朱晓华
- 作品数：24 被引量：96H指数：8
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划湖北省科技攻关计划湖北省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 日本血吸虫脂肪酸结合蛋白DNA联合白细胞介素-12的免疫保护作用被引量：5
- 2005年
- 目的 探讨白细胞介素-12 (IL-12)对日本血吸虫脂肪酸结合蛋白 (Sj14FABP)DNA疫苗的辅佐作用。方法 大量制备pVIVO2、pVIVO2 IL-12、pVIVO2 Sj14FABP质粒DNA。48只雄性Balb/c小鼠随机分为A、B、C、D组,每组各 12只,每只小鼠于免疫前 1d在右后腿股四头肌肌内注射 0 75%盐酸布比卡因 30μL。A组给予 0 9%氯化钠注射液 100μL,im;B组给予pVIVO2质粒DNA 100μg,im; C组给予pVIVO2 Sj14FABP质粒DNA 100μg,im;D组给予pVIVO2 Sj14FABP质粒DNA50μg和pVIVO2 IL 12质粒DNA50μg,im。免疫 30d后,每只小鼠以 ( 40±2 )条尾蚴感染,感染 45d后,计数成虫及肝内虫卵;用ELISA法检测小鼠血清中IgG抗体水平。结果 C、D组的减虫率分别为24 11%和 38 83%,减卵率为 27 20%和 40 27%,差异有显著性(P<0. 05);免疫 30d后小鼠血清IgG水平无明显升高,各组间差异无显著性 (P>0 05)。结论 pVIVO2 Sj14FABP能够诱导小鼠产生部分抗血吸虫感染的保护力,IL-12是一种有效的血吸虫病DNA疫苗佐剂。
- 朱晓华石佑恩
- 关键词：白细胞介素-12DNA疫苗佐剂
- 日本血吸虫双价DNA疫苗体内外表达及持续时间的初步研究被引量：1
- 2006年
- 目的观察日本血吸虫双价DNA疫苗在体内外表达及体内表达的持续时间。方法将构建的共表达日本血吸虫双价核酸疫苗pVIVO2-SjFABP/Sj23瞬时转染HEK-293细胞,通过逆转录(RT-PCR)和间接免疫荧光试验(IFAT)检测真核细胞中SjFABP和Sj23基因及蛋白的表达。质粒经股四头肌注射免疫BALB/c小鼠12只,每月眼眶采血,并活体灌流小鼠2只,IFAT检测重组蛋白的原位表达,Westernblot法检测血清中特异性抗体,持续观察6个月。结果RT-PCR和IFAT证明质粒pVIVO2-SjFABP/Sj23能在体外表达。免疫后连续6个月,IFAT均检测到小鼠骨骼肌注射部位重组蛋白的原位表达,但Westernblot未检测到血清中特异性抗体的存在。结论日本血吸虫双价DNA疫苗在HEK-293细胞和小鼠骨骼肌中均能够正确地表达,体内表达持续时间至少在6个月以上。
- 胡媛石佑恩朱晓华
- 关键词：日本血吸虫双价DNA疫苗持续时间
- 日本血吸虫DNA多价疫苗pVIVO_2SjFABP-23的构建及其保护性免疫被引量：12
- 2006年
- 目的构建日本血吸虫多价DNA疫苗pVIVO2SjFABP-23,并观察其在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法根据Sj FABP和Sj23的基因序列合成两对特异性引物,利用重组PCR技术将日本血吸虫Sj FABP和Sj23的基因片段进行拼接,得到融合基因SjFABP-23,再将该片段重组于p GEM-T载体中,进行PCR扩增及DNA序列测定。然后经双酶切将目的片段SjFABP-23克隆到pVIVO2的一个多克隆位点上转化E.coliGT 110获得重组质粒pVIVO2SjFABP-23,免疫小鼠进行免疫保护性实验。结果PCR扩增出一条大小约为1.1Kb的目的片段。免疫小鼠获得52.14%减虫率(P<0.01)和60.93%的减卵率(P<0.01),且均高于单价疫苗pVIVO2Sj23(P<0.05)。结论PCR成功扩增SjFABP-23的基因片段,血吸虫DNA多价疫苗pVI-VO2SjFABP-23构建成功,该疫苗在小鼠抗血吸虫感染中具有比单价疫苗pVIVO2Sj23更好的免疫保护作用。
- 李春艳余龙江刘智朱路朱晓华胡媛石佑恩
- 关键词：日本血吸虫脂肪酸结合蛋白多价DNA疫苗免疫保护
- 不同方式构建的日本血吸虫双价DNA疫苗保护力的比较被引量：11
- 2007年
- 目的寻求高效抗血吸虫感染的双价核酸疫苗。方法以共表达和融合表达两种方式构建两种日本血吸虫双价核酸疫苗pVIVO2-mcs-Sj23/SjFABP、pVIVO2-mcs-Sj23·SjFABP,以鸡尾酒式混合获得混合双价疫苗(pVIVO2-mcs-Sj23/SjFABP与pVIVO2-mcs-Sj23·SjFABP)。大量制备质粒,50只BALB/c小鼠随机分为5组:混合疫苗组、双价共表达疫苗pVIVO2-mcs-Sj23/SjFABP组、双价融合表达疫苗pVIVO2-mcs-Sj23·SjFABP组、空质粒对照组及生理盐水对照组。免疫后4周攻击感染,感染后45天剖杀,计数各组小鼠成虫数、肝虫卵数和免疫保力超过50%实验组的虫卵肉芽肿面积。结果与对照组比较,实验组小鼠成虫数、虫卯数和虫卵肉芽肿面积有显著性差异(P<0.05);融合表达组和共表达组无显著性差异(P>0.05);混合DNA疫苗组免疫保护力优于单一双价组;与混合DNA疫苗组比较,pVIVO2-mcs-Sj23·SjFABP组的肝脏肉芽肿面积有显著性减小(P<0.05)。结论血吸虫混合双价DNA疫苗诱导小鼠对血吸虫的保护力优于单一双价DNA疫苗。
- 胡媛石佑恩朱晓华李春燕余龙江
- 关键词：日本血吸虫双价DNA疫苗免疫保护力
- 日本血吸虫双价DNA疫苗的致突变性研究被引量：1
- 2008年
- 目的评价日本血吸虫双价DNA疫苗的致突变性。方法应用Ames试验、小鼠骨髓多染红细胞微核试验、小鼠骨髓细胞染色体畸变试验对日本血吸虫双价DNA疫苗进行初步评价和检测。结果日本血吸虫双价DNA疫苗在S9活化和非活化两种测试条件下,在每皿6.25～100.00μg浓度范围内,对3种菌株的回复菌落数与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),Ames试验结果为阴性;日本血吸虫双价DNA疫苗各剂量组骨髓多染红细胞微核率与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),试验结果为阴性;日本血吸虫双价DNA疫苗各剂量组染色体畸变率与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),试验结果为阴性。结论日本血吸虫双价DNA疫苗初步检测无致突变性。
- 陈丹石佑恩胡媛朱晓华
- 关键词：日本血吸虫双价DNA疫苗AMES试验微核试验染色体畸变试验
- DNA疫苗免疫效果影响因素的分析被引量：4
- 2003年
- DNA疫苗又称核酸疫苗或基因疫苗 ,能够在体内引起特异性细胞免疫应答和体液免疫应答 ,但免疫应答的水平受多种因素的影响 。
- 朱晓华石佑恩
- 关键词：DNA疫苗免疫效果影响因素核酸疫苗基因疫苗
- 白细胞介素-12在日本血吸虫脂肪酸结合蛋白诱导小鼠保护性免疫力中的佐剂作用被引量：11
- 2005年
- 目的研究白细胞介素-12(IL-12)对日本血吸虫脂肪酸结合蛋白(Sj14FABP)DNA疫苗的免疫增强效果。方法分别构建pVIVO2-Sj14FABP和pVIVO2-IL12-Sj14FABP疫苗,鉴定构建成功后免疫小鼠。48只雄性BALB/c小鼠随机分为A、B、C和D等4组,分别用0.9%NaCl(对照组)、pVIVO2、pVIVO2-Sj14FABP和pVIVO2-IL12-Sj14FABP肌注免疫1次(100μg/只)。免疫后30d各组小鼠感染40±2条尾蚴,感染后45d剖杀,计数成虫及肝内虫卵;同时用ELISA法检测小鼠血清中IgG抗体水平,用双夹心ELISA法检测脾淋巴细胞经伴刀豆球蛋白A(ConA)和可溶性虫卵抗原(SEA)刺激后培养上清中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)含量。结果经PCR和酶切鉴定,成功构建pVIVO2-Sj14FABP和pVIVO2-IL12-Sj14FABP重组质粒;C、D组免疫后分别获得24.1%和39.4%的减虫率、27.2%和32.8%的减卵率;细胞因子检测结果,D组经ConA和SEA诱生的IL-2和IFN-γ水平显著增高(P<0.01),而IL-4水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);免疫后30d小鼠血清IgG水平无明显升高,各实验组间差异也无统计学意义(P>0.05)。结论Sj14FABPDNA疫苗可诱导BALB/c小鼠产生部分抗血吸虫感染保护作用,细胞因子IL-12能够诱导机体免疫反应向Th1型优势分化,并增强血吸虫病DNA疫苗免疫保护性效果。
- 朱晓华石佑恩宁长修朱红刚
- 关键词：日本血吸虫脂肪酸结合蛋白白细胞介素-12DNA疫苗免疫保护性
- 血吸虫脂肪酸结合蛋白分子及其免疫保护性的研究进展被引量：1
- 2004年
- 脂肪酸结合蛋白是血吸虫脂代谢过程中的必需载体 ,对血吸虫在脊椎动物宿主体内的发育起决定作用。关于该分子的生物学特性及其在疫苗方面的研究表明 ,脂肪酸结合蛋白能够在宿主体内诱导一定的免疫保护力。
- 朱晓华石佑恩
- 关键词：血吸虫脂肪酸结合蛋白免疫保护性宿主脂代谢免疫保护力
- 日本血吸虫双价DNA疫苗对小鼠单次肌肉注射的毒性试验被引量：1
- 2006年
- 目的观察日本血吸虫双价DNA疫苗单次肌肉注射小鼠的急性中毒反应,初步评价其安全性。方法40只BALB/c小鼠(雌雄各半)随机分为4组,即10、20mg/kg给药组,空白质粒和生理盐水对照组,连续观察14d。结果各组动物无死亡,疫苗10mg/kg组未见明显毒性反应,疫苗20mg/kg组有个别动物出现短暂的活动减少,而空白质粒对照组出现活动减少和体重下降。结论日本血吸虫双价DNA疫苗对小鼠单次肌肉注射给药无明显毒性反应,预期临床应用安全性好。
- 石佑恩胡媛朱路余龙江朱晓华
- 关键词：日本血吸虫双价DNA疫苗毒性实验单次剂量
- 日本血吸虫双价DNA疫苗的构建及其免疫保护性研究被引量：12
- 2006年
- 目的研究防治日本血吸虫病的双价DNA疫苗的免疫保护效果。方法构建共表达双价DNA疫苗pVI-VO2-mcs-SjFABP-Sj23和pVIVO2-mcs-Sj23-SjFABP,并用BamHI/EcoRI和BspHI/AvRⅡ进行双酶切和测序鉴定。通过免疫荧光法(IFAT)检测质粒在BALB/c小鼠骨骼肌细胞的表达。70只小鼠随机分为7组,每组10只,分别肌肉注射生理盐水、pVIVO2-mcs、pVIVO2-mcs-Sj23、pVIVO2-mcs-SjFABP、pVIVO2-mcs-Sj23-SjFABP、pVIVO2-mcs-SjFABP-Sj23和pVIVO2-mcs-Sj23-SjFABP+多糖佐剂,免疫1次。免疫后4周用40±2条尾蚴攻击感染,感染后45d剖杀,计数各组小鼠成虫数和肝虫卵数。结果双酶切反应和测序分析证明成功构建双价质粒DNA。IFAT结果提示双价质粒DNA可在小鼠骨骼肌细胞胞膜和胞浆中表达。双价DNA疫苗免疫小鼠后获得41.2%～53.8%的减虫率和47.0%～53.8%肝减卵率;pVIVO2-Sj23-SjFABP+多糖佐剂组获得68.9%的减虫率和84.0%肝减卵率,保护力显著高于单价疫苗和双价疫苗(P<0.05﹚。结论共表达的双价DNA疫苗在小鼠体内可产生较好的抗血吸虫感染的免疫保护效果。多糖佐剂组保护效果明显高于单价和双价疫苗组。
- 胡媛石佑恩朱晓华宁长修朱红刚
- 关键词：日本血吸虫SJ23DNA疫苗佐剂
