李牧
- 作品数：9 被引量：15H指数：2
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
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- RNA干扰抑制缺氧诱导因子1α表达对缺氧内皮细胞通透性的影响被引量：3
- 2010年
- 目的 了解RNA干扰技术特异性抑制缺氧诱导因子1α（HIF-1α）表达对缺氧血管内皮细胞通透性的影响.方法 利用质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR构建针对人HIF-1α基因的RNA干扰表达载体.将VE细胞分为正常对照组、缺氧组（置于含体积分数1%O_2的混合气体环境中缺氧处理6 h）、转染组、转染缺氧组（转染载体后再进行缺氧处理）.采用RT-PCR法检测正常对照组、转染组HIF-1αmRNA表达,采用蛋白质印迹法检测4组细胞HIF-1α蛋白表达.荧光分光光度计检测单层VE细胞的通透性.将上述缺氧处理替换为HIF-1α特异性诱导剂1 mmol/L二甲氧乙二酰甘氨酸（DMOG）,分为DMOG组、转染DMOG组、正常对照组、转染组,采用蛋白质印迹法观察各组HIF-1α蛋白表达.除通透性检测数据用荧光强度值表示外,其他数据用密度比值表示.实验结果进行组间两两t检验.结果 正常对照组细胞HIF-1α mRNA相对含量为0.765±0.069,转染组细胞HIF-1α mRNA相对含量为0.093±0.007,组间比较,差异有统计学意义（t=16.696,P〈0.05）.转染缺氧组细胞HIF-1α蛋白含量为0.591±0.029,显著低于缺氧组（2.612±0.259,t=13.415,P〈0.05）;转染DMOG组HIF-1α蛋白含量为0.566±0.008,显著低于DMOG组（3.243±0.551,t=6.975,P〈0.05）.缺氧组单层血管内皮细胞通透性（41.6±11.1）较正常对照组（9.4±1.5）显著升高（t=6.238,P〈0.05）,转染缺氧组单层血管内皮细胞通透性（13.3±4.5）显著低于缺氧组（t=5.430,P〈0.05）.结论 采用特异性针对HIF-1α基因的RNA干扰技术,能有效抑制内皮细胞HIF-1α表达,并明显抑制缺氧引起的血管内皮细胞通透性增强.
- 刘琛王裴李牧王凤君
- 关键词：缺氧诱导因子1,Α亚基RNA干扰内皮细胞缺氧通透性
- RNA干扰抑制缺氧诱导因子1α表达对缺氧内皮细胞通透性的影响
- 目的 了解RNA干扰技术特异性抑制缺氧诱导因子1α (HIF-1 α)表达对缺氧血管内皮细胞通透性的影响. 方法 利用质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR构建针对人HIF-1α基因的RNA干扰表达载体.将VE细...
- 刘琛王裴李牧王凤君
- 肌球蛋白轻链激酶介导的缺氧后肠上皮屏障功能紊乱
- 目的；探讨肌球蛋白轻链激酶(MLCK)在缺氧后肠上皮屏障功能损害中的作用.方法：利用Transwell建立单层肠上皮细胞模型,分别检测缺氧后0、2、6、8、12、24h跨单层肠上皮细胞电阻(TER)的变化,采用免疫荧光技...
- 王裴陈传莉李牧王凤君
- 肌球蛋白轻链激酶介导的肌球蛋白轻链磷酸化在严重烧伤早期肠粘膜屏障损害中的作用
- 目的:探讨肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)所介导的肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)磷酸化与严重烧伤早期肠粘膜上皮屏障功能损害、细胞骨架F-肌动蛋...
- 陈传莉王裴刘依凌李牧刘琛刘行王凤君
- 文献传递
- 肌球蛋白轻链激酶介导的缺氧后肠上皮屏障功能紊乱
- 目的:探讨肌球蛋白轻链激酶(MLCK)在缺氧后肠上皮屏障功能损害中的作用。方法:利用Transwell建立单层肠上皮细胞模型,分别检测缺氧后0、2、6、8、12、24h跨单层肠上皮细胞电阻(TER)的变化,采用免疫荧光技...
- 王裴陈传莉李牧王凤君
- 文献传递
- 肌球蛋白轻链激酶介导的肌球蛋白轻链磷酸化在严重烧伤早期肠粘膜屏障损害中的作用
- 目的：探讨肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)所介导的肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)磷酸化与严重烧伤早期肠粘膜上皮屏障功能损害、细胞骨架F-肌动蛋...
- 陈传莉王裴刘依凌李牧刘琛刘行王凤君
- 缺氧对肠上皮细胞缺氧诱导因子1α活化影响的实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的了解缺氧对肠上皮细胞缺氧诱导因子1α（HIF-1α）活化的影响。方法将肠上皮细胞分为常氧处理（正常对照）、缺氧（设缺氧1、2、6、12、24h）及缺氧＋寡霉素处理（分别用浓度为5、10、20、40μg／mL寡霉素处理1h，再缺氧6h）。采用蛋白质印迹法检测HIF-1α蛋白表达，免疫荧光法观察HIF-1α向细胞核转位的情况。结果与正常对照（0．08±0．07）相比较，缺氧1h肠上皮细胞HIF-1α蛋白表达（0．52±0．30）即显著升高（P〈0．05），6h达峰值（2．37±1．08，P〈0．05），同时HIF-1α向细胞核转位也明显增加。寡霉素呈剂量依赖性地抑制缺氧引起的肠上皮细胞HIF-1α蛋白表达增加，用5、10、20及40μg／mL寡霉素处理的缺氧肠上皮细胞HIF-1α蛋白表达量分别为1．62±0．96、1．48±0．56、1．08±0．36及0．58±0．11，均较单纯缺氧6h（2．67±1．38）显著降低（P〈0．05），HIF-1α向细胞核转位也被抑制。结论呼吸链抑制剂寡霉素可抑制缺氧肠上皮细胞HIF-1α活化，线粒体呼吸链可能在其发生机制中具有重要作用。
- 李牧王裴刘琛陈传莉王凤君
- 关键词：缺氧缺氧诱导因子1Α肠上皮细胞
- 肌球蛋白轻链激酶介导缺氧后肠上皮屏障功能紊乱的研究被引量：13
- 2009年
- 目的了解肌球蛋白轻链激酶（MLCK）在缺氧后肠上皮屏障功能损害中的作用。方法建立单层肠上皮细胞缺氧模型，根据缺氧时间不同将细胞分为正常对照组（缺氧0h），缺氧2、6、8、12、24h组，（5-氯萘-1-磺酰）-1-六氢-1，4-双苯妥英钠（ML-9）处理组（缺氧6h并用终浓度为100μmol／L的MLCK特异性抑制剂ML-9处理）。用电阻仪测定单层肠上皮细胞跨细胞电阻（TER）；免疫荧光法检测单层肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1的变化；蛋白质印迹法检测肠上皮细胞磷酸化肌球蛋白轻链（p-MLC）及MLCK蛋白表达。结果缺氧6、8、12、24h组单层肠上皮细胞TER值分别为（422±17）、（427±27）、（403±40）、（426±22）Q，均低于正常对照组[（451±27）Ω，P〈0．05]，ML-9处理组为（558±110）Ω，显著高于各单纯缺氧组（P〈0．01）。缺氧6h组单层肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1发生明显改变，主要表现为不规则，出现明显皱褶、圆滑排列程度减弱，甚至有断裂及锯齿等不连续现象。ML-9组肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1近似于正常对照组，排列较规则，皱褶及锯齿状改变较单纯缺氧组减少或消失。各单纯缺氧组肠上皮细胞MLCK、p-MLC蛋白表达水平均较正常对照组增加。结论MLCK可介导缺氧引起的肠上皮屏障功能紊乱。
- 王裴陈传莉李牧王凤君
- 关键词：缺氧肌球蛋白轻链肌球蛋白轻链激酶肠上皮细胞
- 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子凝胶治疗小面积深Ⅱ度难愈创面的临床观察
- 目的 通过与常规碘伏换药对比，观察重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)凝胶对小面积烧伤难愈创面愈合的影响.方法 选取50例初诊为深Ⅱ度、烧伤面积＜ 2％ TBSA并经常规烧伤换药治疗21 d未愈患者，并随...
- 颜洪陈建李牧朱云涛党永明黄跃生彭毅志
