姜慧英
- 作品数：36 被引量：87H指数：5
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技攻关计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 一种新的HPV的检测方法及巨大疣患者感染的HPV-2变异株启动子活性的研究
- ＜正＞目的:建立混合引物 PCR 方法检测寻常疣感染相关的 HPV 的型别;研究两例临床罕见巨大寻常疣病患者感染的 HPV-2变异株在 LCR 及转录调控蛋白 E2上的突变对病毒早期启动子活性的影响。方法:利用建立的 P...
- 雷艳君高晨安润陈建明石琦姜慧英韩俊董小平
- 文献传递
- PrP八肽重复突变体对细胞生长影响的探讨
- 2007年
- 目的探讨PrP八肽重复突变体对细胞生长的影响。方法将具有遗传性朊病毒病相关不同八肽重复区插入突变的PRM，基因表达载体瞬时转染HeLa细胞，经噻唑蓝比色法（MTT）、Annexin—V／PI双染流式细胞检测。结果多八肽突变PrP蛋白对细胞的毒性作用较野生型明显增强。多八肽突变PrP较野生型更容易诱导凋亡发生，多八肽突变组早、晚期凋亡率均高于野生组。结论遗传性朊病毒病相关多八肽突变PrP蛋白可能较野生型更易诱导细胞凋亡发生。
- 韩露万言珍韩俊陈岚孙力王小凡黄银霞董辰方姜慧英董小平
- 关键词：朊病毒肽类噻唑蓝比色法细胞凋亡
- 鼠源抗haPrP23—231噬菌体抗体库的构建和初步鉴定
- 2007年
- 目的构建和鉴定鼠源抗haPrP23—231噬菌体抗体库。方法利用纯化的朊蛋白抗原免疫BALB／c小鼠，取脾，提取细胞总RNA，逆转录cDNA，以其为模板进行免疫球蛋白Fab区基因的特异性PCR扩增，将轻链和重链Fd段基因分别构建到pComb3质粒，构建噬菌体抗体库。结果经过四轮“吸附-洗脱-富集”的过程后获得了12株阳性克隆。挑取5株进行序列分析，并将结果与GenBank中已知序列库中的IgG序列进行比较，得到了两株不同的抗体，并进行了初步鉴定。结论本研究为朊病毒病的研究奠定了基础。
- 黄银霞韩俊董辰方孙力高晨王小凡韩露周伟张宝云姜慧英梁米芳董小平
- 关键词：朊病毒肽库细菌噬菌体
- 蓝舌病毒L3基因的克隆与表达被引量：2
- 1999年
- 目的 通过高效表达，研究蓝舌病毒（ＢＴＶ） ＶＰ３ 的功能，为后续ＢＴＶ病毒样颗粒的装配作准备。方法 克隆出完整的ＢＴＶ１３ Ｌ３ 基因，将其插入杆状病毒表达载体进行表达。结果 获得了含有全长Ｌ３ 基因的克隆，ＶＰ３ 在昆虫细胞中得到了高效表达，表达蛋白占细胞总蛋白的１０％ ～１５％ ，ＶＰ３ 与ＶＰ７ 共表达可装配出ＢＴＶ 核心样颗粒。结论 在昆虫细胞中表达ＢＴＶＶＰ３ 蛋白具有生物学活性。
- 王健伟姜慧英温乐英屈建国赵同兴洪涛
- 关键词：蓝舌病毒克隆杆状病毒
- 定位表达于溶酶体、泛素的PrP载体的构建及鉴定
- 2008年
- 目的构建定位于溶酶体、泛素的PrP表达载体，并进行蛋白表达特点及定位的鉴定。方法将泛素基因、溶酶体膜定位信号序列基因和PrP基因连接，克隆至pcDNA3．1载体中，构建表达载体pcDNA3．1-UPrP,pcDNA3．1-PrPL；瞬时转染真核表达细胞，经Western Blot和间接免疫荧光技术检测PrP表达特点。结果构建的各种PrP定位表达载体均可定位表达具有三种类型的糖基化分子的PrP，以双糖基化分子类型最多。带有泛素、溶酶体信号的质粒pcDNA3．1-UPrP、pcDNA3．1-PrPL的PrP表达随着时间的延长蛋白表达量下降，提示泛素、溶酶体信号能加速表达PrP在细胞内的降解。结论成功构建了溶酶体、泛素定位表达的PRNP核酸疫苗载体pcDNA3．1-uPrP、pcDNA3．1-PrPL，为PRNP核酸疫苗的研究奠定了一定的基础。
- 李媛梅国勇姜慧英王桂荣田婵陈操王新王克霞韩俊董小平
- 关键词：朊病毒疫苗DNA
- 蓝舌病毒两外壳蛋白VP2和VP5在昆虫细胞中的表达及其特性被引量：4
- 1999年
- 目的 研究蓝舌病毒(BTV)VP2与VP5的免疫学特性,为BTV基因工程疫苗研究和病毒样颗粒装配打下基础。方法 将BTV10VP2和VP5基因分别插入杆状病毒表达载体pFastBac1,转染昆虫细胞获得重组杆状病毒。用SDSPAGE和Westernblot检测重组杆状病毒对VP2和VP5的表达,运用组织培养中和试验和直接血凝试验检测表达产物的生物学活性。结果 重组杆状病毒分别对BTV10VP2与VP5蛋白进行了表达,表达的VP2蛋白具有诱导中和抗体的活性和血凝活性,其免疫小鼠血清对BTV10的中和抗体滴度为1∶64,对BTV1有部分中和活性(1∶16),对BTV13无任何中和作用。VP5蛋白不具血凝活性和诱导中和抗体的能力,但两者联合免疫小鼠产生的中和抗体滴度要高于VP2单独免疫者(1∶256)。结论 昆虫细胞中表达的VP2能诱导中和抗体并具有血凝活性,VP5可增强VP2诱导中和抗体的能力,可用于病毒样颗粒的装配和基因工程疫苗研究。
- 王健伟姜慧英屈建国赵同兴洪涛
- 关键词：蓝舌病毒基因
- 人乳头瘤病毒2（HPV2）E2蛋白不同功能区突变对转录抑制作用影响的研究被引量：1
- 2011年
- 目的 研究HPV2变异株上E2蛋白不同功能区域的点突变对其转录作用的影响.方法 根据HPV2突变株E2上的突变点设计引物,采用延伸法构建不同的E2突变体,并插入到真核表达质粒pcDNA3.1中.表达不同突变体E2的pcDNA3.1-E2与带有HPV原毒株LCR的CAT报道基因载体进行共转染Hela细胞.通过检测CAT的表达量对不同E2突变体的转录抑制作用进行评估.结果 与全长的原毒株E2相比较,去除N端及C端功能区的E2蛋白均降低了E2蛋白对启动子活性的抑制作用.位于E2蛋白转录激活区（nt 3037）,铰链区（nt 3387）及DNA结合区（nt 3697）的点突变明显影响了其转录抑制功能.结论 HPV2 E2蛋白的转录调节功能与其转录激活区以及DNA结合区密切相关.HPV2突变株上的不同的E2的单个突变点能够明显降低E2蛋白对启动子活性的抑制作用.
- 高晨雷艳君姜慧英石琦田婵韩俊董小平
- 关键词：病毒蛋白质类突变
- 人乳头瘤病毒2(HPV-2)变异株的突变E2蛋白转录抑制作用的研究
- 2008年
- 皮肤寻常疣的发生与多种基因型别HPV的感染密切相关。本研究利用PCR方法对1例临床罕见的寻常疣患者感染的HPV-2毒株LCR及E2基因序列进行扩增、测序,分别构建含HPV-2变异株及原毒株LCR的重组CAT基因报导质粒pBLCAT-LCR和表达突变及野生型E2蛋白的重组真核表达质粒pcDNA3.1-E2,通过瞬时转染HeLa细胞,研究变异株启动子活性及突变E2蛋白的转录抑制作用。结果显示,患者感染的HPV-2变异株LCR及E2基因均存在多处点突变。变异株早期启动子活性明显高于原毒株;突变的E2蛋白转录抑制作用较野生型E2蛋白显著降低;变异株LCR上E2结合位点核苷酸的突变明显降低E2蛋白对病毒早期启动子的抑制作用。提示HPV-2变异株启动子活性增强及突变E2蛋白转录抑制作用的降低与这一罕见巨大寻常疣临床表型之间存在着重要的联系。
- 雷艳君高晨姜慧英韩俊陈建明石琦周伟袁育康董小平
- 关键词：寻常疣E2LCR启动子活性
- 细胞浆中PrP蛋白的表达及其细胞毒性作用的研究被引量：1
- 2008年
- 为了探讨在胞浆中表达的PrP的理化特征以及对细胞活性的影响,我们构建了胞浆型PrP(CytoPrP)真核表达质粒,瞬时转染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,通过蛋白酶敏感性实验检测CytoPrP及其蛋白酶抗性,利用MTT和Trypan Blue细胞计数检测CytoPrP的细胞毒性作用。结果显示,CytoPrP在胞浆内的存在受蛋白酶抑制剂的控制;与野生型PrP相比,CytoPrP具有相对较强的蛋白酶K(PK)抗性。MTT和细胞计数实验均显示,Cyto-PrP的存在可诱导明显的细胞毒性效应,而CytoPrP的细胞毒性作用受蛋白酶抑制剂含量的影响,呈剂量依赖关系。上述结果为研究CytoPrP在朊病毒病的发病机制中的意义提供了一定的科学数据。
- 王新董辰方石琦石崧王桂荣雷艳君安润徐琨姜慧英韩俊赵玉军董小平
- 关键词：朊病毒细胞毒作用
- 重组人Doppel蛋白的表达及其细胞毒性作用的研究
- 2007年
- Doppel(Dpl)蛋白是新近发现的PrP相关蛋白。根据GenBank公布的人PRNDcDNA序列设计合成特异性引物,用PCR方法从人外周血白细胞总DNA中扩增获得531 bp的人PRND完整基因序列,测序正确后克隆至表达载体,转化大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达重组人Doppel(rhDpl)蛋白。目的蛋白以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的60%以上。表达产物用Ni2+亲和层析柱纯化及羟胺化学裂解法去除标签蛋白,SDS-PAGE检测证实,纯化的rhDpl蛋白相对分子量约为15 kD。Trypan Blue及MTT实验显示,在50μg/mL及以上剂量时,rhDpl蛋白具有抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞生长的作用,在100μg/mL及以上剂量时,rhDpl具有杀伤HeLa细胞的活性,呈现明显的剂量和时间依赖性。Hoechst33342荧光染色观察显示经rhDpl作用的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y呈现出细胞凋亡现象。这些结果提示Dpl蛋白具有体外细胞毒作用,并呈现明显的组织类型特异性。以上工作为进一步了解人Dpl蛋白体内外生物学作用奠定了基础。
- 李萍韩俊单冰雷艳君周伟姜慧英董小平
- 关键词：细胞毒作用
