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猪GPR84和MPEG1基因的分子克隆和表达分析被引量：2: 2014年; 本研究旨在克隆猪GPR84和MPEG1基因的完整编码区,对其进行序列分析,并研究它们的组织表达和诱导表达情况。以民猪为试验材料,应用RT-PCR方法克隆猪GPR84和MPEG1基因并进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR方法构建组织表达谱,分析其在PK15细胞内的poly(I:C)诱导表达情况。结果表明,猪GPR84(GenBank accession No.JX280456)和MPEG1(GenBank accession No.JQ907392)基因编码区全长分别为1 191和2 154bp,预期分别编码396和717个氨基酸残基的蛋白质,与人和牛相应蛋白序列的同源性均在83%以上。猪GPR84和MPEG1基因在11种组织中均有不同程度的表达,其中GPR84基因在肺中表达量最高,MPEG1基因在脾中表达量最高,二者在肌肉中的表达量均最低。在poly(I:C)的诱导下,GPR84基因的表达增强,MPEG1基因的表达则受到抑制。本研究成功地克隆了猪GPR84和MPEG1基因的全长编码区序列,并确定了它们的组织表达和诱导表达情况,为进一步揭示GPR84和MPEG1在抗病育种中的作用提供了基础。; 王秋实王秋实武春艳邵思宇李朋朱蒙杨秀芹; 关键词：MPEG1 克隆

猪供核细胞不同处理对细胞凋亡及重构胚体外发育的影响: 2014年; 在核移植过程中,为了选择出一种最优的供核细胞处理方法,采用接触抑制、血清饥饿以及75 nmol/L曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)3种方法分别对猪体细胞进行处理。通过AnnexinV-FITC法检测3种处理对细胞凋亡的影响,并将3种方法分别处理过的体细胞作为供核细胞,利用体细胞核移植技术(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)研究供核细胞不同处理方法对猪重构胚体外发育能力的影响。结果表明:接触抑制和75 nmol/L TSA处理组对细胞的早期凋亡、晚期凋亡以及细胞坏死率同对照组比较差异不显著,而血清饥饿处理组无论是早期凋亡、晚期凋亡还是细胞坏死率均显著高于对照组。3种方法处理供核细胞,接触抑制处理组卵裂率同血清饥饿处理组比较,差异不显著,但是其显著高于75 nmol/L TSA处理组。3种方法处理的重构胚囊胚率差异不显著。接触抑制方法处理供核细胞相对于其他2个处理组更有利于重构胚的体外发育。; 任亮刘娣马红付博汪亮朱蒙; 关键词：凋亡血清饥饿重构胚

猪Oct4-EGFP多能性报告载体的构建与验证: 2015年; 本研究旨在构建一套猪Oct4-EGFP多能性报告载体,可在不破坏细胞的前提下研究Oct4的表达规律,从而有利于早期胚胎发育研究及干细胞的研究。试验采用无缝克隆(In-Fusion PCR cloning)技术,将Oct4启动子序列直接重组到pEGFP-N1载体上,用Oct4代替质粒pEGFP-N1中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)原有的CMV启动子构建出Oct4-EGFP报告载体,并用脂质体转染技术转染入大白猪胎儿成纤维细胞中,分析Oct4-EGFP报告载体,表达情况。结果发现,经PCR及测序验证,成功构建了Oct4-EGFP多能性报告载体,并在孤雌囊胚上初步验证了载体的有效性;经过脂质体转染,经筛选及PCR鉴定,获得了8株整合有Oct4-EGFP多能性报告载体的转基因细胞。研究结果表明,运用无缝克隆技术可高效率构建Oct4-EGFP多能性报告载体,且获得的转基因阳性细胞可为猪胚胎早期发育和胚胎干细胞研究奠定技术基础。; 朱蒙付博刘娣杨秀芹; 关键词：胚胎转基因绿色荧光蛋白

猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻的研究被引量：2: 2014年; 本研究旨在为猪MⅡ期卵母细胞的玻璃化冷冻选择合适的冷冻保护剂及冷冻载体,提高猪卵母细胞冷冻后的存活力。试验分别采用以40%EG、15%EG+15%DMSO+20%FBS、15%EG+15%DMSO+20%SPS作为渗透性冷冻保护剂的冷冻液,以玻璃微细管(GMP)和冷冻帽(cryotop)作为载体对猪卵母细胞进行玻璃化冷冻。结果发现,采用含有血清蛋白替代物(serum protein substitute,SPS)的冷冻液VS3冷冻后二乙酰荧光素(FDA)染色存活率(59.40%±4.93%)显著高于VS1组(42.12%±4.08%)及VS2组(37.57%±1.21%)(P<0.05);采用VS3作为冷冻液用cryotop作为载体冷冻后FDA染色存活率(83.33%±3.33%)显著高于GMP(59.40%±4.93%)(P<0.05)。由此可见,采用SPS代替胎牛血清(FBS),用cryotop作为载体可以使猪卵母细胞冻后存活率显著提高。; 齐贵龙任亮朱蒙付博马红刘娣; 关键词：卵母细胞 SPS CRYOTOP 玻璃化冷冻

猪胚胎Oct4-EGFP多能性报告系统的构建: 与胚胎的发育和分化密切相关的Oct4属于POU转录因子家族，Oct4既是动物早期胚胎细胞表达的转录因子，也是标记细胞多能性的最重要的因子之一，Oct4在胚胎干细胞及原始生殖细胞等多能性细胞中特异表达，而在已分化的体细胞中...; 朱蒙; 关键词：胚胎发育; 文献传递

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朱蒙