李喜梅
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 供职机构：中国医科大学附属盛京医院更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
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- 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子编码基因对乙型脑炎DNA疫苗细胞免疫增强效应的影响
- 2009年
- 目的研究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）编码基因对乙型脑炎（JE）DNA疫苗细胞免疫应答的影响。方法套式RT—PCR法获取BALB／c小鼠GM—CSF编码基因，构建含乙型脑炎病毒（JEV）前膜（prM）-包膜（E）蛋白与GM-CSF编码基因以及单纯GM—CSF编码基因的重组质粒，分别命名为pJME／GM—CSF和pGM—CSF。脂质体法转染上述质粒人中华仓鼠卵巢细胞（CHO），免疫荧光法检测编码蛋白的表达与分布。流式细胞仪检测经不同组合的免疫原免疫后小鼠脾T淋巴细胞亚群及Th细胞内细胞因子（IFN-γ、IL-4）变化，LDH法测定CTL活性。数据行单因素方差分析及最小显著差数法比较。结果重组质粒pJME／GM—CSF与pGM—CSF经鉴定构建正确，所编码的蛋白主要分布于胞质，少量分布于胞膜。pJME／GM—CSF组CD4^＋T淋巴细胞比例为（33．90±0．79）％，明显高于其他组（t值分别为9．818、6．804、6．594、10．061、9．380和17．675，均P％0．05）。pJME＋pGM—CSF同时注射组及pGM—CSF注射3d后接种pJME组CD4^＋T淋巴细胞比例分别为（29．83±0．61）％、（29．70±0．51）％，高于pJME注射3d后接种pGM—CSF组的（27．69±0．50）％（t=3．466、t=3．255，P〈0．05）。pJME／GM—CSF组与pJME＋pGM—CSF同时注射组CD8^＋T淋巴细胞比例较空载体（pcDNA3．1＋）组及JE灭活疫苗组升高（t值分别为3．811、2．627、10．537和3．811，均P〈0．05）。pJME／GM—CSF组CTL活性为（51．48±0．10）％，明显高于其他组（t值分别为22．868、13．823、5．377、32．287、34．632和53．795，均P〈0．05）。pJME／GM—CSF组、pJME＋pGM—CSF同时注射组及pGM—CSF注射3d后接种pJME组IFN-γ／IL-4比值分别为19．13±1．36、12．32±0．82、7．05±0．43，明显高于其他组（P〈0．05）。结论GM—CSF编码基因可增强JEDNA疫苗的细胞免疫应答效应。
- 翟永贞李喜梅周言张丹邓宝成冯国和
- 关键词：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子
- 不同途径接种乙脑病毒prME蛋白编码基因DNA疫苗所致BALB/c鼠的细胞免疫被引量：4
- 2007年
- 目的:研究经不同途径接种乙脑病毒prME蛋白编码基因DNA疫苗所诱导的细胞免疫。方法:将乙脑病毒prME蛋白编码基因DNA疫苗(命名为pJME)分别以肌注、滴鼻两种免疫方式免疫BALB/c鼠,流式细胞仪检测脾脏CD4+/CD8+T淋巴细胞亚群,乳酸脱氢酶释放实验测定脾脏特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性。结果:pJME肌注组与滴鼻组免疫鼠CD4+T淋巴细胞百分比(30.91+0.72)%、(27.89+0.42)%,均高于灭活疫苗与载体肌注组(23.73+0.17)%、(23.78+0.21)%(P<0.05),肌注组显著高于滴鼻组(P<0.05);而CD8+T淋巴细胞百分比(14.62+0.25)%、(13.73+0.50)%,也均高于灭活疫苗和载体肌注组(10.80+0.39)%、(11.97+0.06)%(P<0.05),肌注组与滴鼻组无显著差异(P>0.05);两组有明显CTL效应(pJME肌注组29.1%,pJME滴鼻组17.1%),明显高于载体肌注组6.0%,pJME肌注组明显优于滴鼻组。结论:pJME以两种途径免疫鼠时可诱导明显细胞免疫反应。
- 周言张琳翟永贞李喜梅王占英冯国和
- 关键词：T淋巴细胞亚群
- 乙脑病毒prME蛋白与BALB／c鼠IgG Fc段编码基因联合构建DNA免疫研究被引量：2
- 2008年
- 目的研究IgG Fc编码基因对流行性乙型脑炎（Japanese encephalitis，JE）DNA疫苗免疫增强效应的影响。方法巢式RT-PCR法从BALB／c鼠脾组织获取IgG Fc段编码基因，用限制性内切酶从含流行性乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）prME蛋白基因重组子获取prME蛋白基因，分别插入同一真核表达载体pcDNA3．1（＋）不同酶切位点，构建重组子pJME／IgG Fc并经酶切及DNA测序分析。脂质体法将pJME／IgG Fc转染CHO细胞。免疫荧光、Western blot法检测转染的CHO细胞中融合蛋白分布与表达。将pJME／IgG Fc肌注免疫BALB／c鼠，检测小鼠脾特异性细胞毒T细胞（CTL）杀伤活性和中和抗体滴度。结果pJME／IgGFc经BamHI／EcoRI和BamHI／NotI酶切释出的插入子大小（2001 bp、2730 bp）分别与预期结果相符合。所编码的融合蛋白相对分子质量（Mr）为101×10^3，主要分布于胞浆，少量分布于胞膜，pJME／IgG Fc转染CHO细胞经32次传代仍可表达融合蛋白。pJME／IgG Fc免疫组中和抗体滴度与CTL活性较pJME及灭活疫苗组均升高（P〈0．05）。结论pJME／IgG Fc成功构建，转染的CHO细胞可稳定表达融合蛋白，IgG Fc段编码基因能够增强JEV DNA疫苗的细胞和体液免疫应答。
- 李喜梅周言翟永贞马力冯国和
- 关键词：乙型脑炎病毒FC段CHO细胞
- 流行性乙型脑炎病毒北京-1株E蛋白基因疫苗的免疫学分析
- 对流行性乙型脑炎病毒北京-1株E蛋白基因疫苗进行了免疫学分析。结果表明，含乙脑病毒E蛋白基因DNA疫苗不仅提供有效的体液与细胞免疫,针对同种或异种病毒株的攻击,还可产生交叉保护作用。
- 冯国和刘宁周言翟永贞李喜梅窦晓光
- 关键词：脑炎病毒基因疫苗蛋白表达
- 乙型脑炎DNA疫苗免疫BALB/c鼠诱导局部肌肉组织树突状细胞浸润的研究
- 2008年
- 目的研究流行性乙型脑炎DNA疫苗接种局部树突状细胞的形态与功能。方法将含流行性乙型脑炎病毒prM、E蛋白编码基因的DNA疫苗(pJME)肌注免疫BALB/c鼠,HE染色观察接种局部肌肉组织内浸润细胞形态学分布,免疫组化检测CD11b^+、CD11c^+树突状细胞浸润特点,流式细胞仪检测浸润的树突状细胞中CD80^+、CD86^+双阳性细胞的百分比。结果pJME肌注组浸润细胞簇分级(3.0^+)、浸润细胞中CD11b^+、CD11c^+树突状细胞百分比分级(2.0^+、2.0^+)均显著高于空载体肌注组和灭活疫苗肌注组(P<0.05)。CD80^+、CD86^+双阳性细胞的百分比pJME肌注组为(0.16±0.20)%,空载体组为(0.12±0.30)%,灭活疫苗肌注组为(0.15±0.25)%,树突状细胞CD80、CD86抗原表达无显著差异(P>0.05)。结论pJME可诱导接种局部多种免疫活性细胞参与,其中有髓样树突状细胞,呈非成熟状态。
- 周言翟永贞李喜梅王志峰常彩芳冯国和
- 关键词：脑炎树突状细胞
