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阻断Notch信号通路促骨髓间质干细胞体外分化为胰岛样细胞被引量：1: 2014年; 目的通过Notch信号途径抑制剂DAPT构建Notch信号敲除模型，探讨Notch信号通路在骨髓问质干细胞（BMSCs）体外分化为胰岛样细胞中的作用。方法体外分离培养BMSCs并鉴定，体外诱导其分化。用ν-分泌酶特异性抑制剂DAPT阻断Notch信号通路。采用双硫腙（DTZ）染色法鉴定胰岛细胞；间接免疫荧光染色，RT—PCR和Western印迹等方法检测诱导后细胞的胰岛素、胰高血糖素、胰十二指肠同源框1基因（Pdx-1）和神经元素3（Ngn3）的表达。ELISA法检测细胞葡萄糖刺激后分泌胰岛素水平。结果（1）BMSCs鉴定：间接免疫荧光染色结果显示：BMSCs表达CD59和CD90抗原，体外可表达神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）等神经细胞标记物，证实其具多向分化潜能。（2）MTr结果显示：ν-分泌酶抑制剂（DAPT）可抑制BMSCs增殖，其效应有时间和剂量依赖性。并以剂量和时间依赖性方式抑制Notch信号通路靶基因Hcsl的表达。用1、5、20μmol DAPT处理96h后细胞的Hesl表达分别为对照组的92．06％、71．40％、46．89％，提示其对Notch信号通路阻断率分别达到7．94％、28．6％和53．11％（均P＜0．05）。（3）间接免疫荧光结果显示：DAPT阻断组的胰岛素和胰高血糖素阳性细胞百分比较对照组明显增多[分别为（74．03±3．96）％比（36．49±3．24）％；（64．81±4．37）％比（37．50±3．69）％，均P＜0．051。提示阻断Notch信号通路后BMSCs体外分化效率增加。（4）RT-PCR和Western印迹结果提示：BSMCs诱导14d后可以检测到胰岛素、胰高血糖素表达，DAPT阻断后上述蛋白表达上调；BMSCs诱导早期（7d）即表达Pdx-1和Ngn3，14d后达到高峰，之后逐渐下降。DAPT阻断后Pdx-1和Ngn3的表达增加。（5）ELISA结果显示：诱导后细胞对葡萄糖刺激有分泌胰岛素反应，DAPT阻断后诱导细胞的反应更好。结论大鼠BM; 张一婷尹爱平李利利孙吉平; 关键词：间质干细胞骨髓胰岛 NOTCH信号

阻断Notch信号通路促进大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为胰岛样细胞: 目的:通过Notch 信号途径抑制剂构建类似于Notch 信号敲除模型,探讨Notch 信号通路对骨髓间质干细胞(BMSCs)体外分化为胰岛的作用.方法:体外分离培养BMSCs 并进行鉴定;体外进行诱导分化;应用γ-分泌...; 张一婷尹爱萍孙吉平李利利

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张一婷

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