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张一婷
作品数:
2
被引量:1
H指数:1
供职机构:
西安交通大学医学院第一附属医院
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发文基金:
陕西省自然科学基金
国家自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
李利利
西安交通大学
尹爱平
西安交通大学医学院第一附属医院
孙吉平
西安交通大学医学院第一附属医院
尹爱萍
西安交通大学
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李利利
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中华肾脏病杂...
年份
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2014
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阻断Notch信号通路促骨髓间质干细胞体外分化为胰岛样细胞
被引量:1
2014年
目的通过Notch信号途径抑制剂DAPT构建Notch信号敲除模型,探讨Notch信号通路在骨髓问质干细胞(BMSCs)体外分化为胰岛样细胞中的作用。方法体外分离培养BMSCs并鉴定,体外诱导其分化。用ν-分泌酶特异性抑制剂DAPT阻断Notch信号通路。采用双硫腙(DTZ)染色法鉴定胰岛细胞;间接免疫荧光染色,RT—PCR和Western印迹等方法检测诱导后细胞的胰岛素、胰高血糖素、胰十二指肠同源框1基因(Pdx-1)和神经元素3(Ngn3)的表达。ELISA法检测细胞葡萄糖刺激后分泌胰岛素水平。结果(1)BMSCs鉴定:间接免疫荧光染色结果显示:BMSCs表达CD59和CD90抗原,体外可表达神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)等神经细胞标记物,证实其具多向分化潜能。(2)MTr结果显示:ν-分泌酶抑制剂(DAPT)可抑制BMSCs增殖,其效应有时间和剂量依赖性。并以剂量和时间依赖性方式抑制Notch信号通路靶基因Hcsl的表达。用1、5、20μmol DAPT处理96h后细胞的Hesl表达分别为对照组的92.06%、71.40%、46.89%,提示其对Notch信号通路阻断率分别达到7.94%、28.6%和53.11%(均P<0.05)。(3)间接免疫荧光结果显示:DAPT阻断组的胰岛素和胰高血糖素阳性细胞百分比较对照组明显增多[分别为(74.03±3.96)%比(36.49±3.24)%;(64.81±4.37)%比(37.50±3.69)%,均P<0.051。提示阻断Notch信号通路后BMSCs体外分化效率增加。(4)RT-PCR和Western印迹结果提示:BSMCs诱导14d后可以检测到胰岛素、胰高血糖素表达,DAPT阻断后上述蛋白表达上调;BMSCs诱导早期(7d)即表达Pdx-1和Ngn3,14d后达到高峰,之后逐渐下降。DAPT阻断后Pdx-1和Ngn3的表达增加。(5)ELISA结果显示:诱导后细胞对葡萄糖刺激有分泌胰岛素反应,DAPT阻断后诱导细胞的反应更好。结论大鼠BM
张一婷
尹爱平
李利利
孙吉平
关键词:
间质干细胞
骨髓
胰岛
NOTCH信号
阻断Notch信号通路促进大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为胰岛样细胞
目的:通过Notch 信号途径抑制剂构建类似于Notch 信号敲除模型,探讨Notch 信号通路对骨髓间质干细胞(BMSCs)体外分化为胰岛的作用.方法:体外分离培养BMSCs 并进行鉴定;体外进行诱导分化;应用γ-分泌...
张一婷
尹爱萍
孙吉平
李利利
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