李兆利
- 作品数：12 被引量：68H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划黑龙江省科技攻关计划黑龙江省重大科技攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 牛传染性鼻气管炎病毒gB基因的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立
- 经DNAstar分析,据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)全基因序列设计合成gB基因的特异性引物,以构建的pGEM-T-gB为模板,PCR扩增IBRV gB蛋白192位到266位氨基酸的基因序列.将目的片断克隆,酶切鉴定并...
- 李兆利薛飞朱远茂王延辉
- 关键词：ELISA诊断
- 文献传递
- 牛传染性鼻气管炎病毒gB基因的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立被引量：17
- 2006年
- 经DNAstar分析,据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)全基因序列设计合成gB基因的特异性引物,以构建的pGM-T-gB为模板,PCR扩增IBRV gB蛋白192-266位氨基酸的基因序列。将目的片段克隆,酶切鉴定并测序鉴定后,定向插入pET32a表达载体中,转化表达菌BL21。SDS-PAGE电泳分析表明,诱导表达产物以包涵体和可溶形式存在,大小约为29.2 ku,与预测值相符。亲和纯化后重组蛋白浓度为2.000 mg/mL,纯度为79.2%。间接ELISA检测证明,表达蛋白具有抗原性。以该蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法。确定的抗原包被浓度为50μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶40,阳性标准定为S/P>0.395。交叉试验表明对牛流热(BEV)、牛肺疫(CBPP)、牛病毒性腹泻(BVD)、牛结核(BTB)、牛副结核(PBB)以及牛赤羽病(BAD)等其它6种疾病阳性血清不发生交叉反应。与中和试验相比较,特异性、敏感性和符合率分别为83.3%、90.9%和88.9%;与进口法国IBRV全病毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性、敏感性和符合率分别为92%、92.7%和92.5%。上述结果表明该诊断方法具有良好的特异性和敏感性,显示了良好的应用前景。
- 李兆利薛飞朱远茂王延辉
- 关键词：IBRVGB基因纯化间接ELISA
- 牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白研究进展被引量：9
- 2006年
- 牛传染性鼻气管炎病毒能引起牛多系统感染,是导致养牛业重大经济损失的一种重要病原。该病毒是有囊膜的双股DNA病毒,病毒囊膜蛋白在病毒致病中发挥了重要作用,其中gB蛋白对病毒的吸附、侵入、复制和细胞间扩散是必需的,可刺激机体产生大量的中和抗体。对gB蛋白的研究不仅是理解病毒分子生物学功能特征的需要,而且在临床诊断和疾病预防中也具有重要意义。文章就gB蛋白的结构特征、生物学功能以及在免疫学和诊断方面的研究做了综述,并对上述方面进行了展望。
- 李兆利薛飞朱远茂
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒免疫学
- 一株溶原性禽大肠杆菌的特征鉴定
- 2015年
- 禽致病性大肠杆菌是引起养禽业经济损失的主要病原菌之一。本研究对从病死的禽血液分离到的一株疑似大肠杆菌进行了表型和基因型的研究。该菌在麦康凯固体培养基上形成粉红色菌落,16S rRNA PCR鉴定结果显示该分离株与禽病原性大肠杆菌部分菌株的16S rRNA序列的同源性达到了99%。该菌株在半固培养基上不具有运动性。用MLST分型特异引物对菌株的基因型进行鉴定,发现该菌株属于ST10型。在电镜下,菌体表面可见鞭毛和菌毛,并可见噬菌体结构,这提示噬菌体入侵导致的细胞内容物释放可能是在该菌形成黏性菌落的原因。本研究为进一步确定噬菌体在细菌致病中和进化中的作用提供了必要的基础。
- 李鹤李兆利倪宏波
- 关键词：禽病原性大肠杆菌电镜观察
- 牛传染性鼻气管炎间接ELISA诊断方法的建立被引量：24
- 2005年
- 以牛肾细胞系(MDBK)培养牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)Bartha Nu/67株,经超速离心纯化病毒,再经超声破碎处理后作为诊断抗原,建立了检测牛血清IBRV抗体的间接酶联免疫吸附试验。该ELISA的判定标准为:血清D490 nm值大于0.369的判为阳性,小于0.295的判为阴性,在0.295与0.369之间的为可疑。特异性和重复性试验结果表明,该方法特异性高、重复性好。与法国进口ELISA抗体诊断试剂盒比较,其符合率为96.3%;与中和试验比较,符合率为95.8%,且敏感性更高。应用该诊断方法调查了我国部分地区IBRV的感染情况,结果显示,这些地区的IBRV感染率为67.1%。
- 朱远茂王海燕薛飞辛九庆赵立平童光志郭巍李兆利相文华
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒酶联免疫吸附试验
- 一种含有凤尾草和磷霉素的畜禽用复方药物
- 本发明涉及一种含有凤尾蕨科凤尾草和磷霉素的畜禽用复方药物，由以下重量份的原料组成：磷霉素3‑30份，凤尾草5‑200份。本发明在磷霉素中加入凤尾草后，能够逆转细菌对磷霉素的耐药性，从而提高磷霉素的治疗效果。按常规方法将该...
- 刘思国王秀梅张万江李兆利
- 文献传递
- 禽致病性大肠杆菌生物被膜的形成及其影响因素被引量：17
- 2010年
- 为确定影响细菌生物被膜(BF)的形成条件,本研究采用BF体外定性观察和定量粘附性检测两种方法对1株野生禽致病性大肠杆菌(E.coli)在不同环境(培养时间、培养基类型、引导载体类型、营养条件)下产生BF的差异进行了研究。结果显示野生禽致病性E.coli其宿主体外BF最适形成条件是培养时间为48h,培养基为5%TSB、引导载体为平底96孔聚苯乙烯微孔板(美国Corning Costar)。其生长周期为8h时开始起始粘附、24h形成若干微菌落、36h微菌落粘连、48h形成完整的BF、72h细菌脱落开始下一轮的BF生长。糖分和适量的无机盐都可以在一定程度上促进BF的形成和被膜内细菌的粘附性提高。该研究表明禽致病性E.coliBF的形成周期,并为抑制其形成提供了实验依据。
- 欧阳凤菊李兆利赫明雷刘慧芳司微刘思国王春来倪洪波王宇曲娟娟
- 关键词：禽致病性大肠杆菌生物被膜
- 检测马传贫病毒跨膜蛋白主要免疫决定区抗体间接ELISA诊断方法的建立被引量：6
- 2006年
- 本试验以纯化的重组马传贫病毒跨膜蛋白主要免疫决定区蛋白作为诊断抗原建立了间接ELISA诊断方法,确定其最佳工作条件为每孔包被重组抗原2μg,兔抗马IgG酶标抗体以1∶4000,血清以1∶40倍稀释,底物作用时间为10min;判定标准为P/N值大于2,且OD值大于0.2的血清为阳性,否则判为阴性。本试验所建立的诊断方法与琼扩试验以及以琼扩抗原作为包被抗原的ELISA试验进行了比较,表明该诊断方法敏感性更高。特异性和重复性试验表明该诊断方法具有良好的特异性和重复性。通过对4匹马传贫驴白细胞弱毒疫苗免疫马血清抗体的检测,发现均在接种2周后可产生抗马传贫病毒跨膜蛋白主要免疫决定区相应抗体。此抗体一直持续存在到本试验检测的免疫后17个月,且效价较高。用此方法检测203份马血清样品,其中161份呈抗体阳性,还检测了马传贫自然感染马血清93份,结果全部为阳性。
- 朱远茂王海燕郭巍李兆利赵立平薛飞相文华沈荣显
- 关键词：ELISA
- 一株溶原性鸡大肠杆菌的分子特征鉴定被引量：3
- 2016年
- 为了鉴定和了解实验室保存的1株溶原性鸡大肠杆菌的病原学特性,试验对其遗传进化和基因型等进行了分子特征鉴定。结果表明:鸡大肠杆菌Leco13的16S rRNA与大肠杆菌K12标准株16S rRNA部分序列的同源性达到了99%;用MLST分型特异引物对菌株的基因型进行鉴定,发现该菌株属于ST10型。同时参考其他文献中的噬菌体提取方法,对分离株进行了噬菌体的提取,成功提取噬菌体DNA后,用EcoRⅠ和HindⅢ进行酶切鉴定并获得了较为清晰的酶切图谱。
- 李鹤李兆利刘思国倪宏波
- 关键词：禽病原性大肠杆菌RRNA酶切鉴定
- 一种含有凤尾草和粘杆菌素的畜禽用复方药物
- 本发明涉及一种含有凤尾蕨科凤尾草和粘杆菌素的畜禽用复方药物，由以下重量份的原料组成：粘杆菌素3-30份，凤尾草5-200份。本发明在粘杆菌素中加入凤尾草后，能够逆转细菌对粘杆菌素的耐药性，从而提高粘杆菌素的治疗效果。按常...
- 张万江王秀梅刘思国李兆利
- 文献传递
