张亚东
- 作品数：14 被引量：59H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院野战输血研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 重组人蛋白C在HEK293细胞中的表达与鉴定
- 目的在克隆蛋白C cDNA的基础上进行其在哺乳动物细胞中的表达。方法将构建好的重组表达载体pIRES-hPC,用脂质体介导的方法转染HEK293细胞,经CA18加压筛选、细胞有限稀释法等获得克隆细胞株,收集无血清培养上清...
- 贾莉玮吕茂民徐斯日古楞沈永才于群张亚东章金刚
- 文献传递
- 三种蛋白染色方法在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中的应用被引量：11
- 2000年
- 目的 :比较SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS -PAGE)中蛋白染色的 3种方法。方法 :将SDS PAGE中的蛋白分别用银染、铜染和考马斯亮蓝染色 ,并对铜染或考马斯亮蓝染色后的蛋白进行相应的复染。结果 :快速银染法灵敏度最高 ,但操作步骤繁琐 ,染色时间约 50min ;考马斯亮蓝染色灵敏度最低 ,需染色和脱色 ,时间约为 1h ;铜染灵敏度介于银染和考马斯亮蓝染色之间 ,但染色时间仅 5min ,不需脱色 ,且可直接用考马斯亮蓝或快速银染法复染。结论 :用SDS PAGE进行蛋白检测时 ,铜染可作为蛋白快速分析的首选方法。
- 陈琳张亚东赵艳华马平卜凤荣
- 关键词：凝胶电泳
- 1,5-二咖啡酰奎宁酸对大鼠肝微粒体细胞色素P450含量的影响被引量：1
- 2005年
- 杨波闫亮平孟志云邹莉波窦桂芳张亚东
- 关键词：细胞色素P450HIV
- 嗜甲醇酵母表达系统研究进展被引量：14
- 2002年
- 以毕赤酵母 (P.pastoris)为代表的嗜甲醇酵母 ,作为一种新的外源蛋白表达系统 ,正在基因工程领域中得到日益广泛的应用。该系统具有操作技术简单、可进行高水平的分泌型表达、可对表达产物进行类似真核细胞的翻译后修饰与加工等显著优点。本文从表达载体 (包括新的启动子 ,选择标志 )、宿主菌株、发酵培养。
- 陈琳张亚东
- 关键词：基因表达调控
- 人蛋白CcDNA基因的克隆及序列分析被引量：3
- 2003年
- 为实现人蛋白CcDNA在哺乳动物细胞中的表达以及研究其生物学特性 ,针对人蛋白CcDNA序列设计引物 ,运用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)从人胎肝总RNA中钓取人蛋白CcDNA ,将其克隆入 pIRESneo载体中 ,通过酶切和PCR鉴定出重组体并进行测序分析。结果表明 ,获得大小为 1386bp的人蛋白CcDNA基因 ,成功构建人蛋白CcDNA载体 pIRES/hPC ,为进一步进行人蛋白CcDNA的表达和活性鉴定奠定了基础。
- 贾莉玮吕茂民沈永才赵保全张亚东章金刚
- 关键词：CDNA基因克隆逆转录聚合酶链反应
- 重组人蛋白C在HEK293细胞中的表达与鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的获得转染人蛋白CcDNA的工程细胞株,实现重组蛋白C的表达。方法将构建好的重组表达载体pIRES-hPC用脂质体介导的方法转染HEK293细胞,经G418加压筛选、细胞有限稀释法等获得克隆细胞株,收集无血清培养上清,浓缩后进行鉴定。结果经G418筛选得到了21株克隆化细胞,SDS-PAGE和Westernblot鉴定表明,表达产物含有人蛋白C,且具有抗凝活性。结论在哺乳动物细胞中已成功表达重组人蛋白C,为进一步深入研究及产业化奠定了基础。
- 贾莉玮吕茂民徐斯日古楞沈永才于群张亚东章金刚
- 关键词：抗凝活性
- 双价痢疾候选疫苗诱导小鼠产生粘膜免疫应答机制的初步研究被引量：9
- 1998年
- 目的探讨痢疾疫苗诱导粘膜产生免疫应答的调节机制，为研制安全有效的痢疾疫苗提供免疫学的理论依据。方法以本室构建的两株福氏２ａ、宋内氏双价痢疾候选疫苗ＦＳ－２１１７与ＦＳ－５４１６经不同途径免疫小鼠，分离小鼠ＰＰ结（Ｐｅｙｅｒｓｐａｔｃｈｅｓ）与脾脏中的ＣＤ４＋Ｔ细胞并以ＭＴＴ法检测其对疫苗不同抗原成分的增殖反应。结果（１）口服痢疾疫苗可诱导ＰＰ结中的ＣＤ４＋Ｔ细胞产生显著的增殖反应，而未对脾脏中的ＣＤ４＋Ｔ细胞产生刺激作用；（２）皮下注射痢疾疫苗能使小鼠脾脏中的ＣＤ４＋Ｔ细胞产生显著的增殖反应，但未见ＰＰ结中的ＣＤ４＋Ｔ细胞产生明显的免疫应答；（３）痢疾疫苗可能有多种抗原成分参与了刺激肠粘膜ＰＰ结中ＣＤ４＋Ｔ细胞的增殖反应。结论口服痢疾候选疫苗可有效地诱导肠道粘膜产生免疫应答；免疫应答的产生可能依赖多种抗原成分的共同作用。ＰＰ结中ＣＤ４＋Ｔ细胞的特异性活化可能是诱导肠道粘膜免疫应答最重要的早期事件。
- 张亚东高杰英彭虹邢丽曾关富刘育红
- 关键词：细菌性痢疾肠粘膜免疫学
- 异种聚合血红蛋白抗原性检测方法的探讨
- 2004年
- 目的 :选择并建立异种聚合血红蛋白抗原性检测方法 ,为评价异种聚合血红蛋白对人有无抗原性提供参考。方法 :从速发型超敏反应、体液免疫反应、细胞免疫反应和抗原交叉反应检测聚合牛血红蛋白对异种动物的抗原性。结果 :家兔及豚鼠未发生速发型超敏反应。多次免疫后 ,家兔血清中总IgG无明显变化 ,但特异性IgG水平显著升高。B淋巴细胞转化检测表明 ,B淋巴细胞增殖活性增强 ,但与对照组相比无显著差异 (P >0 .0 5 )。聚合牛血红蛋白、人血红蛋白、兔血红蛋白抗原交叉反应结果显示 ,聚合牛血红蛋白与人血红蛋白存在抗原交叉反应 ,提示聚合牛血红蛋白与人血红蛋白在抗原结构上有同源性。结论 :该聚合牛血红蛋白与人血红蛋白在抗原结构上有同源性 ,除用其免疫的实验组动物血清特异性抗体水平显著升高外 ,其他检测指标无显著变化。根据免疫学理论 ,无论某异物刺激机体产生何种免疫应答反应 ,都应视为该异物存在抗原性 ,因此提示该聚合血红蛋白存在抗原性。
- 陈琳张亚东卜凤荣章金刚
- 关键词：抗原性血红蛋白测定
- 重组人血清白蛋白在酵母中的表达及分析鉴定被引量：4
- 2001年
- 目的 :实现重组人白蛋白 (rHSA)在巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)中的高效表达。方法 :将本室构建的rHSA表达载体转化毕赤酵母 ,用G4 18筛选抗性克隆 ,SDS PAGE与Western印迹检测并鉴定表达产物 ;采用生化法、电泳扫描及Brodford法、竞争ELISA 3种方法测定摇瓶培养条件下rHSA的表达量。结果 :Western印迹分析发现转移至膜上的酵母表达产物能与抗人血清白蛋白单克隆抗体结合 ,相对分子质量与人血白蛋白一致 ,证明在酵母中成功地表达了rHSA。在甲醇诱导下摇瓶培养 ,rHSA表达量随诱导表达时间的延长而增加 ,第 8天产量约为 3.5g/L。结论 :人血清白蛋白表达载体与毕赤酵母基因组整合 ,获得酵母表达株。摇瓶培养 ,该株表达量为 3.5g/L。
- 陈琳赵艳华马平张亚东卜凤荣
- 关键词：血清白蛋白巴斯德毕赤酵母印迹法蛋白质
- 酵母表达重组人血清白蛋白检测方法的比较被引量：1
- 2004年
- 应用生化法、电泳扫描结合Bradford法、竞争ELISA等3种方法检测酵母表达重组人血清白蛋白(rHSA)的表达量。结果表明,3种方法检测结果近似。比较而言,生化法灵敏度较低,但操作简便,价格低廉;竞争ELISA法灵敏度最高,但需要特异的抗体;电泳扫描结合Bradford法需要特殊仪器,操作繁琐,花费时间长,灵敏度介于生化法和竞争ELISA法之间。综合利弊,生化法可作为检测酵母表达rHSA的首选方法,如条件允许,可考虑采用电泳扫描结合Bradford法或竞争ELISA。
- 陈琳张亚东赵艳华马平卜凤荣章金刚
- 关键词：酵母血清白蛋白竞争ELISA
