李秦剑
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：河北大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金河北省教育厅科学技术研究计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- GALNT14对人乳腺癌MCF-7细胞迁移的影响被引量：2
- 2012年
- 构建真核表达载体pcDNA 3.1-Flag-T14,重组质粒经酶切分析及测序鉴定后,利用脂质体将重组质粒转染人乳腺癌细胞系MCF-7细胞,经G418筛选并建立稳定转染GALNT14细胞株。应用半定量RT-PCR、Western blot检测稳定细胞株GALNT14 mRNA及蛋白表达水平,细胞划痕修复及穿膜试验检测GALNT14基因对MCF-7迁移能力的影响,同时RT-PCR检测GALNT14对MMP-2,MMP-9,TGF-β1及VEGF等肿瘤浸润转移相关因子表达的影响。结果显示成功构建了真核重组表达载体pcDNA 3.1-Flag-T14,经RT-PCR和Western blot检测显示成功获得了稳定表达GALNT14的MCF-7细胞株;GALNT14能够提高MCF-7细胞株的迁移能力,且能增加侵袭转移相关因子MMP-2,MMP-9,TGF-β1及VEGF的表达。结论:GALNT14可明显促进MCF-7细胞的迁移,可能在肿瘤侵袭转移中起重要作用。
- 吴琛田焕娜王媛媛刘芳铭张晓康李秦剑谢园园
- 关键词：乳腺癌稳定转染细胞迁移
- 乙酰氨基半乳糖转移酶14(GALNT14)在毕赤酵母中的表达纯化及活性鉴定
- 2011年
- 将GALNT14全长编码区克隆到分泌型酵母表达载体pPIC9K中,构建重组载体pPIC9K-T14,经电转至毕赤酵母GS115中表达,使用G418筛选高表达重组菌,并对诱导条件进行优化,表达产物使用SDS-PAGE分析、Western blot鉴定、Sephadex G-100纯化、最后经HPLC检测活性。结果显示,在提供更好的供氧量条件下,用0.75%甲醇诱导可提高目的蛋白的表达量而降低杂蛋白的表达。培养上清液经SDS-PAGE检测显示目的蛋白分子量约64 kDa;Western blot结果显示在相应分子量处有一条特异性条带;利用Sephadex G-100成功分离纯化了目的蛋白;活性测定结果显示所获得的目的蛋白具有催化活性,为深入研究GALNT14的结构与功能奠定了基础。
- 吴琛葛建峰张博马思思刘芳铭王媛媛田焕娜刘晓波张晓康李秦剑
- 关键词：毕赤酵母分泌表达
