关蛋白参与基因转录、RNA剪切、表观遗传调控、肿瘤发生与抑制及抗病毒防御等多种细胞活动。明确核内小体蛋白的形成过程、功能和调控机制对研究相关疾病与病毒-宿主作用机制均具有重要意义。以下以几种核内小体蛋白为例,对核内小体的形成方式、结构与功能进行综述,并重点阐述其在抗病毒感染中的重要作用,期望为宿主抗病毒免疫机制研究提供一个新的靶标。
- 刘欣媛李连峰仇华吉
- 关键词：抗病毒应答
- 犬瘟热病毒血凝蛋白在昆虫细胞中的表达与抗原性分析被引量：1
- 2014年
- 为获得具有天然构象及良好抗原性的犬瘟热病毒(CDV)血凝蛋白(H),本研究以HLJ2-07毒株为模板,利用RTPCR方法扩增出H基因,将其克隆到pFastBacTMHTA载体中,利用大肠杆菌DH10BacTM同源重组构建穿梭质粒reBACmidrH,将重组穿梭质粒转染Sf9昆虫细胞,进行杆状病毒表达。利用Western blotting对获得的重组蛋白进行鉴定及抗原性分析。同时,利用在线网站与软件对CDV H蛋白进行B细胞表位分析预测。结果显示,在杆状病毒系统中表达的H蛋白能与His-tag单克隆抗体及CDV阳性血清发生特异性反应,表明该蛋白成功表达,且具有良好的反应原性;用Swiss-model同源建模软件及B细胞表位预测软件,预测H蛋白可能具有的B细胞表位有5处,分别是175—195、240—250、365—380、480—508及526—555。本研究获得了具有天然构象及良好抗原性的CDV重组H蛋白,可为诊断试剂开发、单克隆抗体制备及表位筛选等工作奠定基础。
- 全传松姜骞于作李博韬李连峰曲连东
- 关键词：犬瘟热病毒B细胞表位
- PRRS典型毒株接种巴马小型猪的实验研究
- 猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS）是由动脉炎病毒科动脉炎病毒属的猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive ...
- 李连峰
- 关键词：巴马小型猪PRRS免疫保护细胞因子
- 文献传递
- 云芝葡聚糖对非洲猪瘟病毒的体外抑制作用
- 2022年
- 研究云芝葡聚糖抑制非洲猪瘟病毒(ASFV)感染效果并初步探索其作用机制。利用CCK-8试剂检测云芝葡聚糖对原代猪肺泡巨噬细胞(PAM)的毒性并计算半数细胞毒性浓度(CC50);ASFV感染细胞,检测不同质量浓度云芝葡聚糖抗ASFV感染的剂量依赖效应,并计算半数抑制浓度(IC_(50));将25 mg/L的云芝葡聚糖与病毒悬液孵育处理,稀释后加入PAM,评价云芝葡聚糖体外直接杀灭ASFV的效果;同时在ASFV复制周期的不同时间点利用云芝葡聚糖处理细胞,确定其抗ASFV效果最显著的效应阶段;通过qPCR检测抗病毒相关细胞因子转录水平来初探其抗病毒机制。云芝葡聚糖的毒性较弱(CC50为270.1000 mg/L),具有一定的抗病毒效果(IC_(50)为0.9575 mg/L),其不能直接杀灭病毒;在ASFV感染前6~12 h使用云芝葡聚糖处理细胞,其抑制病毒复制的效果最为显著,且PAM的IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α等细胞因子的mRNA水平显著升高。
- 刘欣媛孙元李素李连峰仇华吉
- 关键词：非洲猪瘟病毒抗病毒药物细胞因子
- 犬瘟热病毒N和H蛋白拮抗IFN-β信号通路的研究被引量：3
- 2021年
- 为研究犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)不同毒株N、H蛋白调控宿主β-干扰素(IFN-β)表达的作用,将CDV野毒株LN(10)1、SD(14)7和疫苗株CDV3感染提前转染了pGL3-IFN-β报告基因质粒和pRL-TK内参质粒的MDCK细胞,分别在感染0 h、8 h、12 h和24 h后通过双荧光素酶报告系统检测试剂盒测定IFN-β启动子的活性。将CDV野毒株LN(10)1、SD(14)7和疫苗株CDV3 N和H基因克隆到pCI真核表达载体。重组表达质粒分别转染HEK293T细胞,应用Western blot检测蛋白能否正确表达。将N和H蛋白重组表达质粒连同pGL3-IFN-β报告基因质粒和pRL-TK内参质粒共转染至HEK293T细胞后,经Poly(I:C)刺激细胞,利用双荧光素酶报告系统检测系统测定IFN-β启动子活性。结果显示3种不同毒力的CDV在感染MDCK细胞后,只有CDV 3疫苗株感染后能观察到IFN-β启动子短暂激活。Western blot实验证实,3种毒株N和H蛋白在HEK293T细胞中均能正确表达。双荧光素酶报告系统对IFN-β启动子检测活性结果显示,Poly(I:C)成功激活了IFN-β信号通路,而这种激活作用在表达CDV不同毒株的N或H蛋白时均受到显著抑制(P <0.01),但不同毒株N或H蛋白对IFN-β信号通路的调控与CDV毒力无关。本研究证实了CDV野毒株和疫苗株N、H蛋白可抑制宿主IFN-β信号通路,为进一步研究CDV与宿主分子互作奠定基础。
- 龚成燕李连峰陈杰胡博赵建军
- 关键词：犬瘟热病毒N蛋白IFN-Β
- 非洲猪瘟病毒MGF110-5-6L基因功能分析
- 2023年
- 非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)感染猪只引起的一种高度接触性传染病,最急性型致死率可高达100%。ASFV结构非常复杂,编码超过160多种蛋白质,其中多基因家族(multigene families, MGFs)蛋白包括MGF100、MGF110、MGF300、MGF360和MGF505/530等,且MGF360和MGF505可抑制宿主干扰素(interferon, IFN)的产生以及影响ASFV的致病性。但关于MGF110家族相关基因的功能尚无报道,因此本研究选取了MGF110家族中MGF110-5-6L基因进行了相关功能的探究。应用同源重组技术构建了MGF110-5-6L基因缺失的突变体病毒(ASFV-ΔMGF110-5-6L),通过检测该突变体病毒在原代猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages, PAMs)中的复制水平来探究其在ASFV复制周期中的功能,结果表明,其复制动力学曲线与亲本病毒ASFV HLJ/2018(ASFV-WT)一致,说明缺失MGF110-5-6L基因不影响ASFV在PAMs中的复制。为了探究MGF110-5-6L蛋白在ASFV复制周期中的生物学功能,将ASFV-WT和ASFV-ΔMGF110-5-6L分别感染PAMs,在感染后4,12,20 h收集样品,进行转录组测序。结果显示,与ASFV-WT感染组相比,ASFV-ΔMGF110-5-6L感染组中差异表达基因主要为和IL-17信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路以及细胞因子与细胞因子受体之间的相互作用相关。本研究构建了ASFV MGF110-5-6L基因缺失毒株,并通过转录组测序发现,MGF110-5-6L基因作为ASFV复制非必需基因具有拮抗细胞因子表达的功能,不仅为探究MGF110家族成员的生物学功能提供科学数据,还为深入揭示ASFV拮抗宿主细胞天然免疫反应的分子机制提供参考。
- 张柯慧葛海亮于少雄李连峰李素仇华吉
- 关键词：非洲猪瘟病毒转录组测序
- 长链非编码RNA--抗病毒天然免疫应答的新兴调控因子被引量：6
- 2018年
- 长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)是长度超过200nt的非编码RNA分子的总称。作为一类重要的基因调控因子,lncRNAs在表观遗传学、转录及转录后等多个水平调控靶基因的表达。近年来的研究表明,许多lncRNAs可被病毒或干扰素(interferon,IFN)诱导表达,并作为调控因子在IFN介导的抗病毒天然免疫应答中调节抗病毒相关基因的表达。本文重点阐述了lncRNAs在IFN介导的抗病毒天然免疫应答中的调控作用,尤其是对干扰素刺激基因(interferon-stimulated genes,ISGs)转录的调控作用,并归纳了lncRNAs、IFN和ISGs形成的调控网络,以期为从事lncRNAs调控IFN介导的抗病毒天然免疫应答机制研究的相关科研人员提供参考。
- 张华伟孟星宇李连峰杨玉莹仇华吉
- 关键词：长链非编码RNA干扰素
- 利用CRISPR/Cas9技术构建OAS2敲除的PK-15细胞系及敲除OAS2对CSFV复制的影响被引量：5
- 2019年
- 为研究猪源2’-5’寡腺苷酸合成酶2(OAS2)对CSFV复制的影响,本研究利用CRISPR/Cas9系统构建敲除OAS2的PK-15细胞系(PK-OAS2-KO)。在构建PK-OAS2-KO细胞系时,设计2条分别靶向OAS2基因第1和第2外显子的特异性sg RNAs,将sg RNA插入LentiCRISPRv2载体获得重组质粒plentiCRISPRv2-sgRNA;将重组质粒与辅助质粒共转染HEK293T细胞,包装获得携带sg RNA的慢病毒后以MOI 1转导PK-15细胞,通过嘌呤霉素药物筛选及有限稀释法获得单克隆细胞株,经基因测序和western blot鉴定OAS2敲除效果。利用MOI 0.01r CSFV-Rluc株(报告病毒)或CSFV Shimen株分别感染PK15细胞获得的PK-OAS2-KO细胞系,经荧光素酶活性检测和q RT-PCR证实敲除OAS2基因能够促进CSFV复制。综上,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了OAS2基因敲除的PK-15细胞系,并发现OAS2具有抑制CSFV复制的作用,本研究为进一步研究OAS2抗CSFV作用的分子机制提供了依据。
- 张越秀张华伟李连峰仇华吉
- 关键词：PK-15猪瘟病毒
- 巴马小型猪主要细胞因子的克隆及序列分析
- 为了丰富广西巴马小型猪细胞因子生物学数据,本文采取广西巴马小型猪的外周血,分离淋巴细胞,提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR扩增,将克隆出的与目的基因大小相符的片段回收,再与T载体连接,转化到大肠杆菌DH5α中,...
- LI Lian-feng李连峰姜骞JIANG QianLIN Huan林欢LI Hong李红LIU Jia-seng刘家森GUO Dong-chun郭东春YUAN Dong-wei原冬伟崔玉东CUI Yu-dongQU Lian-dong曲连东
- 关键词：广西巴马小型猪细胞因子基因克隆
- 病毒感染引起的炎症反应:宿主对抗病毒的“双刃剑”被引量：1
- 2022年
- 先天性免疫系统作为宿主抵抗外来病原入侵的第一道防线,也是最迅速的防御系统。宿主先天性免疫系统中的模式识别受体识别入侵信号并激活炎症信号通路,诱导产生大量促炎性细胞因子,引起炎症反应。病毒感染是激活炎症反应的条件之一,诱导机体产生强烈的免疫应答,强大的炎症反应调控网络在宿主抗病毒过程中发挥关键作用,以维持机体的平衡。本文综述了病毒感染引起的炎症反应,重点介绍了宿主对炎症反应的调控网络,以及DNA和RNA病毒对炎症反应的调节机制,为病毒感染引起的免疫性疾病的治疗提供参考。
- 葛海亮李素于少雄李淑红李连峰周萍萍杨玉莹仇华吉
- 关键词：炎症反应病毒感染免疫调节机制病理损伤
