李经纬
- 作品数：4 被引量：11H指数：3
- 供职机构：第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- NEDD4调控AMPK活性参与心肌细胞慢性缺氧适应的研究被引量：3
- 2015年
- 目的探讨NEDD4在心肌细胞慢性缺氧适应过程中的作用及其可能的机制。方法1收集手术矫正的先心病患儿32例,其中紫绀型先心病18例,非紫绀型先心病14例。取术中切除的右室流出道心肌组织作为标本,用免疫组化染色检测NEDD4在心肌细胞中表达的分布,Western blot检测NEDD4在心肌组织中的表达情况;2将H9c2心肌细胞分为常氧组、慢性缺氧组和阳性对照组,其中慢性缺氧组又分为对照组、空白转染组和干扰转染组,设计合成以心肌细胞NEDD4基因为靶标的siRNA,通过阳离子脂质体将合成的siRNA转染至H9c2心肌细胞中,常氧培养(74%N2,5%CO2,21%O2)48 h后开始对慢性缺氧组心肌细胞进行缺氧刺激(94%N2,5%CO2,1%O2),缺氧刺激72 h后Western blot检测NEDD4、p-AMPK表达水平变化,流式细胞术检测缺氧刺激所致心肌细胞损伤情况。结果 1紫绀组患儿术前血氧饱和度明显低于非紫绀组(P<0.05);免疫组化染色结果显示NEDD4主要分布于心肌细胞质中;与非紫绀组相比,紫绀组患儿心肌组织中NEDD4表达水平显著下降[NEDD4/β-actin条带灰度比值:非紫绀组(0.72±0.07);紫绀组(0.42±0.06),P<0.05];2与常氧组相比,对照组心肌细胞死亡比例显著增加(P<0.05);但干扰NEDD4表达后,缺氧所致心肌细胞损伤比例降低(P<0.05)。Western blot检测结果显示,与空白转染组相比,干扰转染组AMPK磷酸化水平显著增加[p-AMPK/AMPK条带灰度比值:空白转染组(0.21±0.01),干扰转染组(0.88±0.04),P<0.05]。结论 NEDD4可能通过调控AMPK活性参与慢性缺氧情况下心肌细胞代谢的适应调节。
- 鞠胜杰李畑波蹇朝马瑞彦李经纬贾维坤唐富琴肖颖彬
- 关键词：AMPK
- 腺苷酸激活蛋白激酶激活参与促进慢性缺氧时心肌细胞存活被引量：4
- 2015年
- 目的检测腺苷酸激活蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK）在慢性缺氧心肌组织中的激活水平,探讨AMPK激活对慢性缺氧心肌细胞存活的影响及其意义。方法选择本科2013年行手术矫治的先心病患儿24例,其中紫绀型先心病患儿12例,非紫绀型先心病患儿12例,取手术中切除的右室流出道心肌组织作为标本;选用4-6周龄清洁级雄性SD大鼠24只,分为常氧组和缺氧组（n=12）。将缺氧组置入低压舱（模拟海拔5 000 m,气压405 mm Hg）,常氧组正常饲养。同时喂养28 d后,处死大鼠后迅速取出心脏并分离出右心室部分作为标本。采用Western blot分别检测p-AMPK在人体、大鼠缺氧心肌组织中的激活水平。选用H9c2心肌细胞株,并将其分为常氧组、低氧组、阻断组、激活组。将后3组细胞置入缺氧培养箱3 d（94%N2,5%CO2,1%O2）,建立H9c2心肌细胞株慢性缺氧模型;常氧组置入细胞培养箱3 d,对照培养。分别向阻断组和激活组中加入AMPK特异性阻断剂Compound C和激活剂AICAR,采用Western blot检测p-AMPK的表达,流式细胞仪、TUNEL法检测心肌细胞凋亡,Hoechst33528染色观察细胞核形态、LDH测定心肌细胞死亡率。结果 Western blot结果显示与常氧组相比,缺氧心肌组织中p-AMPK/AMPK比值明显增高。与低氧组比较,AMPK阻断组凋亡细胞比例升高,TUNEL-阳性细胞比例、不正常核比例、细胞死亡率均明显升高（P〈0.05,P〈0.01）;AMPK激活组与低氧组比较,凋亡细胞比例、TUNEL-阳性细胞比例、不正常核比例、细胞死亡率均有降低（P〈0.05）。结论在慢性缺氧条件下,AMPK蛋白磷酸化水平增强,p-AMPK对心肌细胞慢性缺氧适应具有一定保护作用。
- 李畑波鞠胜杰蹇朝李经纬唐富琴肖颖彬
- 关键词：慢性缺氧心肌细胞
- MiR-17-5p调控STAT3信号通路在心肌慢性缺氧适应中意义的研究被引量：4
- 2016年
- 目的探讨心肌慢性缺氧环境下,miR-17-5p的表达变化以及miR-17-5p对STAT3信号通路的调控对于缺氧心肌细胞的影响。方法 1选取新桥医院心外科2014年8月至2015年4月期间先心病患儿20例,其中紫绀型(年龄61.5±46.5月,术后诊断为法洛氏四联症)与非紫绀型(年龄43.2±32.1月,术后诊断为室缺伴右心室流出道狭窄)各10例。术中取右室流出道心肌组织作为标本,采用RT-PCR检测两组先心病患儿心肌组织miR-17-5p的表达情况。2建立大鼠源H9c2心肌细胞慢性缺氧适应模型,分为缺氧0、12、24、48、72 h组(n=5),RT-PCR分别检测各组miR-17-5p的表达。3脂质体转染antagomir miR-17-5p和agomir miR-17-5p至H9c2心肌细胞,建立过表达miR-17-5p和沉默miR-17-5p的H9c2心肌细胞系,慢性缺氧培养48 h,CCK8实验检测细胞增殖情况,TUNNEL实验检测细胞凋亡情况,Western blot检测STAT3,p-Tyr-705-STAT3及其下游调控蛋白c-myc蛋白表达。结果 1与非紫绀组(0.482±0.163)相比,紫绀组(1.450±0.705)患儿miR-17-5p表达明显升高(P<0.01)。2慢性缺氧细胞模型研究结果显示慢性缺氧时H9c2细胞miR-17-5p表达逐渐增高(P<0.01)。3缺氧环境下miR-17-5p过表达明显抑制p-Tyr-705-STAT3、STAT3、c-myc表达,引起心肌心肌细胞增殖受抑制,凋亡增加(P<0.01);而抑制miR-17-5p对p-Tyr-705-STAT3、STAT3、c-myc表达改变不明显,且对于心肌细胞的增殖和凋亡改变也不明显(P>0.05)。结论在心肌慢性缺氧过程中,miR-17-5p可能参与调控STAT3-c-myc信号通路,对于心肌细胞的存活和功能调节有重要意义。
- 赵鹏南罗桂平姜云瀚李经纬唐富琴顾强肖颖彬
- 关键词：STAT3缺氧心肌细胞
- MicroRNA-1、MicroRNA-133、MicroRNA-34a及其可能靶蛋白Ankyrin-B在心房颤动患者心房组织中的表达及意义被引量：2
- 2014年
- 目的通过检测心房颤动(房颤)与窦性心律患者右心耳组织中microRNA-1、microRNA-133及microRNA-34a的表达差异,及其可能靶蛋白锚蛋白-B(Ankyrin-B)的表达变化,分析两者之间的关系,以从microRNAs调控水平研究房颤发生、发展的新机制。方法将第三军医大学新桥医院40例风湿性心瓣膜病行心瓣膜置换术患者分为房颤组[男8例,女12例;年龄(52.9±5.8)岁]和窦性心律组[男9例,女11例;年龄(52.4±6.2)岁]。采用逆转录-实时定量聚合酶链式反应(RTQ-PCR,Real-time quantitive PCR)法检测患者右心耳组织中microRNA-1、microRNA-133及microRNA-34a的表达,ΔΔCt法计算结果;石蜡切片免疫组织化学法检测组织中Ankyrin-B的表达;蛋白免疫印迹(Western Blotting)法检测组织中Ankyrin-B的表达变化。结果房颤组患者右心房组织中的microRNA-1表达较窦性心律组显著降低(0.559±0.252 vs.3.997±1.251;t=-21.455,P=0.000),microRNA-133的表达较窦性心律组显著降低(0.630±0.238 vs.5.514±1.549;t=24.133,P=0.000),而microRNA-34a的表达较窦性心律组增高(4.783±2.012 vs.1.350±0.638,t=12.596,P=0.000)。免疫组织化学法及Western Blotting均显示房颤组心房组织Ankyrin-B表达较窦性心律组明显降低,且差异有统计学意义(0.66±0.45 vs.1.09±0.42;t=-3.396,P=0.001)。结论 MicroRNA-34a可能通过调节Ankyrin-B蛋白的表达,从而参与心房颤动的发生、发展。
- 朱昀肖颖彬冯泽洲何思毅李经纬程伟
