李玉欣
- 作品数：6 被引量：15H指数：2
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- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 禽流感免疫噬菌体抗体库构建及ELISA检测方法的建立
- 2012年
- 本研究应用噬菌体抗体库技术筛选禽流感亚型病毒Fab抗体,并建立相应ELISA检测方法。用禽流感亚型混合疫苗免疫小鼠,取其脾脏提取总RNA用于扩增免疫球蛋白轻链和重链基因,克隆至噬菌粒pComb3,然后转化入感受态细胞XL1-Blue中,以1012 CFU辅助噬菌体VCSM13进行感染后,获得Fab抗体库容量为8×107 CFU。以H5N1病毒为抗原进行4轮亲和筛选,获得特异性结合的克隆,利用获得的特异性克隆进行ELISA检测方法的建立。
- 邢佑尚汪琳张灿赵胤泽栢亚铎吴亚琼李玉欣
- 关键词：禽流感病毒噬菌体抗体库
- 家蚕丝腺组织Actin3引物非特异性扩增片段的鉴定及A3引物扩增条件的优化被引量：2
- 2009年
- 肌动蛋白基因3(Actin3)是家蚕分子生物学研究中检测组织cDNA模板质量常用的标志基因之一。我们在用实验室通用的Actin3引物扩增检测家蚕不同茧色品种(白血白茧品种夏芳、金色茧品种金一、黄血白茧品种03-000、锈色茧品种03-520)中肠、血液、丝腺组织cDNA时,发现以不同茧色品种丝腺组织cDNA为模板都能扩增出一条非特异性的小片段,而在中肠和血液组织cDNA的扩增产物中不存在。本研究对该丝腺特异的扩增小片段扩增产物进行了克隆鉴定,分析了其出现的原因,并探索了A3引物扩增的最佳扩增条件。
- 柴春利李玉欣孟勐左伟东
- 家蚕丝氨酸蛋白酶BmHP14的克隆及表达分析
- 昆虫作为低等的节肢动物,不具备高等动物所具有的获得性免疫系统,它们依赖先天性免疫应答机制来识别、应对入侵和损伤。昆虫免疫系统包括细胞免疫和体液免疫两个部分,细胞免疫主要是基于血细胞的一些防御反应,包括吞噬、结瘤和包囊等；...
- 李玉欣
- 关键词：丝氨酸蛋白酶基因克隆
- 文献传递
- 家蚕丝氨酸蛋白酶BmHP14基因的克隆与表达模式分析被引量：6
- 2012年
- 家蚕受到外源微生物侵染或损伤时,前酚氧化酶原级联反应中的起始丝氨酸蛋白酶会激活下游信号通路,最终产生黑色素。采用RACE技术,获得了家蚕前酚氧化酶原级联反应起始丝氨酸蛋白酶——血淋巴蛋白酶编码基因的全长cDNA序列,命名为BmHP14(GenBank登录号:JQ954757)。BmHP14 cDNA全长2 508 bp,开放阅读框为2 013 bp,编码670个氨基酸,预测蛋白质分子质量71 kD,等电点5.09,N端17个氨基酸预测为信号肽序列。多重序列比对显示BmHP14与烟草天蛾HP14的相似度很高,达到57%;分子进化树中二者也聚为一支。RT-PCR分析表明,BmHP14在家蚕5龄第3天幼虫脂肪体、马氏管、精巢、卵巢、表皮、血细胞、头部均有表达,其中以脂肪体中的表达水平最高。以黑胸败血芽孢杆菌、大肠杆菌、球孢白僵菌注射侵染家蚕5龄第3天幼虫,Real-time PCR检测显示在受到病菌侵染后,幼虫脂肪体中的BmHP14表达上调。Westernblotting检测结果显示,BmHP14在家蚕体液中以前体和成熟体的形式共同存在。研究结果提示,BmHP14是家蚕前酚氧化酶原级联反应信号通路中的关键酶。
- 李玉欣亓希武韩琦徐云敏何宁佳
- 关键词：家蚕丝氨酸蛋白酶组织表达谱
- 家蚕乙醇脱氢酶基因的表达特征及乙醇在蚕体内的代谢分析
- 2012年
- 乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)是生物体内重要的乙醇代谢酶。生物信息学分析显示家蚕基因组中存在7个ADH编码基因(BmADH1～BmADH7),半定量RT-PCR检测BmADH2、BmADH3、BmADH4和BmADH5在家蚕5龄第3天幼虫的丝腺中表达水平较高,BmADH1、BmADH6、BmADH7在脂肪体中高水平表达。利用直接注射和口器灌喂2种方式,对家蚕5龄第3天幼虫分别以体积分数28%、56%的乙醇进行刺激处理后,调查家蚕体内乙醇的代谢与脂肪体中ADH基因的表达及酶活性变化。半定量RT-PCR检测表明56%乙醇注射处理组家蚕的脂肪体中BmADH1、BmADH6、BmADH7的表达上调,而28%乙醇处理后3个基因的表达基本无变化;酶活性检测表明28%、56%乙醇处理后1 h家蚕脂肪体中的ADH活性均显著升高(P<0.05);气相色谱分析显示家蚕血液中的乙醇会快速转化为乙醛。以上结果表明,家蚕幼虫在受到高浓度乙醇刺激后,通过上调脂肪体内的ADH基因的表达,增强ADH活性,使其参与体内乙醇的代谢过程,以保护蚕体免受高浓度乙醇的伤害。
- 杜丽王长春徐云敏李玉欣何宁佳
- 关键词：家蚕乙醇脱氢酶基因表达谱酶活性乙醇代谢
- 家蚕丝氨酸蛋白酶基因BmHP21的克隆及表达分析被引量：10
- 2011年
- 丝氨酸蛋白酶参与昆虫对抗入侵病原体及保护受伤组织的黑化反应。为了探讨家蚕黑化反应过程中丝氨酸蛋白酶在酚氧化酶原前体级联体系的作用,克隆了家蚕的一个新的丝氨酸蛋白酶基因,命名为BmHP21(GenBank登录号:JF431073)。该基因由1 233个核苷酸组成,编码410个氨基酸。通过SMART网站预测蛋白结构显示BmHP21包括一个clip结构域和一个胰蛋白酶结构域。BmHP21蛋白和烟草天蛾Ms-HP21的氨基酸序列有55%的相似性,推测BmHP21在家蚕黑化反应中起着激活酚氧化酶原前体激酶(PPAE)的作用。RT-PCR检测结果表明,BmHP21在家蚕大部分组织包括脂肪体中都有表达,其mRNA转录几乎贯穿于整个家蚕的幼虫、蛹和成虫发育阶段,推测BmHP21除了参与黑化反应外,还有其它的生理功能。
- 刘碧朗李玉欣亓希武向仲怀何宁佳
- 关键词：家蚕丝氨酸蛋白酶基因克隆蛋白结构基因表达
