宫坤
- 作品数：3 被引量：12H指数：2
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- 牙周膜干细胞膜片的构建及其生物学特性的研究被引量：7
- 2011年
- 目的:探讨牙周膜干细胞膜片的构建及其生物学特性。方法:采用胶原酶消化人牙周膜组织,获得牙周膜干细胞(Periodontal ligament stem cells,PDLSCs),经体外鉴定、扩增后构建PDLSCs细胞膜片,并通过倒置显微镜、HE染色、扫描电镜(SEM)对PDLSCs细胞膜片形态学进行检测。此外,细胞膜片厚度及膜片中细胞密度也被检测。结果:PDLSCs成功被分离、培养、鉴定,并且PDLSCs体外培养2周后,获得白色膜状PDLSCs细胞膜片。倒置显微镜下观察显示,细胞复层生长,细胞呈典型的纺锤状。体式显微镜下观察显示,细胞与细胞之间紧密连接。组织学观察显示,细胞与细胞之间存在着大量细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)。扫描电镜下观察膜片表面显示,细胞在膜片上充分伸展,细胞之间紧密连接。PDLSCs细胞膜片厚度由起初的(48±3.2)μm到3周后的(69±3.4)μm,但在第2周细胞厚度(64±3.3)μm,变化最明显。细胞膜片中的细胞密度检测显示连续培养3周后仍然有大量具有活性的细胞存在,然而细胞密度在第2周时最大。结论:本研究证明我们已经成功探索出一套稳定、可靠的PDLSCs细胞膜片构建方法,为利用PDLSCs细胞膜片修复、再生牙周组织及牙周缺损提供了一定的技术保证。
- 那思家黄芳郭维华宫坤金岩李德超
- 关键词：牙周膜干细胞细胞外基质
- 大鼠牙囊细胞多向分化潜能的体外研究被引量：2
- 2011年
- 目的:体外研究用差速贴壁法和有限稀释法纯化的大鼠牙囊细胞(Dental foilicle cells,DF-Cs)的多向分化潜能,为用于口腔组织工程的种子细胞奠定基础。方法:体式显微镜下准确分离7 d龄SD大鼠第一磨牙牙囊组织,使用酶消化法、有限稀释法、差速贴壁法进行培养和纯化细胞,取第3代细胞分别进行以下检测:①流式细胞仪鉴定细胞表面抗原标记;②骨向诱导、成脂诱导、成神经诱导和相关检测。结果:①差速贴壁法和有限稀释法纯化培养的大鼠牙囊细胞大多呈长梭形,部分细胞呈三角形,细胞形态呈现异质性;②流式细胞仪检测结果显示所获得的牙囊干细胞表面标记CD29、CD90阳性率分别为95.6%、98.6%,而CD45的阳性率仅为4.2%;③成骨诱导后,茜素红染色呈阳性,ALP染色显示ALP表达增强明显;成脂诱导后细胞胞浆内可见明显脂滴,油红O染色呈阳性;神经细胞诱导后细胞形态发生明显改变,神经微管蛋白染色呈阳性。结论:体外培养的大鼠牙囊细胞具有较强的多向分化能力,可作为口腔组织工程理想的种子细胞。
- 宫坤朱国雄郭维华杨杰梁世桢金岩
- 关键词：牙囊干细胞分化种子细胞
- 外源性重组蛋白Wnt3a对骨髓间充质干细胞增殖能力的影响被引量：3
- 2010年
- 目的:体外研究外源性重组蛋白Wnt3a对骨髓间充质干细胞增殖能力的影响。方法:常规分离培养人骨髓间充质干细胞,检测其克隆形成能力,并对其分子表型、成骨、成脂分化能力进行鉴定。重组蛋白Wnt3a以10、50、100 ng/mL浓度加入培养液中,MTT法和流式细胞仪检测细胞的增殖能力,Real Time-PCR检测细胞周期蛋白(Cycling D1,CCND1)mRNA的表达。结果:分离培养出的骨髓间充质干细胞具有克隆形成能力,成骨、成脂分化能力,阳性表达CD90(97.4%)、CD105(94.9%)、STRO-1(14.5%)、CD146(21.2%),阴性表达CD34(1.7%)、CD45(1.2%)。MTT检测结果显示Wnt3a干扰组3、5、7、9 d OD值均高于对照组,流式细胞周期检测结果显示Wnt3a干扰组处于增殖期的细胞比例高于对照组,Real Time-PCR结果显示Wnt3a干扰后CCND1的表达高于对照组。结论:重组蛋白Wnt3a促进了骨髓间充质干细胞的增殖,并且在0～100 ng/mL范围内增殖能力随浓度增加而增强。
- 丁伯福李婵娟刘娜罗海浪宫坤刘卫红
- 关键词：骨髓间充质干细胞WNT3AWNT/Β-CATENIN信号通路
