张维娜
- 作品数：9 被引量：18H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 妊娠浓度雌、孕激素对小鼠H-Y皮肤移植物存活的影响及机制研究被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨妊娠浓度雌激素(E2)、孕激素(P4)对小鼠H-Y皮肤移植的影响及其机制。方法:建立小鼠去势模型,每天分别注射E2、P4及E2+P4联合注射,14 d后受鼠行H-Y皮肤移植并继续给药。检测移植前及移植后72 h外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)变化及外周血细胞因子水平;观察H-Y皮肤移植物的存活情况。结果:E2可提高外周血Treg的比例(P<0.05),移植后Treg的比例进一步升高(P<0.05);P4对Treg没有显著影响(P>0.05),而E2+P4联合对Treg的影响与单独应用E2结果相似(P>0.05)。移植后P4对Treg仍无明显影响(P>0.05),而E2+P4联合亦不能进一步提高Treg的比例。细胞因子检测显示,E2、P4均能减少促炎因子分泌,并提高抗炎因子分泌(P<0.05)。两者均能有效延长H-Y皮肤移植物存活(P<0.05),且具有协同效应。结论:P4可通过诱导免疫偏移促进H-Y皮肤移植物的存活。而E2除诱导免疫偏移外,还通过提高Treg水平而延长移植物的存活时间。
- 林星光周奇汪理张维娜雒真龙陈忠华昌盛
- 关键词：妊娠雌激素类孕酮调节性T细胞小鼠
- 肥大细胞体外诱生CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞的作用
- 2009年
- 探索小鼠骨髓源性肥大细胞能否在体外诱生CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞。从小鼠股骨获取骨髓细胞,加入完全RPMI 1640培养基(含IL-3和SCF各10 ng/ml)诱导4周。用甲苯胺蓝染色法观察肥大细胞异染颗粒;流式检测CD117和FcεRIα双阳性细胞比例。将肥大细胞与同基因来源的T细胞按不同比例(1∶2、1∶1、2∶1)置于48孔培养板中培养,作为三个实验组;未加肥大细胞的单独T细胞组作对照组。四个组均加入CD3抗体和CD28抗体各2μg/ml,IL-2 1 000U/ml,5 d后流式检测Foxp3表达情况。RT-PCR,免疫组化法检测肥大细胞中TGF-β1的表达。与对照组相比,实验组Foxp3表达均升高(对照组:3.37%±0.40%;实验组为:8.23%±0.80%、10.87%±1.25%、13.63%±0.55%)。RT-PCR和免疫组化均检出TGF-β1表达。肥大细胞能在体外诱导T细胞转化为CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞,可能与肥大细胞表达TGF-β1有关。
- 张维娜吴轲周鸿敏何文涛高英汪理林星光方泽民蔡兰军周巧丹雒真龙陈忠华
- 关键词：小鼠肥大细胞CD4^+CD25^+FOXP3^+调节性T细胞TGF-Β1
- 小鼠骨髓源性肥大细胞的培养及鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:在体外利用小鼠骨髓干细胞诱导获得高纯度的肥大细胞。方法:从小鼠股骨获得骨髓细胞,放入含10%胎牛血清的RPMI1640培养基中,加入不同浓度的刺激因子,即IL-3和SCF各分别为10ng/ml、15ng/ml、20ng/ml,放入CO2培养箱中培养4周,用免疫组化观察CD117的表达,用流式细胞术检测CD117和FcεRIα双阳性细胞的比例,用甲苯胺蓝染色法观察细胞的成熟度,并与较常用的肥大细胞系P815做比较。结果:培养获得的肥大细胞,其中IL-3和SCF分别为10ng/ml和15ng/ml时均可在4周后得到纯度大于95%的CD117和FcεRIα双阳性肥大细胞,而20ng/ml时FcεRIα的表达却有所降低,双阳性细胞仅达90%,而P815细胞系表达FcεRIα的比例很低。免疫组化发现培养获得的细胞大部分均表达CD117。甲苯胺蓝染色发现培养获得的细胞核被染成深蓝色,胞浆中布满大量紫红色的颗粒,呈现肥大细胞的典型特征。而P815却少见典型的紫红色异染颗粒。结论:用IL-3和SCF各10ng/ml可在体外成功培养获得高纯度的小鼠骨髓源性肥大细胞,且其在表型和成熟度方面均好于P815细胞系。
- 张维娜吴轲周鸿敏彭清臻何文涛高英林星光方泽民陈忠华
- 关键词：肥大细胞骨髓小鼠
- 半乳糖苷凝集素-7免疫增强功能的体外研究被引量：3
- 2010年
- 目的了解半乳糖苷凝集素-7(galectin-7)对不同T细胞亚群增殖的影响,并进一步探讨其免疫治疗方面的应用前景。方法利用不同浓度的重组Galectin-7蛋白在有或无抗CD3和CD28抗体存在时与纯化的T细胞共同培养5 d,流式细胞仪检测T细胞及各亚群的增殖情况。结果 galectin-7能明显诱导T细胞的增殖,在与抗CD3和抗CD28抗体联用时能协同促进T细胞增殖反应,增殖的细胞主要为CD8+T细胞。结论 galectin-7能诱导并促进T细胞的增殖,在体外发挥免疫增强作用,深入探索其作用机制,有望研发新的靶点药物用于肿瘤的临床免疫治疗。
- 高英张维娜何文涛汪理周鸿敏林星光陈忠华
- 关键词：增殖T细胞亚群
- B16F10黑色素瘤小鼠双阴性T细胞变化及与肿瘤生长关系的研究被引量：7
- 2009年
- 目的探讨B16F10黑色素瘤小鼠双阴性T细胞（DNT）数量变化及其与肿瘤生长的关系。方法以B16F10-luc-G5细胞系接种Babl／C小鼠建立移植瘤模型，并以活体成像系统（IVIS）监测其生长动态，流式细胞术检测接种后不同时间外周血中T淋巴细胞的比例；流式分选正常小鼠DNT再回输到B16F10黑色素瘤荷瘤小鼠体内，观察DNT对移植瘤生长的作用。结果①荷瘤鼠DNT含量高于正常鼠（P〈0．05）；CD4＋细胞含量与肿瘤大小高度负相关（R2=0．9993）；②以外源性DNT干预移植瘤，DNT干预组移植瘤生长速度较对照组快（P〈0．05）。结论B16F10黑色素瘤小鼠体内DNT的数量升高且与肿瘤大小正相关，且提高体内DNT含量可促进移植瘤生长，提示DNT将是肿瘤免疫治疗的靶点之一。
- 徐利军周鸿敏陈忠华张维娜潘铁成
- 关键词：调节性黑色素瘤小鼠近交BALBC
- Galeetin-9（Tim-3L）显著减弱小鼠移植排斥
- 2009年
- 目的探究Galectin-9（即Tcell immunoglobulin domain and mucin domain protein-3 lig-and，Tim-3L）的真核定位与功能，及其对同种异基因排斥反应的影响。方法PCR扩增Galectin-9片段，插入到pEGFP—N1质粒，转染中国仓鼠卵巢癌细胞系（CHO）行G418筛选，分选增强型绿色荧光蛋白（EGFP）阳性细胞。免疫组化检测Galectin-9的表达，Alamar Blue法检测稳定转染Galectin-9的CHO细胞及其新鲜培养上清对脾细胞增殖的影响，ELISA检测IL-2水平。给予BALB／c→C57BL／6心脏移植受鼠Galectin-9蛋白100μg×7d。结果Galectin-9表达于细胞浆，稳定转染Galectin-9-EGFP的CHO细胞上清抑制淋巴细胞增殖和IL-2的产生。上述效应可被Tim-3-Fc融合蛋白逆转。Galectin-9干预的心脏移植物中位生存时间明显延长[（22．7±1．2）d，（7．2±0．4）d）]。结论真核细胞中Galectin．9可通过分泌形式负调节同种异基因免疫；Galectin-9有望成为新型的抗排斥药物。
- 何文涛袁劲方泽民汪峰徐逸周鸿敏高英张维娜王璐陈忠华
- 关键词：TIM-3GALECTIN-9免疫抑制小鼠
- 孕早期水平雌孕激素对小鼠体内调节性T细胞的影响被引量：2
- 2010年
- 目的探讨孕早期的雌、孕激素对小鼠调节性T细胞在体内的影响及其相关性。方法建立去势C57BL/6小鼠模型,2周后分别皮下注射雌激素、孕激素及雌孕激素联合重建小鼠性激素水平,模拟妊娠早期小鼠激素水平。维持2周后,用流式细胞术和免疫组化检测给药后小鼠外周血、脾脏、髂窝淋巴结、胸腺中调节性T细胞比例变化情况。结果实验结果显示,雌鼠去势后,单独的雌激素干预可明显提高脾脏、髂窝淋巴结、外周血CD+4CD+25Foxp3+调节性T细胞在CD+4T细胞中的比例,分别为(8.56±1.85)%,(7.63±1.68)%,(6.13±1.32)%;与溶剂组比较差异有显著性(P<0.05)。但胸腺中调节性T细胞比例与溶剂组差异无显著性(P>0.05)。单独妊娠早期水平的孕激素与溶剂组比较,调节性T细胞比例有所升高,但差异无显著性(P>0.05)。而联合应用雌、孕激素对调节性T细胞的影响与单独应用雌激素的结果类似,两者差异无显著性。不同性别组给予相同干预药物,调节性T细胞的变化比例,雌雄两组差异无显著性(P>0.05)。免疫组化也得到了类似的结果。结论单独应用相当于孕早期水平的雌激素可明显提高小鼠外周血,脾脏,髂窝淋巴结CD+4CD+25Foxp3+调节性T细胞比例,而孕激素对外周调节性T细胞没有影响,两种激素对中枢淋巴器官的调节性T细胞均没有影响。小鼠T淋巴细胞中雌孕激素的受体分布及其功能与性别遗传没有相关性。
- 林星光汪理高英张维娜雒真龙陈忠华昌盛
- 关键词：孕激素小鼠
- 利用DIGE和RP-HPLC-ESI/MS技术寻找慢性移植肾失功患者血清标志物被引量：1
- 2009年
- 目的:利用蛋白组学二维差异性凝胶电泳(2-DDIGE)和反相高效液相色谱法(RP-HPLC)联合电喷射离子化质谱(ESI/MS)技术寻找慢性移植肾失功患者血清生物标志物。方法:血清样本分成4组,慢性移植物失功组(CGD组)、移植后长期肾功能稳定组(SRF组)、急性排斥组(AR组)和健康对照组(N组)。血清样本经多重亲和排除柱去除高丰度蛋白处理后,使用2-DDIGE技术找到差异蛋白点。切下这些差异蛋白点,胰蛋白酶消化,经RP-HPLC-ESI/MS分析鉴定,在另一独立样本中对鉴定出的差异蛋白Galectin-7进行ELISA验证。结果:在CGD组患者血清中差异表达的蛋白共有39个,质谱鉴定出22个,包括载脂蛋白A-I前体,补体C4-A前体,Galectin-7等。ELISA结果提示CGD组患者血清中Galectin-7的表达较SRF组和N组有明显增高。结论:找到的这些差异蛋白具有不同的生物功能,为大样本、多中心的验证奠定了基础。Galectin-7可能是CGD的血清标志物,并对CGD的发病机制和治疗策略提供新的思路。
- 高英吴轲徐逸周鸿敏何文涛张维娜林星光蔡兰军雒真龙方泽民郭晖周绍棠昌盛杜敦峰陈忠华
- 关键词：肾移植慢性移植物失功蛋白组学
- Tim-3在小鼠心脏移植受者体内不同部位T淋巴细胞上表达的变化被引量：3
- 2010年
- 目的 检测激活的TH1类淋巴细胞标记分子“T淋巴细胞免疫球蛋白域及粘蛋白域蛋白-3（Tim-3）”在受者体内不同部位T淋巴细胞上表达的变化，探讨其与急性排斥反应的关系。方法建立小鼠同基因和异基因心脏移植模型（简称：同基因组和异基因组）；移植术后第3和第6天，分离和制备两组受者外周血、脾脏、引流淋巴结和移植心内淋巴细胞悬液，采用流式细胞仪检测Tim-3阳性细胞在CD4＋和CD8＋T淋巴细胞中的比值。结果两组受者术后外周血和脾脏内Tim-3＋／CD4＋以及Tim-3＋／CD8＋的比值比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。与同基因组比较，异基因组引流淋巴结内Tim-3＋／CD4＋比值轻度升高（P〈0．05）；但异基因组术后第6天与第3天比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。与同基因组比较，移植心内Tim-3＋／CD4＋和Tim-3＋／CD8＋比值均显著升高（P〈0．01）；异基因组术后第6天与第3天比较，移植心内Tim-3＋／CD4＋和Tim-3＋／CD8＋比值也显著升高（P＜0．01）。结论小鼠异基因心脏移植受者引流淋巴结和移植心内T淋巴细胞上Tim-3的表达升高与急性排斥反应的进展动态相关。
- 方泽民何文涛王升蔡兰军雒真龙张维娜周鸿敏陈忠华明长生
- 关键词：TIM-3心脏移植移植物排斥T淋巴细胞
