李善刚
- 作品数：26 被引量：60H指数：5
- 供职机构：上海交通大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 兔转基因成纤维细胞克隆的建立及条件优化
- 2012年
- 探索和优化兔成纤维细胞由单细胞成长为克隆群体的技术条件,建立转基因单克隆细胞系筛选系统,为进一步生产基因打靶克隆兔创造条件。将3～5代的成纤维细胞分散成单个细胞,对比不同培养基对单细胞克隆形成的影响。利用脂质体转染兔成纤维细胞后,按照不同的稀释比例传代并筛选转基因单细胞克隆,研究不同稀释比例对转基因单细胞克隆形成的影响。经过比较试验发现同化的DMEM/F12培养基能很好地支持单细胞克隆早期生长,转基因后1∶80倍的稀释比例能够获得较多的转基因单细胞克隆。本试验结果有助于提高转基因和基因打靶克隆动物的制作效率。
- 宋伟杰张振韬尹明茹李垚邢凤英李善刚陈学进李和平
- 关键词：转基因
- 不同激活条件和培养基对兔卵母细胞孤雌激活和胚胎发育的影响被引量：3
- 2008年
- 对新西兰兔成熟卵母细胞在不同方式激活后的发育潜能和孤雌胚胎在不同培养体系中的发育进行了研究。结果发现电击激活和化学激活单独使用不能很好的激活兔卵母细胞,两次电击和化学激活配合使用能够较好的激活兔卵母细胞。通过比较发现B2培养基支持兔孤雌胚胎发育的能力显著高于其他培养基。试验建立了和体内受精时间过程相似的卵母细胞活化和培养系统,为兔的核移植技术优化了条件。
- 李善刚陈学进李宏滨魏彩虹杜立新
- 关键词：卵母细胞孤雌激活胚胎发育胚胎培养
- 不同品种绵羊TGF-β1基因单核苷酸多态性及其与繁殖力关系的研究被引量：4
- 2008年
- 以小尾寒羊、滩羊、同羊、欧拉羊共计196头为研究材料,采用PCR-SSCP技术,对绵羊TGF-β1基因6-7外显子区间内的805 bp序列进行多态性分析,发现了一个多态位点。经克隆测序分析发现,第6内含子区内存在一个突变,该突变位点为第7外显子上游的第294位碱基处缺失了AGAC(序列:gi76871756中的14201位)。对不同绵羊群的基因型和等位基因频率统计结果表明,多胎品种小尾寒羊以AB基因型为主。χ2检验结果表明,单胎品种滩羊、同羊、欧拉羊以BB基因型为主,所有品种都处于Hardy-Weinberg平衡状态。
- 高丽霞李宏滨杜立新宋雪梅李珍祖李善刚魏彩虹
- 关键词：转化生长因子Β1单核苷酸多态性绵羊
- 应用超声波技术快速预测羊背膘厚和眼肌面积的研究被引量：6
- 2011年
- 在肉羊育种中,背膘厚和眼肌面积是重要的选择性状,为了能够对其进行活体预测,试验通过对3个羊品种(36头)屠宰前后的背膘厚和眼肌面积的估测和实测数据运用最小二乘法建立了用超声波活体测量技术预测宰后背膘厚、眼肌面积和屠宰重的预测模型,结果显示预测模型均达到显著水平(P<0.05)。因此,可以在育种实践中应用。
- 魏彩虹李宏滨刘涛李善刚杜立新
- 关键词：超声波技术背膘厚眼肌面积胴体性状
- 囊胚注射转基因ES细胞制作嵌合体的研究被引量：3
- 2007年
- 在小鼠胚胎成纤维细胞制作的饲养层上培养并成功的维持了携带LacZ基因的胚胎干细胞系（S8），在此基础上，以S8为供体细胞，以远交系昆明白小鼠3．5d胚胎为受体，通过显微注射法将供体细胞转移到受体的囊胚腔内，经过恢复培养，移植到代孕鼠昆明白雌鼠的子宫中；后代在嵌合体出生一周后进行判定。本试验用8～13代的S8细胞共注射胚胎597枚，经1～3h恢复培养，有585枚胚胎重新具有膨大的囊胚腔，细胞轮廓分明，滋养层细胞间连接也清晰可见，胚胎成活率为97％；胚胎移植后，代孕母鼠共移植胚胎228枚，经17～19d的妊娠期后，产仔37只（2只死胎），产仔率为16％；有35只仔鼠（雄鼠18只，雌鼠17只）存活到可以判断毛色，共获得8只S8细胞毛色嵌合体小鼠，嵌合体的产生率为21．6％。结果表明用S8细胞经囊胚注射后能够获得嵌合体，并且嵌合体明显发生了性偏离现象。本试验为国内利用囊胚注射携带LacZ基因的胚胎干细胞获得嵌合体小鼠的首例报道。
- 付志新刘宗平梁建兰李善刚陈学进
- 关键词：胚胎干细胞LACZ基因胚胎移植嵌合体小鼠
- 急性不完全性脑缺血后大鼠心房特殊颗粒的形态学变化
- 2000年
- 目的 探讨急性不完全性脑缺血大鼠心房特殊颗粒 (atrialspecificgranulars ,ASG)的形态学变化 ,提供脑缺血缺氧病理生理机制的形态学依据。方法 中老年Wistar大鼠 ,采用双侧颈总动脉夹闭 2小时后去夹再通的方法 ,制作急性不完全脑缺血模型。于血流再灌后 6h、2 4h、3d、7d处死。取大鼠右心耳制作超薄切片 ,电镜观察摄片。结果 再灌 6h、2 4h组比对照组大鼠右心耳ASG明显减少。
- 崔海庆李善刚李亚鲁王洪海石运芝
- 关键词：脑缺血心房特殊颗粒形态学
- 兔Oct4启动子驱动RFP基因表达载体的构建及验证
- 2014年
- 转录因子OCT4在维持和调控胚胎干细胞的多能性中发挥着重要的作用。Oct4基因启动子驱动标志蛋白的表达对研究胚胎干细胞多能性和建立iPS细胞有重要意义。由于GFP在慢病毒转染过程中常用作转染标记,计划构建兔Oct4基因启动子(rOct4)驱动红色荧光蛋白表达的载体,这将有利于兔ES细胞和iPS细胞制备的研究。通过PCR方法扩增rOct4,构建了rOct4驱动RFP基因的表达载体rOct4-RFP。经转染小鼠ES细胞验证正确后,将rOct4-RFP质粒转染兔成纤维细胞系获得rOct4-RFP成纤维细胞系。经过酶切和测序验证,证明rOct4-RFP构建成功,而且能够在小鼠ES细胞系E14中表达细胞红色荧光蛋白,并受细胞分化状态的调控。通过脂质体介导的基因转移、抗性筛选和PCR鉴定建立了rOct4-RFP转基因成纤维细胞系。
- 唐澜姜伟华尹明茹周小梅李和平陈学进李善刚
- 关键词：RFP干细胞转基因
- 转移早期囊胚期细胞制备嵌合体鸡被引量：7
- 2001年
- 用显微注射方法将尼拉商品鸡鸡胚 X期细胞液注入同期海兰鸡的囊胚腔中，再经体外培养至出雏，获得尼拉—海兰嵌合体鸡，嵌合体率为 5％ (3/60)，出雏率为 15％ (9/60)。另一项实验是将受体鸡胚经过 600 rad60Co辐射处理后再注入供体细胞并体外培养至出雏，结果嵌合体率为 14.0％ (8/57)，孵化率为 15.8％ (9/57)，其中两只毛色嵌合体公鸡存活至今已经 8个月。嵌合体鸡的黑色羽毛可出现在多个部位，有两只鸡的腿部和喙的角质也出现黑色斑。嵌合体鸡血液 DNA具有供体鸡的特征带。本研究为进一步制备转基因鸡奠定了基础，也为鸡的发育生物学研究和遗传学研究提供了实验材料。
- 杜立新李善刚蒋满喜王慧尹春光
- 关键词：嵌合体体外培养显微注射法转基因动物
- 循环纤维细胞在兔耳增生性瘢痕形成中迁移的初步研究
- 2018年
- 目的通过静脉注射循环纤维细胞,证明该细胞参与兔耳增生性瘢痕的发生、发展过程,探讨其在增生性瘢痕形成中所起的作用及影响。方法取直系同窝GFP阳性的兔血并分离出单核细胞,经流式细胞仪分选出循环纤维细胞,并通过耳缘静脉注入另一只直系同窝GFP阴性兔中,然后在直系同窝转基因GFP阴性兔耳上制作增生性瘢痕模型。实验组分别在3、7、10、14、21、28 d时间点取兔耳创面组织和增生性瘢痕标本组织;对照组取每个时间点阴性兔耳伤口旁的正常兔耳皮肤组织。将瘢痕标本制作冰冻切片,在激光共聚焦荧光显微镜下观察组织内GFP绿色荧光,以及免疫组织化学荧光双重染色(CD34、CD45)。结果实验组中,GFP荧光阴性兔耳3、7、10、14、21、28 d获取的创面组织和增生性瘢痕中,可检测到来自GFP荧光阳性兔耳的循环纤维细胞;对照组中兔耳的正常皮肤检测显示,该细胞呈阴性。结论来自外周血的循环纤维细胞迁移至伤口,即逐渐从伤口肉芽组织迁移至伤口表面并参与形成增生性瘢痕这一过程,可作为研究增生性瘢痕形成机制的重要研究方向。
- 孙肇晟张栋刘菲菲李善刚李军辉
- 关键词：增生性瘢痕外周血单核细胞
- 不同供体细胞代数对兔体细胞核移植效率的影响被引量：1
- 2012年
- 将兔成纤维细胞分为5～10低代数组和20～25高代数组进行核移植研究。结果显示,2试验组供体细胞核移植的效率存在差异。通过对供体细胞进行核移植后的重构胚胎的融合率、卵裂率、囊胚率以及体内发育的比较,发现低代数相对来说更有效率,但是高代数组也能获得正常的克隆后代。结果表明,兔不同代数体外培养细胞对克隆效率存在影响,并为制备转基因打靶兔提供基础。
- 宋伟杰谷瑞环尹明茹李敦高邢凤英李善刚陈学进李和平
- 关键词：成纤维细胞体细胞核移植
