张华远
- 作品数：132 被引量：755H指数：17
- 供职机构：中国药品生物制品检定所更多>>
- 发文基金：“九五”国家科技攻关计划国家科技重大专项国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学化学工程更多>>
- 血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎的病原学研究被引量：16
- 1999年
- 目的对血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎进行病原学研究。方法用ＨＢＶＰＣＲ、ＨＣＶＲＴ－ＰＣＲ和ＨＥＶＲＴ－ＰＣＲ分别检测血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎患者血清，并对其部分阳性产物进行克隆测序。结果８７例非甲～戊型肝炎血清ＨＢＶＤＮＡ均为阴性，９例（１０．３％）为ＨＣＶＲＮＡ阳性，部分经测序证实为ＨＣＶ１ｂ亚型；余７８例为ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ均阴性。该７８例中，１４例因无血清未作ＨＥＶＲＮＡ检测，余６４例中４９例（７６．６％）为ＨＥＶＲＮＡ阴性，１５例（２３．４％）为ＨＥＶＲＮＡ阳性。经序列分析显示，其中９例为典型的中国ＨＥＶ株基因序列，６例变异较大，与典型的中国株基因序列的同源性仅为８０％左右。４９例ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ和ＨＥＶＲＮＡ均阴性的血清中１６例（３２．６％）ＨＧＶＲＮＡ阳性。由此可见，该８７例中至少有９例为ＨＣＶ感染，１５例为ＨＥＶ感染，１６例为ＨＧＶ感染。结论对血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎的病人应该用ＰＣＲ法进行病原学分型。
- 王佑春庄辉张华远李倬毛群颍李倬李河民
- 关键词：庚型肝炎病毒乙型肝炎病毒病毒性肝炎病原学
- 乙型肝炎病毒S基因变异株的研究被引量：5
- 2000年
- 目的 对７份ＨＢｓＡｇ诊断试剂检测结果不一致的样品进行确证并分析其原因。方法采用套式 ＰＣＲ法对７份样品进行ＤＮＡ扩增，并将阳性产物克隆到ｐＧＥＭ－Ｔｅａｓｙ载体上，然后进行测序并对其序列进行分析。 结果 ７份样品中６份为ＨＢＶ ＤＮＡ阳性，其中５份与Ａｂｏｏｔｔ和Ｏｒｔｈｒｏ ＨＢｓＡｇ试剂无反应或反应较弱，而且其ａ决定 簇的氨基酸均在１３４位发生改变，由Ｆ变为 Ａ；１份与 Ａｂｂｏｔｔ和Ｏｒｔｈｒｏ ＨＢｓＡｇ试剂反应较强，其ａ决定簇的氨基酸也 在１３４位发生改变，但由Ｆ变为Ｓ。结论 国内外首次报道ＨＢｓＡｇ ａ决定簇１３４位由 Ｆ变为 Ａ后，其抗原性明显降 低，不易被ＨＢｓＡｇ试剂检出；而１３４位由对变为 Ｓ后，其抗原性无明显改变。
- 王佑春林京香张华远杨军李河民
- 关键词：乙型肝炎病毒S基因变异株抗原性
- 重组乙肝疫苗纯度高效液相层析(HPLC)测定方法的改进被引量：3
- 2002年
- 为建立重组汉逊酵母乙肝疫苗HPLC检定方法 ,应用TSK G5 0 0 0PW检测系统测定汉逊酵母重组乙肝疫苗表面抗原的纯度 ,对不同样品处理液的配比浓度和处理时间分别进行了探讨 ,作者选用DTT/Tween 80作为样品处理液效果优于DTT +Tween 2 0 ,1:5 0Tween 80与 0 .1mol/LDTT等量混合为样品处理液的适宜浓度。样品处理液与等量样品混匀时间介于 35s～ 2min时 ,HPLC分离效果好、结果稳定。该处理液及处理时间对CHO细胞及Merck酿酒酵母重组乙肝疫苗表面抗原的HPLC纯度测定无影响。结果表明 :现有的HPLC检测系统应用 0 .1mol/LDTT与 1:5 0Tween
- 胡忠玉汪德刚梁争论李河民张华远
- 关键词：重组乙肝疫苗纯度HPLC
- 生物素标记UTP及温度值对HCV细胞外聚合酶分子复制模型的影响
- 2004年
- 目的 研究建立细胞外丙型肝炎病毒聚合酶复制模型使用的生物素标记UTP浓度及温度值 ,为筛选药物创造条件。方法 使用高保真PfuDNA聚合酶进行反转录及套式PCR ,从我国HCVRNA阳性病人血清中扩增出HCVNS5bRNA聚合酶全长基因序列 ,构建原核表达载体pET 30a NS5b。在多个载体中选取pET 30a作为表达载体 ,选择诱导表达条件。利用Ni2十 金属离子螯和亲和层析将其纯化 ,对该酶蛋白的变性和复性条件进行研究。利用 96孔DNA BAND培养板 ,建立生物素标记检测HCVNS5b聚合酶活性的模型。结果 测序及读码框架分析结果表明 ,已得到相关HCVNS5bRNA聚合酶全基因序列。在最佳表达条件下 ,诱导表达的融合蛋白 (相对分子质量6 5 0 0 0 ) ,纯度大于 92 .83%HCV聚合酶活性集团完整。建立了细胞外丙型肝炎病毒聚合酶复制模型使用的最佳生物素标记UTP浓度及温度值。结论 HCV聚合酶得到高效表达和有效纯化 ,以及HCV聚合酶作用模板及温度的最佳条件分别为 0 .5mmol/L及 37℃。
- 杨振蒋建东祁自柏陈鸿珊张华远李河民
- 关键词：聚合酶HCV生物素标记
- 细胞免疫和遗传因素对乙型肝炎疫苗阻断母婴传播效果的影响被引量：16
- 2006年
- 目的比较接种重组乙肝疫苗后不同体液免疫应答高危儿童的细胞免疫反应特点,进一步探讨母婴阻断失败、无应答的机理。方法124名母亲HBsAg和HBeAg双阳性的新生儿按常规乙肝的免疫程序接种重组CHO和酵母乙肝疫苗,于第1针免后3、7、12月检测HBsAg和抗-HBs,判定免疫成功或失败的新生儿,首针后60～120月(平均80月)再次检测HBsAg和抗-HBs指标,选取8名免疫重组乙肝疫苗母婴阻断失败儿童、4名免后无应答抗体反应的儿童和11名母婴阻断成功的儿童采集静脉血样,分离淋巴细胞,应用ELISPOT方法检测产生IL-2斑点形成细胞的数量,并对斑点数和表面抗体滴度的相关性进行比较,同时分析HLA-A、-B、DRB1和DQB1等位基因的多态性。结果(1)124名研究对象中有77．4％的儿童可产生保护性表面抗体,成功阻断母婴传播;13．7％的人免疫失败,感染乙肝;8．9％的儿童则对乙肝疫苗呈无应答状态。(2)免疫成功组产生IL-2细胞数(55．2±42．22)显著高于免疫失败组(3,75±3．24)和抗体无应答组(6．75±3．59),P<0．01。(3)儿童免疫乙肝疫苗后的表面抗体滴度与经乙肝疫苗诱导产生的特异性分泌IL-2的T细胞数量呈显著性正相关(r =0．601,P<0．01)。(4)HLA-B*48在对酵母乙肝疫苗无应答的儿童中占有25％的频率,显著高于免疫成功(2．2％)和失败的儿童(0％),P<0．05。对CHO疫苗无应答儿童的HLA-DRB1*15的频率显著高于免疫成功和失败的儿童(P<0．05)。结论乙肝疫苗母婴阻断失败和免后抗体无应答儿童的细胞免疫应答显著低于阻断成功的儿童,并且可能与遗传因素有关。
- 廖雪雁梁争论李艳萍李荣成刘建源吴小音张瑞方鑫农艺黄月奎张华远李河民
- 关键词：重组乙型肝炎疫苗HLA细胞免疫ELISPOT
- 两种新型佐剂的免疫学研究及应用被引量：3
- 2002年
- 疫苗佐剂可非特异性地通过物理的或化学的方式与特异性免疫原性物质结合 ,从而诱发机体产生长期、高效的特异性免疫反应 ,提高机体保护能力 ,同时又能降低免疫物质的使用量 ,减少疫苗的生产成本。铝佐剂是目前被批准并普遍使用于人类的疫苗佐剂 ,具有安全、可靠并可显著增强体液免疫反应的特点 ,但对于细胞免疫和小抗原免疫原性物质的效果不够理想。为了寻找更加高效、安全的新型佐剂 ,近年来科研人员进行了大量研究。
- 毛群颖张华远
- 关键词：新型佐剂免疫学研究疫苗佐剂体液免疫细胞免疫
- 甲型肝炎灭活疫苗研制
- 2002年
- 我国是甲型肝炎(简称甲肝)感染高流行区,八五攻关期间全国流行病学调查结果显示,人群抗-HAV阳性率高达80.9%.我国经济发展不平衡,低屏障区和高屏障区在相当一段时期仍会同时存在,有资料表明,散发性甲型肝炎在散发性肝炎中仍占相当大比重,因此,在今后相当长一段时期,预防和控制甲型肝炎仍然是一项重要任务.
- 张华远尹卫东万宗举陈江婷李成明赵伟尹红章崔俊生
- 关键词：甲型肝炎灭活疫苗
- 中国人血清中丙型肝炎病毒聚合酶全长基因的克隆表达及鉴定
- 2003年
- 构建中国人丙型肝炎病毒(HCV)复制的RNA聚合酶原核表达载体pET30aNS5b,并在大肠杆菌中获得NS5B聚合酶蛋白的高效表达,为建立HCV NS5b聚合酶细胞外分子复制模型的方法创造条件。使用高保真Pfu DNA聚合酶进行反转录及套式PCR扩增,从我国HCV RNA阳性血清中扩增出HCV NS5b RNA多聚酶全基因序列,经BamHI和SalI酶切,将其克隆至同样酶切的pET-30a载体中:转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达。用抗HCV NS5b单克隆抗体做Western-Blot进行鉴定。结果表明构建了原核表达载体,pET30aNS5bpET30aNS5b明显表达出12-His-NS5b聚合酶蛋白。测序结果表明,与已发表的相关HCV NS5b RNA聚合酶序列比较,其核苷酸和氨基酸的同源性分别在69％～92.7％及88.8％～96.8％之间。在最佳表达条件下,可高效诱导表达融合蛋白(65kDa),最高表达量占菌体蛋白18.9％。Western-Blot结果显示表达蛋白为HCV NS5b酶。HCV聚合酶蛋白全长基因可以成功地克隆在pET-30a载体上并有效表达出目的蛋白,为研究建立HCV NS5b聚合酶细胞外分子复制模型莫定了基础。
- 杨振蒋建东祁自柏陈鸿珊张华远李河民
- 关键词：原核表达融合蛋白
- 聚乳酸-聚乙二醇共聚物的生物学效应研究被引量：1
- 2006年
- 廖雪雁梁争论周绍兵张华远李孝红邓先模李河民
- 关键词：生物学药物控释系统生物降解材料FDA批准聚乙醇酸
- 丙型肝炎病毒NS3区基因的克隆、表达及产物的纯化和抗原性分析
- 2004年
- 目前,我国阻断丙型肝炎传播的主要方法是用抗丙型肝炎病毒(HCV)酶联免疫吸附法(ELISA)试剂筛选供血员,国产试剂盒所用NS3抗原质量不太理想,使得国产试剂对NS3抗体漏检较多,提高该试剂盒质量的当务之急是开发更好的HCV抗原,特别是非结构区抗原[1,2].为分析和比较不同长度和型别的NS3片段的抗原性,我们在大肠杆菌中表达了5个不同长度和型别的HCV NS3抗原,并作为包被抗原,按间接ELISA原理检测抗HCV国家参考品血清及部分临床样本,比较其抗原性.
- 王尊文祁自柏于洋谷金莲杨振张华远李河民
- 关键词：丙型肝炎病毒NS3区基因克隆酶联免疫吸附法
