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张黎: 作品数：33 被引量：37H指数：3; 供职机构：江苏省疾病预防控制中心更多>>; 发文基金：国家科技重大专项江苏省科技支撑计划项目江苏省卫生厅科研基金更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>

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一种水银体温计标化槽: 本实用新型公开了一种水银体温计标化槽，它包括有外形呈半球体的试管架，所述试管架的半球表面设有多个插槽，所述插槽内设有呈放射状的管孔，所述插槽的顶部设有一个标准孔，所述管孔的测温端统一集中在局部小球状区域，所述管孔底部设有...; 梁祁朱凤才胡月梅孟繁岳储凯张黎李靖欣; 文献传递

H7N9亚型禽流感病毒非结构蛋白-1真核表达载体的构建与表达被引量：1: 2013年; 目的:构建甲型H7N9亚型禽流感病毒非结构蛋白NS1真核表达载体并转染293T细胞以表达其编码的蛋白。方法:从南京分离株H7N9流感病毒[A/Nanjing/1/2013(H7N9)]提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增NS1全长基因,将其克隆至pMD18-T载体中构建pMD18-T-NS1质粒,以pMD18-T-NS1质粒为模板扩增NS1基因。双酶切NS1基因PCR产物与PXJ40-MYC后,连接构建真核表达载体PXJ40-MYC-NS1,经酶切及测序鉴定后将质粒转染到293T细胞中,通过Western blot鉴定NS1蛋白的表达。结果:经双酶切、测序鉴定证实NS1基因的真核表达载体构建成功。Western blot法可见NS1基因编码蛋白的成功表达。结论:成功构建了H7N9非结构蛋白NS1真核表达载体,该表达载体的构建为后期建立稳定表达NS1蛋白的细胞模型和NS1蛋白功能研究奠定基础。; 温恬迟莹张黎张文帅彭海燕史智扬; 关键词：NS1 真核表达免疫印迹

抗体组库技术研究进展被引量：2: 2014年; 抗体组库技术主要用于研究免疫系统中B细胞编码的全部抗体信息,经历了B细胞Sanger测序、抗体分子质谱分析和高通量测序等3个发展阶段,该技术的发展正不断改变人们的传统认知。高通量测序技术使抗体组库容量不断提高,偏差不断减小;而分析软件的不断更新大大提高了在海量数据中发现低拷贝数稀有序列和其他相关生物信息的可能性。抗体组库技术可用于快速制备特异性人源抗体,B细胞源性恶性肿瘤和自身免疫性疾病的早期诊断、治疗效果评价、病情监测,感染性病原致病机理的研究,以及疫苗的研发和优化。它为科学家打开了一个窥视免疫系统的窗口,使人们能够从生物信息学的角度去理解疾病与健康的关系。; 张黎史智扬; 关键词：高通量测序

一种高通量表达单克隆抗体的线性表达框: 本发明公开了一种高通量表达单克隆抗体的线性表达框，所述抗体线性表达框包括顺次连接的以下几个表达原件：启动子、抗体信号肽编码序列、连接区编码序列、抗体重链可变区编码序列、抗体重链可变区编码序列、终止子。本发明利用该抗体线性...; 张黎卢静温恬孟繁岳胡月梅朱凤才; 文献传递

发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及初步应用被引量：11: 2012年; 目的制备发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)核衣壳蛋白(NP)的单克隆抗体,并探讨其在该病诊断中的作用。方法克隆NP基因,构建原核表达载体pComb3XSS-NP,并转化大肠杆菌Top10F′,经诱导表达,纯化获得6HIS-NP融合蛋白。以该融合蛋白免疫Balb/c小鼠,经杂交瘤技术制备NP的鼠源单克隆抗体。经鉴定后,选择1株1C8-C6进行大量制备、纯化,并偶联辣根过氧化物酶(HRP),用该酶标抗体对SFTSV感染人的急性期血清进行Western blot检测。结果成功表达、纯化SFTSV重组的NP。经小鼠免疫、细胞融合和ELISA筛选后,共获得4株鼠源单克隆抗体。具较高滴度的1C8-C6酶标抗体能与SFTSV感染人的急性期血清中的NP在Western blot水平上结合,而与汉坦病毒、登革热病毒感染人急性期血清及正常人血清不反应。结论 SFTSV NP的表达及其单抗的制备为该病的实验室诊断奠定了基础。; 徐言曾晓燕焦永军张国强张黎罗兰金秋张建平史智扬

肠道病毒71型重组VP1蛋白的原核表达及初步鉴定: 2012年; 目的利用大肠杆菌原核表达系统表达并纯化肠道病毒71型(EV71)VP1蛋白,并对重组蛋白功能进行初步鉴定。方法 PCR扩增EV71VP1全长基因,在测序正确的基础上,将其插入表达载体pET28a(+),构建表达质粒pET28a(+)/VP1,转化表达菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,利用Ni 2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,经ELISA和Western Blot,验证EV71VP1的抗原性。结果成功构建pET28a(+)/VP1重组质粒,经大肠杆菌表达、纯化获得分子量约为43kDa的融合蛋白,经ELISA和Western Blot,结果显示该蛋白有良好的抗原性。结论实现了肠道病毒7l型VP1蛋白的原核高效表达,为肠道病毒71型诊断试剂和疫苗的研究奠定基础。; 张黎包林金秋黄明明曾晓燕郭喜玲李祥瑞焦永军; 关键词：肠道病毒71 原核表达

慢病毒介导的H7N9禽流感病毒血凝素基因快速真核表达系统的建立被引量：1: 2014年; 目的利用慢病毒载体构建新型H7N9禽流感病毒血凝素(HA)基因的快速真核表达体系,在人胚肾细胞(HEK293T)中表达并进行功能鉴定。方法提取H7N9禽流感病毒基因组RNA,采用反转录PCR技术扩增HA读码框全长基因,将HA基因连接pMD18-T载体构建pMD18-T-HA重组载体。设计含Kozak序列的引物从pMD18-T-HA质粒中扩增出平末端HA基因,采用Topo克隆构建表达载体pLenti-HA-V5。将表达载体转染HEK293T细胞,通过间接免疫荧光法(IFA)和Western blot法鉴定HA蛋白的表达,通过血凝实验鉴定重组蛋白的生物学活性。结果经反转录PCR获得1 683 bp的HA全长基因,完成真核表达载体的构建并表达出相对分子质量(Mr)为70 000的重组蛋白。IFA和Western blot法结果显示该蛋白与阳性血清具有良好的免疫反应,同时血凝实验证实其具有血凝活性。结论成功利用慢病毒载体建立了HA蛋白的快速真核表达系统,为研制H7N9病毒亚单位疫苗、中和表位研究、假病毒包装奠定基础。; 张黎彭海燕周明浩余慧燕曾晓燕祁贤崔仑标焦永军史智扬; 关键词：血凝素基因慢病毒载体真核表达系统

年龄和流感病毒暴露对免后血清与H3N2亚型变异株交叉反应的影响: 2020年; 目的评估年龄和既往流感病毒暴露史对免后血清与H3N2亚型变异株交叉反应的影响。方法将750名受试者按照1∶1的比例接种试验用流感病毒亚单位疫苗和对照用流感病毒裂解疫苗,并且根据年龄和流感病毒暴露史分组,通过血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)试验测得受试者免疫前后血清针对疫苗株的血凝抑制滴度,与免疫后血清针对当年流行的4株H3N2亚型变异流感毒株的抗体滴度,计算抗体几何平均滴度(geometric mean titer,GMT),以及变异株和疫苗株的抗体GMT比值比,使用Kruskal-Wallis秩和检验比较不同年龄组以及不同既往流感暴露组之间的GMT比值比差异。结果在接种流感病毒亚单位疫苗的人群中,在免疫前同时暴露于H1亚型和B型流感病毒株的受试者,其针对A/Jiangsu-Nanchang/11926/2014(H3N2)的免后抗体水平高于无H1/B暴露的人群(t=3.913,P=0.001)。在接种流感病毒裂解疫苗的人群中,19~59岁的成年人针对A/Jiangsu-Haizhou/11044/2015(H3N2)免后交叉反应水平高于3~18岁的青少年(t=3.198,P=0.008)。结论先前暴露于H1亚型或B型流感病毒,可能会不同程度地影响H3免后抗体应答的交叉反应性,并因此可能影响疫苗效力。人类的免疫后反应存在年龄特异性差异。; 曾照准李靖欣曹嘉倩余秋凡张黎朱凤才; 关键词：流感病毒流感疫苗

高通量表达系统在EV71单链抗体表达中的应用被引量：1: 2019年; 目的建立从PCR产物直接表达ScFv抗体的方法,将该方法用于噬菌体抗体库淘选后ScFv抗体的高通量表达。方法 PCR扩增CMV启动子、ScFv和BGH Poly A尾基因片段,使用重叠PCR(overlapping PCR)将上述3个片段依次连接成1个线性的抗体表达盒。瞬时转染293T细胞,并用Western blot、酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和间接免疫荧光抗体试验(indirect immunofluorescent antibody,IFA)检测抗体表达盒中ScFv的表达和抗体的活性。从噬菌体库淘选出的阳性克隆中挑取96个抗体,用该表达盒进行高通量表达,并对表达效果进行评价。结果成功扩增出3个基因片段,并将3个片段连接成1个线性的表达盒。线性表达盒可直接在293T细胞中瞬时表达,表达上清经Western blot检测可见约相对分子质量为38×103的条带;ELISA和IFA结果均显示表达出来的ScFv抗体能与其对应的抗原特异性结合。同时该系统可以用于噬菌体抗体库中抗体基因的高通量表达。结论成功构建了ScFv的线型表达盒,并实现了抗体的快速高通量表达。; 余秋凡陶焱炀李靖欣王圆媛张黎朱凤才; 关键词：重叠PCR

肠道病毒71型VP1蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定: 2013年; 目的:制备肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)VP1外壳蛋白单克隆抗体。方法:利用重组纯化的EV71-VP1蛋白为抗原免疫BALB/c鼠,按常规杂交瘤技术进行细胞融合,对阳性杂交瘤细胞进行筛选及亚克隆,获得1株能稳定分泌抗EV71-VP1抗体的杂交瘤细胞株6F2B9,细胞体外扩大培养后的上清用Protein G柱纯化,超滤后用BCA法测其浓度,用免疫球蛋白亚类鉴定试剂盒鉴定单克隆抗体亚型,间接ELISA方法检测其效价和特异性,间接免疫荧光法检测其与EV71病毒的特异性结合能力。结果:本研究得到的抗EV71-VP1抗体DSE-136,纯化后浓度为1.9 g/L,免疫球蛋白亚类为IgG2b,轻链属于κ链;间接ELISA检测效价为1∶3.2×105;间接免疫荧光结果显示其可与EV71病毒特异性结合。结论:成功制备出1个效价高、特异性好的抗EV71-VP1单克隆抗体DSE-136,为VP1抗原诊断、疫苗研发及其效果评价奠定了基础。; 包林张黎曾晓燕郭喜玲史凤娟黄明明梁淑仪汪华焦永军; 关键词：肠道病毒71型 VP1蛋白单克隆抗体

张黎

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