李坤
- 作品数：16 被引量：57H指数：4
- 供职机构：青岛农业大学更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家科技重大专项国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 多重PCR诊断猪细小病毒、伪狂犬病毒和圆环病毒Ⅱ型方法的建立和应用被引量：2
- 2010年
- 根据GenBank中已发表的猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)等3种病毒基因序列,对各病毒基因区进行同源性分析,确定PPV VP2、PRVgB、PCV2ORF1基因的保守区为各病毒的诊断靶序列。在建立各病毒单重PCR技术的基础上,优化多重PCR反应条件,建立了三种病毒的多重PCR技术。用78份临床病料对本研究多重PCR技术和单重PCR技术进行对比验证,结果显示,总符合率为97.4%以上。该方法特异性强、敏感性高,为PPV、PRV和PCV2临床诊断和流行病学调查等研究提供了新手段。
- 刘洋李俊时建立孙文博徐绍建吴家强李坤于江王金宝周顺
- 关键词：PPVPRVPCV2
- 梨授粉后初期阶段自交不亲和相关基因的筛选及遗传转化体系的建立
- 自交不亲和是显花植物进行有性生殖花粉和柱头之间相互识别和交流过程中涉及一种遗传机制。目前对于蔷薇科自交不亲和性的研究主要集中在花柱中花粉管的响应上，而对于柱头在授粉开始时的作用的研究资料很少。本研究以具有典型配子体自交不...
- 李坤
- 关键词：自交不亲和基因表达
- 中国杂交野猪感染猪繁殖与呼吸综合征
- 本研究的目的 在于确定猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是否也在杂交野猪群中流行.我们于2008-2009年期间对中国的杂交野猪进行了PRRSV的血清学调查.从山东省未免疫PRRSV疫苗的杂交野猪群中收集613份血样,...
- 吴家强于江刘少宁周顺王兆李坤张玉玉丛晓燕迟晓伟李俊徐绍健杜以军任素芳王金宝
- 棉酚水平对肥育阉牛生产性能、胴体品质及相关理化指标的影响
- 试验选取40头体况良好、平均初始体重为(445.32±24.73)kg的利木赞×鲁西黄杂交阉牛，随机分为4组，每组10头，分别饲喂4种不同棉酚水平饲料(对照组98.28mg/kg，低棉酚组373.29mg/kg，中棉酚组...
- 李坤
- 关键词：胴体品质
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒WF-1株的分离鉴定及NSP2和ORF5基因的变异分析被引量：2
- 2010年
- 从山东某大型猪场患"猪高热病"的病料中分离到1株病毒,该病毒可在Marc-145细胞上增殖,产生细胞病变。经RT-PCR鉴定证明,该病毒为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),将其命名为WF-1株。用RT-PCR法分别扩增该分离株的NSP2基因和ORF5基因,并进行核苷酸序列测定和分析。结果表明,PRRSV WF-1株的NSP2发生30个氨基酸的不连续缺失,缺失位置与PRRSV参考变异株JXA1相同;ORF5基因与JXA1、CH-1a、VR2332核苷酸同源性分别为98.0%、94.2%、86.4%,氨基酸同源性分别为97.5%、94.0%、87.5%。基因遗传进化树分析结果显示,WF-1株与2006～2008年期间分离的JXA1、SX-1等高致病性变异株的亲缘关系很近,与1996年分离的中等毒力毒株CH-1a亲缘关系较远,与VR2332、CC-1、MLV等弱毒株或疫苗株处于不同的分支。
- 李坤吴家强张金强李俊于江刘洋张玉玉刘少宁王兆周顺王金宝
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因ORF5基因
- 尿素和氢氧化钙处理玉米秸对体外瘤胃内环境的影响
- 2012年
- 为了研究尿素和氢氧化钙处理玉米秸对体外瘤胃内环境的影响,采用2因素3水平完全交叉试验设计,将尿素和氢氧化钙均按玉米秸干物质质量的2%、3%和4%的量分别添加,共9个试验组和1个对照组(添加量为0),通过短期人工瘤胃技术研究不同水平尿素和氢氧化钙处理玉米秸对瘤胃液pH值、氨氮(NH3-N)质量浓度、微生物蛋白(MCP)产量和挥发性脂肪酸(VFA)浓度的影响。结果表明,不同水平尿素和氢氧化钙处理玉米秸对瘤胃液pH值影响不显著(P>0.05);对氨氮质量浓度影响显著或极显著(P<0.05或P<0.01),但均在正常范围内;在MCP产量方面,第6、7、8组和第10组极显著高于对照、第2、3、4组和第9组(P<0.01),分别比对照组高26.74%、27.91%、36.05%和32.56%,第7、8组和第10组3个组间无显著差异(P>0.05),第8组和第10组显著高于第5组和第6组(P<0.05),第7组和第5、6组间无显著差异(P>0.05);第10组的乙酸、丙酸和丁酸3种挥发性脂肪酸总浓度极显著高于对照组(P<0.01),比对照组高84.59%,第10组极显著或显著高于其他试验组(P<0.01或P<0.05)。结果显示,第10组即尿素和氢氧化钙处理玉米秸时,添加水平均为其干物质量的4%是最适宜的。
- 李坤吕永艳于腾飞孙国强
- 关键词：玉米秸尿素瘤胃发酵
- 不同猪瘟免疫程序对仔猪母源抗体水平的影响被引量：18
- 2010年
- 本研究采用猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒，对应用不同猪瘟免疫程序的猪场进行仔猪母源抗体水平检测。结果显示，在20日龄以内仔猪母源抗体的OD630平均值和阳性率均维持较高的水平，仔猪能够获得较好的母源抗体保护，避免猪瘟病毒的早期感染。随着日龄增长，仔猪母源抗体逐渐下降，尤其在断奶后一周（30-40日龄）下降趋势最为显著。本研究可为本地区规模化猪场猪瘟免疫程序的制定尤其是仔猪首免日龄的确定提供参考依据。
- 吴家强张学武李俊徐绍建李坤于江刘洋周顺王金宝
- 关键词：猪瘟母源抗体ELISA免疫程序
- 多重RT-PCR检测PRRSV和CSFV及PRRSV ORF5基因遗传变异分析被引量：4
- 2011年
- 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和猪瘟病毒（CSFV）的基因组序列设计了2对特异性引物,建立了同时检测PRRSV和CSFV的多重RT-PCR方法。2008年1月至2009年12月期间,采集山东各地71个不同规模猪场及农村散养户212份病料,采用建立的多重RT-PCR技术同时检测PRRSV和CSFV的感染状况。检测结果显示,病料中高致病性PRRSV占57.1%（121/212）,CSFV占29.2%（62/212）。应用RT-PCR方法扩增山东不同地区16株PRRSV的ORF5基因,并进行了序列分析。结果表明,16株PRRSV的ORF5基因核苷酸同源性为97.0%~100.0%;与参考变异毒株JXA1、传统毒株VR2332核苷酸同源性分别为98.0%~99.5%和86.4%~87.7%。推导的氨基酸序列分析表明,16株毒株GP5蛋白氨基酸不存在缺失,但存在位点突变。12株在非中和表位29位点与准种进化34位点发生了突变,分别由V→A和N→S;1株在非中和表位185位点发生突变,由A→V;这与2007年流行的PRRSV毒株JXA1、HUN等不同。
- 张金强吴家强孟斌郭文龙王希辉李坤于江刘少宁张玉玉王金宝
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒LAMP检测方法的建立被引量：3
- 2011年
- 研究针对美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守的N蛋白基因设计了4条LAMP的检测引物,通过优化反应条件,建立了一种检测PRRSV的LAMP诊断方法。特异性和敏感性试验结果显示,该方法能够特异地检测美洲型PRRSV,其最低检测限为1×101个拷贝,而常规PCR的最低检出限为1×105个拷贝。判定检测结果时不需要借助昂贵仪器设备,仅需加入1μL橙红色核酸染料就可以进行判断,颜色变绿判定为阳性,仍保持为橙红色判定为阴性。LAMP可以快速、直观、准确地检测PRRSV,是一种适合猪场现地应用的检测方法。
- 尹斐斐吴家强刘少宁李坤杜以军孙文博丛晓燕王可张玉玉时建立李俊周顺王金宝
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒LAMP
- 一种利用负压渗透在花粉管加载荧光染料的方法
- 本发明公开了一种利用负压渗透在花粉管加载荧光染料的方法，属于花粉管加载荧光染料技术领域。所述利用负压渗透在花粉管加载荧光染料的方法，包括如下步骤：步骤1：原料预处理；步骤2：制备Fluo 4‑AM母液；步骤3：制备花粉悬...
- 屈海泳李坤马春晖高超王永章
- 文献传递
