李珍珍
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 共表达外源OCT4/SOX2可激活人胚肾细胞中内源NANOG的表达被引量：1
- 2011年
- 自2006年诱导多能干细胞(iPS)技术诞生以来,采用病毒等载体进行的诱导方法已取得了成功.但是,其致瘤性的影响限制了病毒载体的推广与应用,而采用非病毒载体诱导iPS细胞成为研究的热点.本研究通过2个启动子的独立启动,构建了带有绿色荧光标记的OCT 4/SOX 2共表达诱导载体(pOct4/Sox2-EGFP).将该载体转染HEK 293FT细胞后,阳性克隆明显表达绿色荧光.并通过RT-PCR、免疫荧光等方法证明其中的转录因子OCT 4和SOX 2能在转染细胞中高效表达,同时诱导受体细胞中内源NANOG的转录表达.本研究说明,OCT 4/SOX 2共表达载体能激活NANOG基因的内源表达,暗示着非病毒不整合载体pOct4/Sox2-EGFP本身或与其它转录因子和小分子结合可用于诱导成体细胞的重编程.因此,本研究为下一步应用质粒载体诱导体细胞重编程为iPS细胞的研究奠定了工作基础.
- 李珍珍成德高祎王华岩
- 关键词：NANOG基因
- 成体细胞重编程的技术方法研究
- 动物胚胎干细胞（embryonic stem cells，ESCs）为早期胚胎发育、动物克隆、基因打靶和再生医学的研究提供了种子细胞。然而，由于取材困难和培养难度大等因素，大动物ES细胞的研究一直面临着很多困难。通过导入...
- 李珍珍
- 关键词：NANOG细胞重编程
- 猪L-Myc基因的分子克隆及在细胞重编程中的应用被引量：1
- 2012年
- 【目的】克隆猪L-Myc基因,并在蛋白水平表达的情况下探索其在细胞重编程中的作用,为深入研究猪L-Myc基因替代c-Myc诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPSC)奠定基础。【方法】先通过NCBI序列比对,采用RT-PCR克隆猪L-Myc基因cDNA,生物信息学分析猪L-Myc基因与人和小鼠的同源性,构建融合表达载体pEGFP/L-Myc-C1,通过载体转染和免疫印记检测猪L-Myc基因cDNA的蛋白水平表达;再将L-Myc基因装入逆转录病毒载体中,分别使用不同的转录因子诱导猪胎儿成纤维细胞(porcine embryo fibroblast,PEF),通过形态变化和碱性磷酸酶(AP)染色验证猪L-Myc基因在细胞重编程中的作用。【结果】①获得了1 113 bp的猪L-Myc基因cDNA,编码364个氨基酸,理论分子质量为40 kD;②生物信息学分析显示猪L-Myc基因与人和小鼠高度同源;③免疫印记检测结果说明猪L-Myc基因cDNA能够在蛋白水平表达;④细胞诱导试验和AP染色结果显示转录因子Oct4、Sox2、Klf4和L-Myc(OSKL)组合诱导的细胞阳性克隆率明显高于Oct4、Sox2和Klf4(OSK)组合的阳性克隆率。【结论】获得了猪L-Myc基因,并且该基因在蛋白水平表达且在细胞重编程过程中起到了重要的作用。
- 李珍珍崔怡高祎成德刘亚军王华岩
- 关键词：原癌基因致瘤性
