徐岩
- 作品数：6 被引量：1H指数：1
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- β-淀粉样肽寡聚体的制备及鉴定
- 2015年
- [目的]制备β-淀粉样肽(amyloid-βpeptide,Aβ)的可溶性寡聚体。[方法]选取化学合成的Aβ25-35、Aβ1-42及对照肽Aβ35-25,体外37℃孵育7 d制备Aβ寡聚体。采用dot blotting,免疫印迹鉴定Aβ的聚集状态;并通过TUNEL法检测Aβ的神经毒性。[结果]经dot blotting和免疫印迹检测,显示本研究制备获得的Aβ25-35和Aβ1-42均为寡聚体,且Aβ25-35寡聚体的分子量以2 kDa、3 kDa和17 kDa为主,Aβ1-42分子量主要为4kDa和8kDa,而对照肽Aβ35-25并不能形成寡聚体。TUNEL法则显示Aβ25-35寡聚体可以引起SH-SY5Y细胞凋亡。[结论]在体外成功建立制备Aβ寡聚体的方法,且通过形态学实验证实该Aβ有神经毒性,为后续研究阿尔兹海默症的致病机制奠定实验基础。
- 徐岩侯筱宇
- 关键词：阿尔兹海默症Β-淀粉样肽寡聚体
- 抑制MLK3-PSD-95相互作用对β-淀粉样肽神经毒性的保护作用及其机制的研究
- β-淀粉样肽(Amyloid-βpeptide;Aβ)参与阿尔茨海默病(Alzheimer''''s disease;AD)的形成和发展。本室前期研究结果表明,可溶性寡聚化的Aβ激活MLK3-MKK7-JNK3信号通路,...
- 金磊徐岩杜彩萍侯筱宇
- 关键词：阿尔茨海默病Β-淀粉样肽PSD-95MAPK
- Neurexin 1β及其剪切变异体真核表达载体构建
- 2016年
- [目的]构建大鼠Neurexin 1β(Nrx 1β)及其剪切变异体Nrx 1β(ΔS4)真核表达载体,并鉴定其在真核细胞中的表达能力。[方法]以提取的大鼠海马总RNA为模板,采用RT-PCR技术获得Nrx 1β及Nrx 1β(ΔS4)目的基因,通过分子生物学方法将目的基因亚克隆至p DsRed2-C1载体。重组体转染HEK293T细胞,免疫印迹检测Nrx 1β及Nrx1β(ΔS4)的蛋白表达。[结果]Nrx 1β及Nrx 1β(ΔS4)目的基因扩增成功,重组体酶切鉴定能观察到目的基因片段(约1500 bp处),Nrx 1β及Nrx 1β(ΔS4)测序结果与Gen Bank中的序列一致。免疫印迹显示,p DsRed2-C1-Myc-Nrx 1β或p DsRed2-C1-Myc-Nrx 1β(ΔS4)在HEK293T细胞中能表达Nrx 1β或Nrx 1β(ΔS4)。[结论]成功构建大鼠Nrx1β及其剪切变异体Nrx 1β(ΔS4)的真核表达载体,重组体在HEK293T细胞中高效表达。
- 徐岩侯筱宇
- 关键词：NEUREXIN真核表达载体蛋白表达
- 大鼠星形胶质细胞培养方法的改进
- 2014年
- 目的 改进星形胶质细胞的体外纯化培养方法,为研究星形胶质细胞的生物学功能提供实验模型.方法 采用新生 SD大鼠,无菌操作取其大脑皮质,用0.025%的胰酶吹打消化成单个细胞,替代传统的0.25%的胰酶水浴消化15 min,单个细胞悬液接种于预先包被好PDL的24孔板或25 cm2的细胞培养瓶中,体外培养9~14天至细胞完全融合并铺满瓶底后进行传代.第2代细胞应用抗GFAP的抗体进行免疫荧光染色来鉴定星形胶质细胞的纯度.结果 免疫荧光染色结果显示这种培养方法分离培养出的星形胶质细胞纯度达到90%以上.结论 采用本实验改进的方法,培养的大鼠星形胶质细胞纯度高、生长状态良好,符合体外研究要求.
- 李会徐岩侯筱宇
- 关键词：星形胶质细胞细胞培养大脑皮质
- K252a及N-乙酰半胱氨酸对β-淀粉样肽神经毒性的保护作用及机制
- β-淀粉样肽(Amyloid-βpeptide;Aβ)的神经毒性被认为是阿尔茨海默病(Alzheimer''''s disease;AD)形成和发展的主要因素,Aβ神经毒性作用的分子机制尚未阐明。已有研究表明Aβ可以激活...
- 徐岩侯筱宇刘永纵艳艳
- 关键词：Β-淀粉样肽MAPK
