孔德晓
- 作品数：19 被引量：63H指数：4
- 供职机构：山东大学第二医院更多>>
- 发文基金：山东省科技攻关计划山东省优秀中青年科学家科研奖励基金山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- 一种过表达人IL-1Ra的间充质干细胞及其应用
- 本发明提供了一种过表达IL‑1Ra的间充质干细胞在制备预防和治疗GVHD中的应用。用过表达IL‑1Ra的质粒包装制备慢病毒，然后感染MSCs细胞，抗性筛选后获得稳转细胞系MSC‑oeIL‑1Ra，该细胞系可用于aGVHD...
- 郑成云姜杨王顺业孔德晓
- 鸢尾素在制备治疗再生障碍性贫血药物中的应用
- 本发明公开了鸢尾素在制备治疗再生障碍性贫血药物中的应用，给药方式为腹腔注射给药，给药剂量为0.5μg/g；本发明的鸢尾素在制备治疗再生障碍性贫血药物中的应用，由于鸢尾素无种属特异性，组织相容性好，因此对再生障碍性贫血患者...
- 唐东起郑成云孔德晓李慧
- 文献传递
- 鸢尾素在制备治疗再生障碍性贫血药物中的应用
- 本发明公开了鸢尾素在制备治疗再生障碍性贫血药物中的应用，给药方式为腹腔注射给药，给药剂量为0.5μg/g；本发明的鸢尾素在制备治疗再生障碍性贫血药物中的应用，由于鸢尾素无种属特异性，组织相容性好，因此对再生障碍性贫血患者...
- 唐东起郑成云孔德晓李慧
- 再生障碍性贫血患者骨髓自然杀伤T细胞体外活化特性研究被引量：5
- 2010年
- 目的 研究再生障碍性贫血（再障）患者骨髓中自然杀伤T（NKT）细胞的数量以及体外活化后的功能状态.方法 将扩增活化骨髓单个核细胞（BMMNC）中NKT细胞的培养体系分为2组：①加入α-半乳糖神经酰胺（α-galactosylceramide,α-Galcer）＋rhIL-2;②加入α-Galcer＋rhIL-2＋rhGCSF.以流式细胞术（FACS）检测再障患者及正常对照组BMMNC中TCRVα24＋Vβ11＋细胞（NKT细胞）扩增前后的比率,同时测定NKT细胞活化后胞内IFN-γ、IL-4的表达.结果 再障患者组BMMNC中NKT细胞的比率为（0.19±0.09）%,NKT细胞在①、②培养体系中扩增活化7 d后,扩增倍数分别为79.91±40.56和67.45±29.42（P＜0.05）;活化后NKT细胞胞内IFN-γ阳性的比率分别为（62.31±14.67）%和（37.45±7.89）%（P＜0.01）;IL-4阳性的比率分别为（27.03±9.88）%和（55.11±12.13）%（P＜0.01）.正常对照组BMMNC中NKT细胞的比率为（0.25±0.12）%,较再障患者组显著升高（P＜0.05）,正常对照组NKT细胞在相应的①、②培养体系中的扩增倍数均高于再障患者组（P＜0.05）;活化后NKT细胞胞内IFN-γ的表达均低于再障患者组（P＜0.05）.结论 再障患者骨髓中NKT细胞较正常对照显著减少,扩增能力较正常对照降低,活化后IFN-γ的表达较正常对照升高.在rhG-CSF作用下,再障患者骨髓中NKT细胞经α-Galcer刺激后的扩增能力下降,表达IL-4的NKT2型细胞优势扩增,IL-4表达及分泌增加.
- 王迎雪徐从高冉俊丽吴新春孙俊华王涓冬郭成山刘军莉孔德晓窦爱霞
- 关键词：自然杀伤T细胞细胞因子
- 间充质干细胞及胰岛素分泌细胞治疗糖尿病的临床及应用基础研究
- 本研究分三部分进行阐述:第一部分为UMSC输注对2型糖尿病及其并发症的临床治疗作用和相关机制研究;第二部分探讨laminin411对UMSC向IPC诱导分化作用及其机制探讨;第三部分为下一步工作计划。具体如下:第一部分脐...
- 孔德晓
- 关键词：糖尿病间充质干细胞胰岛素分泌细胞
- 高三尖杉酯碱诱导的白血病耐药细胞基因表达谱的变化
- 2009年
- 目的探讨高三尖杉酯碱（HHT）诱导的人白血病细胞耐药相关分子。方法在前期建立的HHT诱导的人白血病多药耐药细胞株K562／HHT的基础上，采用基因芯片技术比较K562／HHT细胞、其亲本K562细胞以及用耐药逆转剂米非司酮（RU486）作用后的K562／HHT（K562／HHT／RU486）细胞三者基因表达谱的差异，选择在这三种细胞中呈动态变化的骨髓细胞X染色体上酪氨酸激酶（BMX）基因用RT—PCR和Westernblot法在转录和翻译水平进行验证，进而转染BMX基因到K562和K562／HHT细胞，观察BMX过表达时这两种细胞内柔红霉素（DNR）含量的变化，确定BMX是否在K562／HHT细胞耐药形成中发挥作用。结果耐药细胞K562／HHT与其亲本K562细胞相比，共有117个基因表达有显著差异，其中57个基因表达明显上调，60个基因表达明显下调，耐药细胞K562／HHT中多药耐药基因mdr-1表达明显上调；K562／HHT／RU486细胞与K562／HHT细胞相比，13个基因表达明显上调，37个基因表达明显下调。这些差异表达的基因涉及耐药、细胞信号传导、细胞分化、细胞增殖、转录调节以及离子转运等。基因NM-001721（BMX）、NM-031459（SESN2）、NM-033642（FGF13）和AL049309（SFRS12）在两组芯片中的表达均有显著差异。其中BMX基因在K562／HHT细胞中的表达与K562细胞相比，明显上调，在K562／HHT／RU486细胞则较K562／HHT细胞减低。进一步用RT—PCR和Westernblot法检测得到了相同的结果。RT—PCR和Westernblot证实BMX质粒转染的K562及K562／HHT细胞BMX表达均上调，流式细胞术检测到K562及K562／HHT细胞内DNR含量荧光强度分别为79．28±4．04和29．84±2．67，均较转染前荧光强度158．52±8．08和58．58±6．53显著减低。结论BMX在高三尖杉酯碱诱导的人白血病多药耐药细胞株K562／HHT耐药性产生中发挥作用。
- 于晓林刘永王涓冬孔德晓陈春燕
- 关键词：K562细胞多药高三尖杉酯碱基因BMX
- caspase-8靶向小发夹RNA抑制肝细胞凋亡的研究
- 2008年
- 目的研究针对caspase-8 mRNA的小发夹RNA(shRNA)真核表达载体对肝Hepa1-6细胞凋亡的干扰作用。方法TNF-α诱导Hepa1-6细胞凋亡,脂质体法将shRNA表达载体转染入Hepa1-6细胞中,24h后应用荧光实时定量PCR和Western blot法分别在mRNA和蛋白水平测定其caspase-8表达差异,流式细胞仪观察细胞凋亡的变化。结果TNF-α作用后Hepa1-6细胞caspase-8 mRNA由(0.050±0.006)升高至(0.286±0.063)(P<0.01),而shRNA表达载体Pgenesil-casp8使其下降至(0.098±0.037)(P<0.01)。转染Pgenesil-casp8重组质粒后caspase-8蛋白表达与mRNA荧光实时定量PCR结果吻合。TNF-α诱导Hepa1-6细胞凋亡率由(4.70±0.89)%升高至(17.40±2.21)%(P<0.01),Pgenesil-casp8作用后下降至(1.20±0.32)%(P<0.05)。结论针对caspase-8 mRNA的shRNA真核表达载体可有效抑制肝细胞Hepa1-6凋亡。
- 林森刘霞孔德晓曲云东张利宁张源朝
- 关键词：CASPASE-8RNA干扰凋亡
- 高三尖杉酯碱联合IFNα-2b可促进白血病源性树突状细胞成熟被引量：4
- 2009年
- 目的:研究高三尖杉酯碱(HHT)、干扰素α-2b(IFNα-2b)和两者联合(HHT+IFNα-2b)对白血病源性树突状细胞(DCs)的促成熟作用。方法:在白血病多药耐药细胞K562/A02中加入细胞因子rhGM-CSF和rhIL-4,7d后Wright-Gimsa染色观察细胞形态的变化,流式细胞术检测细胞免疫表型的变化,同种混合淋巴细胞反应、CTL杀伤效应、细胞因子IL-12的分泌来评价此白血病源性DC的成熟程度,然后在上述白血病源性DC中分别加入HHT、IFNα-2b和HHT+IFNα-2b,3d后以上述同样方法检测它们对此白血病源性DC的促成熟作用。结果:K562/A02细胞在rhGM-CSF和rhIL-4作用7d后,CD83、HLA-DR和CD86分子的表达分别为(65.50±8.40)%、(32.00±4.32)%和(18.65±3.20)%,经HHT作用后这3种分子的表达升高到(85.36±8.42)%、(39.58±7.68)%和(35.53±4.35)%;经IFNα-2b作用后升高到(87.15±7.59)%、(40.53±6.30)%和(38.45±6.42)%;经HHT+IFNα-2b联合作用后升高到(94.38±6.59)%、(52.75±8.51)%和(42.98±9.87)%,与作用前相比差异均显著。经HHT、IFNα-2b和HHT+IFNα-2b作用后具有典型DC形态的细胞增多。经HHT和IFNα-2b作用的DC均可刺激T细胞产生较强的增殖效应,诱导产生的CTL对靶细胞K562/A02的杀伤率明显增强且当效靶比为20:1时杀伤效率最强,IL-12分泌明显增高。结论:HHT和IFNα-2b对白血病源性DC有促成熟作用,且两者联用时作用最强。
- 孔德晓陈春燕王涓冬于晓林
- 关键词：高三尖杉酯碱干扰素Α-2BK562/A02细胞
- 放射性肝损伤的血清比较蛋白质组学分析被引量：3
- 2011年
- 目的:通过分离、鉴定及验证SD肝硬化大鼠肝脏放疗前后血清差异蛋白质的表达,探讨可能用于检测及监控放射性肝损伤的早期生物学指标。方法:8只健康成年SD大鼠皮下注射四氯化碳(CCl4),连续6周,建立肝硬化模型后随机分组,每组4只,即对照组和实验组。对照组大鼠(CCl4组)未给予放疗,实验组大鼠(CCl4+放疗组)行半肝照射,单次剂量15 Gy。6 h后分别提取2组大鼠的血清总蛋白,进行比较蛋白质组学分析。采用双向凝胶电泳分离蛋白,经图像分析识别2组大鼠放疗前后差异表达的蛋白质。应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALD-TOF-MS)鉴定差异蛋白质。应用Western blotting对血清中乙酰肝素酶和肝细胞生长因子受体的表达水平进行验证。结果:获得了分辨率和重复性均较好的凝胶蛋白图谱。共筛选出33个在实验组明显差异表达的蛋白点,其中12个蛋白质鉴定成功。在这12个蛋白质中,实验组中5个表达上调,7个表达下调。Westernblotting进一步证实了实验组乙酰肝素酶表达上调,肝细胞生长因子受体表达下调。结论:成功鉴定了12个与放射性肝损伤相关的蛋白。乙酰肝素酶和肝细胞生长因子受体可能作为预测及监控放射性肝损伤的早期指标。临床上要将二者作为可能的生物学标志物,其敏感性和特异性还有待进一步研究。
- 李晓梅姜玉华张在云孔德晓孙殿水于晓明孙洪强
- 关键词：放疗乙酰肝素酶蛋白质组
- 米非司酮逆转K562/A02细胞多药耐药的研究被引量：9
- 2007年
- 目的研究孕激素拮抗剂米非司酮对白血病多药耐药细胞 K562/A02的逆转作用及其机制。方法 MTT 法检测米非司酮作用72 h 后 K562/A02细胞增殖及其对阿霉素杀伤敏感性的变化;流式细胞术检测米非司酮作用前后 K562/A02细胞表面 P 糖蛋白的表达和细胞内柔红霉素的浓度;免疫组化法观察米非司酮作用前后 K562/A02细胞凋亡相关蛋白 bcl-2、Bax、caspase-3的表达;RT-PCR 检测米非司酮作用后对 K562/A02细胞内葡萄糖神经酰胺合成酶(GcS)mRNA 表达的影响。结果2.5、5.0和10.0μmol/L 米非司酮不抑制 K562/A02细胞的增殖,但上述浓度的米非司酮作用后K562/A02细胞对阿霉素的敏感性较前分别增强了1.68、4.17和10.71倍。K562/A02细胞表面 P 糖蛋白的表达为(49.03±5.32)%,10 μmol/L 米非司酮作用72 h 后降低到(28.60±2.13)%(P<0.01);K562/A02细胞内柔红霉素的浓度为(61.07±8.61)%,而10 μmol/L米非司酮作用后升高到(92.72±3.48)%(P<0.01)。经10 μmol/L 米非司酮作用后,bcl-2蛋白表达由(56±9)%降低到(37±6)%(P<0.05);Bax 蛋白由(40±5)%升高到(87±10)%(P<0.01);caspase-3蛋白则由(36±7)%升高到(89±6)%(P<0.01)。RT-PCR 结果显示 K562/A02细胞 GcS mRNA 的表达较K562细胞明显升高,10 μmol/L 米非司酮能明显降低 K562/A02细胞内 GcS mRNA 的表达。结论米非司酮可逆转白血病 K562/A02细胞的多药耐药,且具有剂量依赖性。10 μmol/L 米非司酮能明显逆转白血病 K562/A02细胞的多药耐药,其机制与降低 P 糖蛋白的水平,调节凋亡相关蛋白 bcl-2、Bax、caspase-3的表达,降低 GcS mRNA 有关。
- 孔德晓陈春燕许复郁贾继辉
- 关键词：米非司酮多药耐药蛋白
