宫苗苗
- 作品数：12 被引量：20H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划北京市科委项目国家公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 狂犬病病毒基质蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立被引量：8
- 2013年
- 目的以原核表达的狂犬病病毒M蛋白作为检测抗原,建立间接ELISA方法用来检测狂犬病病毒抗体。方法为表达狂犬病病毒(RV)基质蛋白(M),采用RT-PCR方法从狂犬病病毒Flury-LEP株中扩增RV基质蛋白基因,双酶切后定向克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-M。将重组质粒pET-M转化至宿主菌E.coli Rosetta中进行表达。SDS-PAGE和Western blot分析确定蛋白表达量和特异性。用纯化的重组M蛋白作为包被抗原建立检测犬RV抗体的间接ELISA方法,通过优化反应条件,确定抗原最佳包被量、血清的最佳稀释度、Protein A-HRP的最佳稀释度。结果经PCR、双酶切及测序鉴定,重组质粒pET-M构建成功,将重组质粒进行转化后诱导表达,经SDS-PAGE电泳分析得到高效表达的M蛋白,重组蛋白可被RV阳性血清特异性识别,表明基质蛋白具有良好的反应原性。用表达的狂犬病病毒M蛋白建立了检测RV抗体的间接ELISA方法,用该间接ELISA方法与以狂犬病病毒作为诊断抗原的商品化ELISA试剂盒分别对93份临床血清样品进行检测,结果两者的符合率为89.2%。结论用原核表达的重组M蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA方法可用做检测犬RV抗体水平的参考。
- 宫苗苗曾妮程朝飞李刚
- 关键词：狂犬病病毒基质蛋白原核表达蛋白纯化酶联免疫吸附试验
- 一种检测犬细小病毒的生物条形码及其应用
- 本发明提供了用于检测犬细小病毒的生物条形码、与条形码配合使用的互补探针NP链，其核苷酸序列分别如SEQ ID No.1，SEQID No.2所示，本发明还提供了对犬细小病毒的生物条形码进行荧光定量检测的方法和检测试剂盒。...
- 史利军宫苗苗袁维峰金红岩李刚朱鸿飞
- 文献传递
- 狂犬病病毒基质蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立
- 为表达狂犬病病毒(RV)基质蛋白(M)，采用RT-PCR方法从狂犬病病毒LEP-Flury株中扩增RV基质蛋白基因，双酶切后定向克隆至原核表达载体pET-32a(+)，构建重组质粒pET-M，经PCR和双酶切鉴定以及序列...
- 宫苗苗曾妮李刚
- 关键词：狂犬病病毒基质蛋白原核表达酶联免疫吸附试验蛋白纯化
- 文献传递
- 狂犬病病毒糖蛋白在Bac-to-bac杆状病毒系统中的表达及应用被引量：2
- 2011年
- 为表达狂犬病病毒(RV)糖蛋白(G),本研究通过RT-PCR方法克隆RVFluryLEP病毒株G基因,将其克隆至质粒pFastBacHTα中,重组质粒pFastBac-RV-G转化DH10Bac感受态细胞,经同源重组获得重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-RV-G,将其转染昆虫细胞sf21获得含有G基因的重组杆状病毒。采用SDS-PAGE和westernblot对重组蛋白进行鉴定及抗原性分析,以重组G蛋白作为包被抗原的ELISA检测36份犬血清样品。结果表明,在Bac-to-bac杆状病毒系统中表达的RVG蛋白能与his-tag单克隆抗体及RV阳性血清发生特异性反应,其相对分子量为60ku;与以RV为包被抗原的商品化ELISA试剂盒相比,以重组RVG蛋白为抗原建立的间接ELISA的敏感性、特异性和符合率分别为80%、81.8%和80.6%,表明杆状病毒系统表达的RVG蛋白是检测RV抗体的理想抗原蛋白,作为一种亚单位疫苗具有潜在的应用前景。
- 范晓娟李刚李伟曾妮宫苗苗
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白杆状病毒表达系统
- 狂犬病病毒M蛋白的原核表达
- 目的狂犬病病毒(Rabies virus,RV)属弹状病毒科狂犬病毒属,基因组从3’端至5’端依次排列5种结构蛋白,即核蛋白(N)、基质蛋白(M)、磷酸蛋白(P)、糖蛋白(G)和转录酶蛋白(L)。RV的M蛋白在病毒的装配...
- 宫苗苗李刚
- 基于狂犬病病毒四种重组蛋白的间接ELISA方法的比较
- 狂犬病一直是严重危害我国人民健康的重要人畜共患传染病之一，我国每年主要通过犬、猫等感染的人数超过千例，死亡人数位居各类报告传染病第三位。酶联免疫吸附试验（ELISA）因其具有实验周期短、操作简单、易于标准化等优点，已经成...
- 宫苗苗
- 关键词：狂犬病病毒M蛋白重组蛋白间接ELISA
- 基于狂犬病病毒重组蛋白的ELISA检测方法的建立及其初步应用
- 目的：原核表达狂犬病病毒的基质蛋白(M)，并以此作为包被抗原建立问接ELIsA检测方法，与以狂犬病病毒磷蛋白(P)作为包被抗原建立的间接ELIsA方法进行比较。方法：根据GenBank中公布的狂犬病病毒LEP—Flury...
- 程朝飞宫苗苗王勇田康乐赵占中李刚
- 关键词：狂犬病病毒基质蛋白原核表达
- 狂犬病病毒M蛋白的原核表达
- 本研究主要是构建了一个表达质粒即RV的M基因的原核表达质粒pET-RV-M，经IPTG诱导，主要以包涵体的形式高效表达。诱导表达完毕后进行Western Blot鉴定，基质蛋白能够被犬抗狂犬病病毒的单克隆抗体识别，说明具...
- 宫苗苗李刚
- 关键词：狂犬病病毒M蛋白原核表达抗体检测
- 抗狂犬病病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2011年
- 目的制备抗狂犬病病毒N蛋白单克隆抗体,为建立快速准确的狂犬病病毒抗原检测方法奠定基础。方法将狂犬病病毒Flury LEP株N基因克隆至pGEX-6P-1表达载体中,将纯化后的pGEX-6P-1-RV-N蛋白免疫BALB/c小鼠3次。取小鼠脾脏细胞和SP2/0细胞融合后,用pET-32a-RV-N重组蛋白作为筛选抗原,经3次亚克隆筛选后得到1D9、2B6、3C5、6B5及5F2 5株单克隆抗体细胞株。亚类鉴定结果表明,其中1D9、2B6、6B5 3株亚类为IgG1,3C5、5F2的亚类为IgM。间接ELISA方法检测2B6单抗细胞腹水效价可达1∶106。经Protein G亲和层析柱纯化和脱盐后可得到浓度为2.5mg/mL的高纯度的单克隆抗体。其免疫荧光试验结果表明5株单克隆抗体均能特异地与狂犬病病毒结合。结论制备的单抗具有良好的特异性和敏感性,为后期诊断方法的建立奠定了基础。
- 曾妮宫苗苗程朝飞黄华欣郭李平李刚
- 关键词：狂犬病病毒N蛋白单克隆抗体
- 狂犬病病毒N蛋白主要抗原区的表达及SPA-ELISA抗体检测方法的建立被引量：4
- 2011年
- 为有效监测免疫狂犬病疫苗后的抗体水平,以狂犬病病毒N蛋白的主要抗原表位所在区域N1蛋白为包被抗原,建立了SPA-ELISA抗体检测方法。用RT-PCR方法分别扩增出狂犬病病毒Flury LEP株N基因及其N1区域（1 000~1 353 bp）,将二者分别克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,并将重组的表达载体分别转化至大肠杆菌BL21（DE3）中,经1 mmol/L IPTG诱导后进行免疫印迹分析。结果表明,重组的RV N和RV N1均以包涵体形式表达。与表达全长RV N相比,RV N1的表达量显著高于前者,且该重组蛋白同样具有良好的反应原性。用纯化的重组RV N1作为诊断抗原建立了检测犬RV抗体的间接ELISA方法。通过优化反应条件,确定抗原最佳包被量是2 mg/L,血清的最佳稀释度为1∶100,Protein A-HRP的稀释度为1∶4 000。用建立的ELISA方法对102份临床血清样品进行检测,与商品化试剂盒相比,二者的符合率为94.1%。试验结果表明基于主要抗原表位所在区域N1蛋白的SPA-ELISA方法可有效用于犬RV抗体水平的检测,为检测RV免疫抗体的ELISA试剂盒的研制奠定了基础。
- 曾妮宫苗苗郭李平邱文英李刚
- 关键词：狂犬病病毒主要抗原区抗体检测
