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新基因PRR11与FAM33A共享双向启动子区域的鉴定与初步分析: PRR11基因是我们最近鉴定的一个参与细胞周期和细胞增殖调节的肿瘤相关新基因。生物信息学分析表明,该基因的上游邻接基因FAM33A也是一个最近鉴定的参与细胞增殖和细胞周期的肿瘤相关新基因,且这两个基因的转录方向恰好相反,...; 卜友泉杜刚兰欢艾青崔涛易发平刘革力宋方洲; 关键词：启动子转录调控细胞周期; 文献传递

新基因PRR11的克隆、真核表达载体的构建及鉴定被引量：1: 2011年; 目的:克隆新基因PRR11的开放阅读框区,构建其真核表达载体,并进行表达检测及鉴定。方法:以HeLa细胞cDNA为模板,半定量RT-PCR扩增PRR11基因,克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,酶切、测序鉴定确认获得PRR11基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-PRR11。然后将pcDNA3.1-PRR11重组载体转染入HeLa细胞中,收集细胞,制备总RNA和细胞裂解液,采用半定量RT-PCR和蛋白质免疫印迹法检测目的基因表达情况。结果:成功扩增了PRR11基因,双酶切、测序鉴定证实目的基因成功克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,测序结果表明序列完全正确,pcDNA3.1-PRR11真核重组表达载体构建成功。半定量RT-PCR和蛋白质免疫印迹法证实了转染入HeLa细胞中的目的基因表达成功。结论:成功构建了PRR11基因的真核表达载体,并可在HeLa细胞中成功表达,为进一步研究PRR11基因的功能奠定了基础。; 徐瑲卜友泉郭勇崔涛兰欢; 关键词：PCDNA3.1 真核表达

蛋白质组学技术在研究AdIL-24抗癌机制中的应用: 2007年; 目的:探讨蛋白质组学技术在研究AdIL-24抗宫颈癌CaSki细胞作用机制的应用价值。方法:前期研究已成功构建AdIL-24,可抑制宫颈癌CaSki细胞生长,促进凋亡。在此基础上,通过双向凝胶电泳分离AdIL-24处理前后细胞总蛋白,并对胶条(pH3-10NL、pH4-7)、SDS-PAGE浓度(10%、12%)、电泳时间(6h、7h)进行优化,PDQuest图像分析,MALDI-TOF质谱鉴定,经Mascot、MS-fit软件查询SWISS-PORT数据库鉴定差异蛋白。结果:获得分辨率高、重复性好的CaSki细胞双向电泳图谱,质谱鉴定的差异蛋白点经Mascot、MS-fit软件搜索到同一种蛋白质。结论:已建立的蛋白质组学技术,为进一步研究AdIL-24的抑癌机制奠定基础。; 魏丽丽王中堂崔涛易发平宋方洲; 关键词：CASKI细胞蛋白质组学

人FAM33A基因启动子的克隆与鉴定被引量：6: 2009年; 目的鉴定人FAM33A基因的启动子，为进一步研究其转录调控机制奠定基础。方法采用5’RACE技术（5’端cDNA快速扩增）鉴定FAM33A的转录起始位点。采用PCR定向克隆、酶切亚克隆等策略，构建FAM33A启动子荧光素酶报告基因。采用Lipofeetamine^TM2000转染H1299细胞，并通过Dual-Lu-ciferase@ Reporter Assay System进行荧光素酶报告基因活性检测。结果确定了FAM33A的转录起始位点，构建了覆盖FAM33A 5’端ATG附近约2kb区域的一系列FAM33A启动子荧光素酶报告基因。启动子活性分析表明，这些重组体均具有较高的启动子活性，同时含有典型的GC盒以及Sp1、E2F和GATA-1等潜在的转录因子结合位点。结论FAM33A启动子区域主要定位于转录起始位点附近约590bp的区域内。; 杜刚卜友泉杨正梅兰欢崔涛镇磊刘革力宋方洲; 关键词：启动子转录调控细胞周期

肿瘤候选基因PRR11原核、真核表达载体构建、细胞定位及功能的初步研究: PRR11是一个富含脯氨酸的蛋白，共编码360个氨基酸，基因位于染色体17q22，此区域是在肺癌等各种肿瘤上的一个高发的基因扩增区，通过前期的研究表明，此基因可能是一种新的肿瘤相关基因，对新的肿瘤相关基因的研究不仅有助于...; 崔涛; 关键词：真核表达细胞定位肿瘤诊断; 文献传递

人白介素24腺病毒载体构建及其生物学活性分析被引量：2: 2008年; 目的:克隆人白介素24基因,构建其腺病毒载体,获取病毒重组子,并研究其生物学活性。方法:用密执毒素(Mezerein)诱导HeLa细胞表达IL-24,通过RT-PCR获取IL-24 cDNA,将其亚克隆至pAdTrack-CMV载体,经PmeⅠ线性化后,与腺病毒的骨架载体pAdEasy-1在BJ5183菌中同源重组,HEK293细胞包装扩增,PCR、Western blot鉴定。AdIL-24处理宫颈癌CaSki细胞,通过MTT细胞存活实验检测其活性;Hoechst33342染色、流式细胞仪检测凋亡;Western blot检测Bax、Bcl-2、p53蛋白的表达。结果:获取人IL-24的cDNA,序列与GeneBank公布序列完全一致,成功构建腺病毒载体,AdIL-24对CaSki细胞具有抑制生长、促进凋亡的作用,并上调Bax、p53蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达。结论:成功构建人IL-24的重组腺病毒载体,其病毒重组子具有生物活性。; 魏丽丽崔涛丁嵩涛易发平刘革力马永平宋方洲; 关键词：腺病毒载体活性检测

肿瘤相关新基因PRR11的全长cDNA克隆及其功能初步解析: PRR11是我们前期研究中发现的一个新的恶性肿瘤候选基因,为进一步对其在细胞周期和肿瘤发生发展中的作用进行深入研究,本研究对其进行了克隆和初步的功能分析。首先以正常人组织cDNA和HeLa细胞cDNA为模板,采用5-RA...; 兰欢卜友泉崔涛汪长东易发平刘革力宋方洲; 关键词：肿瘤 RACE 细胞增殖细胞周期; 文献传递

新基因PRR11的克隆、原核表达及鉴定被引量：5: 2009年; 克隆新基因PRR11的开放阅读框区,构建其原核表达载体,并进行表达检测及鉴定。以Hela细胞cDNA为模板,RT-PCR扩增PRR11基因,克隆入原核表达载体PET-28a中,酶切、测序鉴定确认获得PRR11基因的重组原核表达载体PET-28a-PRR11。然后把PET-28a-PRR11重组载体转化到BL21中,经IPTG诱导蛋白表达,提取细胞蛋白并采用SDS-PAGE和蛋白质免疫印迹法检测目的蛋白的表达情况。结果表明成功扩增了PRR11基因,双酶切、测序鉴定证实目的基因成功克隆到原核表达载体PET-28a中,目的蛋白成功表达。成功构建的PRR11基因的原核表达载体,及PRR11的重组蛋白表达产物,为进一步研究PRR11的基因功能奠定了基础。; 崔涛兰欢杜刚刘革力易发平卜友泉宋方洲; 关键词：原核表达

人HAS3启动子的结构与功能初步分析被引量：1: 2009年; 透明质酸合酶3(hyaluronan synthase3,HAS3),是一个参与透明质酸合成的酶分子,在上皮形成和肿瘤转移等过程中起重要作用.为了进一步研究HAS3基因的转录调控机制,本研究克隆鉴定了HAS3基因的启动子.首先应用5′RACE(rapid amplification of cDNA ends,cDNA末端快速扩增)技术鉴定了HAS3基因的转录起始位点,发现了丰度和转录起始位点不同的两种新的HAS3基因剪接变异体.通过PCR定向克隆策略,构建了覆盖HAS3基因5′端侧翼区起始密码子ATG上游约4.3kb区域的一系列HAS3基因启动子荧光素酶报告基因重组体.启动子活性分析表明,HAS3基因启动子定位于转录起始位点附近约450bp的区域内.转录因子结合位点分析表明,HAS3基因启动子缺乏典型的TATA盒,但含有典型的GC盒以及C/EBP等其它潜在的转录因子结合位点.结果提示,Sp1和C/EBP等转录因子可能参与HAS3基因的转录调控.; 镇磊卜友泉杜刚杨正梅兰欢崔涛刘革力宋方洲; 关键词：CDNA末端快速扩增启动子转录调控

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崔涛