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低温诱导东乡野生稻幼苗期叶片cDNA文库的构建和鉴定: 2010年; 从8℃低温诱导的东乡野生稻幼叶中提取总RNA,以总RNA为模板,利用SMART技术合成第1链,再经LD-PCR扩增合成第2链后,将获得的双链cDNA与双元表达载体YPL3连接,重组质粒电转入大肠杆菌,成功构建了东乡野生稻cDNA文库。经测定,原始文库滴度平均为4.4×107cfu/mL,平均插入片段约1kb,重组率为100%,符合cDNA文库构建要求,为后续利用酵母功能互补技术筛选东乡野生稻有利基因奠定了基础。; 李玲龙邢俊杰崔玲玲韩小霞阳志刚李丁谢灵灵曹孟良; 关键词：东乡野生稻 CDNA文库构建 SMART技术

小粒野生稻STK类抗病基因同源序列的克隆与分析被引量：5: 2009年; 根据丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶类(serine-threonine kinase,STK)抗病基因结构中保守结构域,设计引物,以小粒野生稻基因组DNA为模板,扩增获得10条STK类抗病基因同源序列.同源性分析表明其都具有STK保守结构域,与已克隆的STK类抗病基因有不同程度的相似性,为进一步克隆小粒野生稻中的STK类抗病基因提供依据.; 崔玲玲韩小霞邢俊杰李玲龙阳志刚罗秀娟李丁谢灵灵曹孟良; 关键词：小粒野生稻抗病基因同源序列

野生稻基因组抗性基因富集文库的构建被引量：2: 2008年; 通过集成候选抗性基因克隆技术和磁珠富集文库技术以及可转化基因组文库技术,提出了基于野生稻基因组富集文库克隆野生稻新抗性基因的策略。包括构建野生稻可转化基因组文库,利用RecA重组蛋白介导生物素标记的探针对文库进行磁珠富集,构建野生稻基因富集文库,然后对富集文库的克隆进行鉴定分析,包括点杂交和克隆末端测序分析,最后对富集文库的阳性克隆进行全序列测定和功能验证。按照上述方法,构建了东乡普通野生稻和小粒野生稻可转化基因组文库,库容量分别达到1.58×105和2.68×105个克隆,进而构建了东乡野生稻基因组候选抗性基因富集文库,单克隆总数1 152个,对富集文库的菌落原位杂交筛选获得12个阳性克隆,对其中5个阳性克隆全序列测定结果表明,4个阳性克隆含有已克隆抗性基因的保守序列,证实构建候选抗性基因富集文库克隆野生稻新抗性基因的策略是可行的。; 曹孟良李磊韩小霞田志坚邢俊杰李强崔玲玲张朝良李玲龙罗秀娟杨志刚李丁谢灵灵陶小平罗泽宇唐丽; 关键词：野生稻富集文库新基因克隆

优化菌落原位杂交体系筛选野生稻基因组文库被引量：3: 2008年; 菌落原位杂交仍是当今筛选基因组文库的重要方法之一,但难以保持背景清晰和阳性杂交点明显的稳定的杂交体系.通过对杂交膜不同处理方法的对比,表明利用溶菌酶处理杂交体系进行菌落原位杂交筛选,其杂交结果背景较干净,且能根据杂交信号的强弱很清晰地显色阳性黑点.采用该法筛选野生稻基因组文库,已筛选出22个阳性克隆,并测序分析均为阳性克隆.; 陶小平李磊李强韩小霞邢俊杰崔玲玲李玲珑张朝良张秋平曹孟良; 关键词：基因组文库溶菌酶阳性克隆

叶绿体遗传转化技术的研究进展及应用于杂交水稻机械化制种的初步探索: 体转化足继核转化之后在基因工程研究中出现的新热点。叶绿体转化具有表达高、可同时进行多基因转化、无基因沉默现象等许多优点。概述了植物叶绿体基因组特点、遗传转化技术原理以及最近研究进展，并对其应用于杂交水稻机械化制种做了初步...; 李丁谢灵灵崔玲玲严礼左佳贺荣华赵迎曦曹孟良; 文献传递

东乡野生稻RPS2类候选抗病基因的克隆与分析被引量：5: 2009年; 利用NBS保守结构域获得的探针及基于RecA文库富集方法的试剂盒筛选东乡野生稻液体pCAMBIA1301质粒文库,杂交筛选获得阳性克隆,在NCBI上进行BLASTN序列比对后,设计相关引物,扩增获得编码区,并利用生物信息学方法预测其编码蛋白序列,与已克隆的NBS-LRR类抗性基因建立进化树.结果分析表明,其预测蛋白除了部分氨基酸缺失及2个氨基酸不同外,与粳稻大部分序列一致,分子进化树表明其与粳稻、拟南芥RPS2基因的关系最近.; 崔玲玲李磊韩小霞邢俊杰李玲龙阳志刚罗秀娟李丁谢灵灵曹孟良; 关键词：东乡野生稻生物信息学

野生稻候选抗病基因的克隆及白叶枯抗性鉴定: 野生稻中含有丰富的有利基因，尤其是抗病虫基因，但由于生殖隔离及遗传背景知识匮乏等限制，使传统杂交转育及常用的抗性基因克隆方法都难以在野生稻中利用。本实验将RGAs（抗病基因同源序列）技术与基于RecA蛋白的文库富集技术相...; 崔玲玲; 关键词：野生稻抗病基因同源序列; 文献传递

叶绿体遗传转化技术的研究进展及应用于杂交水稻机械化制种的初步探索被引量：2: 2010年; 叶绿体转化是继核转化之后在基因工程研究中出现的新热点。叶绿体转化具有表达高、可同时进行多基因转化、无基因沉默现象等许多优点。概述了植物叶绿体基因组特点、遗传转化技术原理以及最近研究进展,并对其应用于杂交水稻机械化制种做了初步探索。; 李丁谢灵灵崔玲玲严礼左佳贺荣华赵迎曦曹孟良; 关键词：杂交水稻叶绿体转化机械化制种

野生稻可转化基因组文库的构建被引量：2: 2007年; 利用广泛应用于水稻转化的双元载体pCAMBIA1301构建了二倍体东乡野生稻和四倍体小粒野生稻可转化基因组文库,插入片断长度分别为9.54kb和13.3kb,稳定性实验证明含20kb插入片断的文库质粒可以稳定遗传,较长插入片断的文库质粒在农杆菌中的稳定性较差。; 李磊李强崔玲玲李玲龙罗赫荣曹孟良; 关键词：野生稻稳定性

三种野生稻候选抗病基因的克隆与分析被引量：8: 2007年; 候选抗性基因克隆策略是克隆植物新抗性基因的重要途径。根据已知NBS-LRR类抗病基因结构中的氨基酸保守区域,设计兼并引物,通过RT-PCR扩增、克隆和测序,从茶陵野生稻,东乡野生稻和小粒野生稻中共获得了11条NBS-LRR类抗病基因同源序列。通过聚类分析可将同源序列分为3类,其中茶陵野生稻中得到1类,东乡野生稻中得到2类,而小粒野生稻中得到3类。但是小粒野生稻包含有其他两种野生稻的序列。三类序列都与水稻抗病基因RPR1具有较高的同源性,有一类氨基酸序列同源性甚至高达88%,可能为其家族成员。利用电子定位将三类序列定位在水稻基因组11号染色体上RPR1附近。根据序列比对分析结果认为其中可能有1～2个新抗病基因。; 李强李磊田志坚邢俊杰崔玲玲曹孟良; 关键词：野生稻 RT-PCR

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崔玲玲