夏静
- 作品数：13 被引量：32H指数：3
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- 一种单色光细胞培养箱
- 本实用新型公开了一种单色光细胞培养箱，包括黑色电木箱体，箱体内设置有隔板，隔板将箱体间隔成多个腔室，各腔室的前后侧均设有通风口，各腔室的上方均对应设置有LED背光源，多个LED背光源可拆卸地固定于箱体上，实现单色光波长、...
- 付心怡张晓峰夏静
- 文献传递
- 丝素膜移植兔眼睑原位重建的研究被引量：3
- 2011年
- 背景利用自体或异体组织进行活体组织重建存在着供体材料少、易发生排斥反应等问题。研究证实，作为组织工程细胞支架，丝素膜有良好的生物相容性，但其是否可作为组织替代物尚未见报道。目的探讨应用丝素膜行眼睑原位重建术的可行性。方法健康新西兰大白兔18只，双眼上眼睑制作眼睑板缺损4minx3mE模型，右眼采用再生丝素膜材料进行上睑板重建术为丝素膜组，左眼采用同种异体巩膜材料行睑板重建为异体巩膜组，活体观察4周。采用随机数字表法将实验兔分为3组，每组6只，分别于术后第1、2、4周用空气栓塞法处死实验兔，收集带有移植片的兔眼睑制作石蜡切片，苏木精一伊红染色观察术区炎性细胞的浸润情况；用Masson染色法观察植片区胶原组织的形成和分布情况；应用免疫组织化学法检测植入区碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达；采用ImageProPlus分析软件对免疫组织化学结果进行半定量分析。结果所有兔眼眼睑缺损均Ⅰ期愈合，睑结膜面光滑，眼表炎症反应不明显，但异体巩膜组睑缘切迹较丝素膜组明显。组织学检查结果显示，术后随着时间的延长，移植区炎性细胞浸润逐渐减轻，术后4周丝素膜组术区胶原纤维排列整齐，结缔组织增生不明显；异体巩膜组术区胶原纤维排列相对紊乱，瘢痕组织增生较明显。术后第1、2、4周，丝素膜组术区组织中bFGF的表达量（A值）分别为0．02767±0．00469、0．05173±0．00872、0．05872±0．00688，巩膜组分别为0．05648±0．00914、0．07283±0．00917和0．07873±0．01084，两组各时间点bFGF表达量的差异均有统计学意义（t=-6．38、t=-4．99、t=-2．87，P〈0．05）。结论丝素膜作为眼睑原位重建术睑板的替代物组织相容性好，能有效恢复睑板形态，可替代异体巩膜重建眼睑。
- 钟蕾张晓峰孙正太夏静王英明
- 关键词：眼睑缺损丝素膜异体巩膜眼睑重建
- FK506对高糖培养视网膜Müller细胞血管内皮生长因子表达的抑制作用被引量：3
- 2014年
- 背景 视网膜M＆#252;ller细胞可通过表达血管内皮生长因子（VEGF）参与糖尿病视网膜病变（DR）的病理过程.FK506可抑制实体肿瘤及实验性角膜新生血管中VEGF的表达,但其对视网膜M＆#252;ller细胞中VEGF的表达是否有抑制作用鲜见文献报道.目的 观察FK506对高糖培养的大鼠视网膜M＆#252;ller细胞表达血管内皮生长因子（VEGF）的影响.方法 将大鼠永生化视网膜Müller细胞系进行常规培养并将对数生长期的Müller细胞分别接种到96孔培养板中,分别在培养液中加入800.00、400.00、200.00、100.00、75.00、50.00、25.00、12.50和6.25 pg/ml FK506 100 μl/孔（细胞密度为1×10^4个/ml）,MTT比色法确定Müller细胞半数抑制浓度（IC50）的最适FK506质量浓度.将大鼠视网膜Müller细胞系分为正常对照组、FK506组、高糖组和高糖＋ FK506组,分别用高糖DMEM培养液（含50 mmol/L D-葡萄糖）和正常DMEM培养基（含5.5 mmol/L D-葡萄糖）进行培养,并分别在培养基中加入FK506,至质量浓度为75 pg/ml.ELISA法检测培养细胞上清液中VEGF的质量浓度;分别采用逆转录PCR（RT-PCR）和Western blot法检测各组大鼠视网膜Müller细胞中VEGF mRNA及其蛋白的相对表达量,分别以目的基因与内参β-actin吸光度（A）比值和灰度比值表示.结果 光学显微镜下正常对照组、FK506组、高糖组及高糖＋Fk506组培养12、24、48 h的大鼠视网膜Müller细胞均呈多角形,大小一致.致大鼠视网膜Müller细胞IC50的FK506质量浓度为75 pg/ml.正常对照组、FK506组、高糖组和高糖＋FK506组细胞上清中VEGF蛋白的质量浓度分别为（966.46±13.59） pg/ml、（1 059.42±67.43） pg/ml、（16 243.11±3 926.38）pg/ml和（9 467.25±1 525.56） pg/ml,总体差异有统计学意义（F=20.51,P=O.00）,其中高糖组细胞上清中VEGF的质量浓度明显高于正常对照组,差异有统计学意义（P=0.00）;高糖＋FK506组较高糖组细胞上清中VEGF的质
- 夏蔚夏静张晓峰钟蕾孙正太王英明
- 关键词：视网膜血管内皮生长因子高糖
- 聚乙二醇400对体外培养人角膜上皮细胞生长的影响被引量：1
- 2012年
- 目的研究聚乙二醇400对体外培养人角膜上皮细胞(CECs)生物学特性的影响及其分子机制。方法制备含0.1%聚乙二醇400的DMEM/F12培养基。采用含0.1%聚乙二醇400培养基培养人CECs,倒置显微镜下观察并照相记录细胞培养24、48、72 h时的形态;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测角膜上皮细胞生长曲线;流式细胞术检测角膜上皮细胞细胞周期;RT-PCR检测角膜上皮细胞中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)基因表达水平。结果 0.1%聚乙二醇400对角膜上皮细胞的细胞形态无影响,实验组及对照组细胞形态均呈典型的多角形。MTT及流式细胞术检测结果显示,0.1%聚乙二醇400对体外培养人CECs的生长有促进作用(均P<0.01)。0.1%聚乙二醇400培养人CECs后bFGF和EGF的基因表达水平比对照组高(P<0.05或<0.01)。结论 0.1%聚乙二醇400可能通过缩短人CECs的细胞周期和上调人CECs bFGF、EGF基因的表达,从而加速CECs增殖。
- 孙正太张晓峰夏蔚钟蕾王英明夏静
- 关键词：聚乙二醇400人角膜上皮细胞碱性成纤维细胞生长因子表皮生长因子
- 不同材料硬性透氧性角膜接触镜表面细菌黏附能力的对比研究被引量：1
- 2013年
- 背景角膜接触镜的佩戴可能会增加角膜感染的机会，一些研究认为角膜接触镜材料的透氧性与角膜感染的发生有关。目的比较用于制作硬性透氧性角膜接触镜（RGP—CL）的材料，如氟硅丙烯酸酯A（XO）、氟硅丙烯酸酯B（EO）和聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）表面对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和铜绿假单胞杆菌的黏附情况。方法分别将3种RGP—CL镜片材料置于3种细菌悬液中培养24h，采用MTT比色法、旋涡震荡菌落计数法和扫描电子显微镜观察并比较3种材料表面黏附细菌的能力。结果MTT比色法结果显示，XO制镜材料对金黄色葡萄球菌的黏附能力（A值）明显低于EO材料和PMMA材料，差异均有统计学意义（q=7．379、8．207，P〈0．01），但EO材料与PMMA材料对金黄色葡萄球菌黏附能力的比较差异无统计学意义（q=0．828，P〉0．05）；XO材料及EO材料表面表皮葡萄球菌的黏附能力低于PMMA材料，差异均有统计学意义（q=14．000、12．800，P〈0．01），而XO材料与EO材料间表皮葡萄球菌黏附能力的比较差异无统计学意义（q=1．200，P〉0．05）；3种材料对铜绿假单胞杆菌的黏附能力（A值）差异无统计学意义（F=2．155，P=0．138）。旋涡震荡菌落计数法结果显示，XO、EO、PMMA材料表面金黄色葡萄球菌的黏附数量分别为（37．9±1．5）x10^6、（49．9±2．2）x10^6、（67．4±1．6）×10^6个，差异有统计学意义（F=206．240，P=0．000），EO材料、PMMA材料表面金黄色葡萄球菌菌落计数明显高于XO材料，差异均有统计学意义（P〈0．01）。XO、EO、PMMA材料表面表皮葡萄球菌的黏附数量分别为（7．94-1．3）×10。、（10．5±1．5）×10。、（11．2±1．2）×10。个，XO材料表面表皮葡萄球菌的黏附数量明显低于PMMA材料，差异有统计学意义（q=5．060，P〈0．05），XO材料与EO材料、EO材料与PMMA材料之间表
- 王英明钱雪峰张晓峰夏蔚钟蕾孙正太夏静
- 关键词：角膜接触镜MTT比色法扫描电子显微镜
- Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原在丝素膜移植修复兔眼睑中的表达
- 2013年
- 目的研究Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原在丝素膜移植修复兔眼睑中的表达，探讨应用丝素膜行眼睑重建的愈合机制。方法将健康新西兰大白兔36只随机分为丝素膜修复组（n=18）和异体巩膜修复组（n=18），均制作右眼上睑板缺损模型，分别植入丝素膜和异体巩膜予以修复。左眼为正常对照。各组于术后第1、2、4周取手术区域上眼睑，苏木精伊红（HE）染色观察组织形态学变化，免疫组织化学法检测眼睑中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达。结果所有兔眼睑缺损均Ⅰ期愈合。HE染色结果显示，术后移植区炎性细胞浸润异体巩膜组多于丝素膜组。免疫组化染色结果显示，丝素膜组和异体巩膜组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达随着术后观察时间的增加而增加。术后各时间点Ⅰ型胶原的表达为异体巩膜组〉丝素膜组〉正常对照组（1周：F=19．586，P〈0．01；2周：F=30．041，P〈0．01；4周：F=32．587，P〈0．01）。术后各时间点Ⅲ型胶原的表达为异体巩膜组〉丝素膜组〉正常对照组（1周：F=19．220，P〈0．01；2周：F=39．414，P〈0．01；4周：F=49．680，P〈0．01）。结论丝素膜移植修复兔眼睑缺损I型胶原、Ⅲ型胶原表达较异体巩膜少，愈合反应较异体巩膜轻，可用于眼睑重建。
- 钟蕾张晓峰孙正太夏蔚夏静王英明
- 关键词：眼睑缺损丝素膜异体巩膜眼睑重建
- 物理交联再生丝素膜组织工程角膜的生物相容性研究被引量：3
- 2011年
- 背景角膜组织工程生物材料在体内应当具备透明性、一定的机械强度、生物相容性和缓慢降解的特点，丝素膜生物材料具备这些特征。目的研究采用物理交联再生丝素膜构建组织工程角膜的可行性。方法用常规培养法培养人角膜上皮细胞（CECs），将对数生长期的CECs在用家蚕丝制备的物理交联再生丝素膜上进行培养，分别于培养后24、48、72h在倒置显微镜、扫描电子显微镜下观察CECs的生长状态和形态学，并与细胞培养板培养的人CECs形态进行对照。MTT法每日检测和记录再生丝素膜培养后人CECs的增生情况，流式细胞仪检测再生丝素膜培养人CECs的细胞周期和凋亡率。将再生丝素膜4mm×3mm植入新西兰白兔右眼角膜基质层间，于术后1个月、2个月时裂隙灯下检查眼表，术后2个月摘除兔眼并制备移植眼角膜组织切片行组织病理学检查，观察再生丝素膜材料的降解情况及角膜新生血管（CNV）的生长情况。采用免疫组织化学法检测术后1个月、2个月CD34在移植眼角膜组织中的表达，并与正常眼进行对照。结果在24、48、72h3个时间点，倒置显微镜、扫描电子显微镜下见再生丝素膜培养的人CECs与细胞培养板培养法培养的人CECs形态结构无明显差别。再生丝素膜或细胞培养板培养CECs在1、2、3、4、5、6、7d各个时间点A490值比较，差异无统计学意义（F=0．641，P〉0．05）。再生丝素膜和细胞培养板培养的CECs凋亡率分别为1．8％、2．0％，细胞G2／G1期分别为1．956、1．945。再生丝素膜角膜植入后2个月时，再生丝素膜为排列整齐的胶原组织替代，角膜内新生血管和炎性细胞均少于移植后1个月。角膜免疫组织化学染色检测显示再生丝素膜植入角膜后1个月、2个月CD34表达量均明显低于Ad—VEGF165诱导的阳性对照，而与正常的角膜相比差异无统计学意义（P〉0．05）。术
- 张晓峰刘铁连杨吉成夏蔚钟蕾孙正太王英明夏静
- 关键词：角膜生物相容性角膜上皮细胞角膜移植
- 一种单色光细胞培养箱
- 一种单色光细胞培养箱，包括培养箱箱体，还包括单色光光源、孔径光阑、漫反射层，所述箱体上开设有孔洞，所述单色光光源通过所述孔洞射入所述箱体内，所述孔洞与所述单色光光源之间设置有用于调节光照度的孔径光阑，所述漫反射层设置于所...
- 夏静张晓峰付心怡
- 文献传递
- 单色光照射对体外培养的Müller细胞生长及细胞因子表达的影响被引量：5
- 2013年
- 背景 530 nm单色光照射可诱导动物产生近视.Müller细胞作为视网膜上主要的胶质细胞,参与近视的形成,但Müller细胞在单色光诱导的近视形成过程中的具体作用尚不清楚. 目的 研究530 nm单色光照射对体外培养的大鼠视网膜Müller细胞的生物学特征及近视相关细胞因子表达的影响,探讨Müller细胞在单色光诱导的近视形成中的作用.方法 在自制光照度分别为125、250、500 lx波长530 nm单色光设备的细胞培养箱中用常规细胞培养基培养永生化大鼠Müller细胞,另用无光照的常规培养法培养细胞作为对照组.细胞培养6、12、24 h后,用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法检测细胞在波长570 nm处的吸光度（A570）值；培养48 h后用流式细胞仪检测各组大鼠Müller细胞的细胞周期,比较各组G2期与G1期细胞数的比值；采用逆转录PCR（RT-PCR）法检测各组大鼠Müller细胞中转化生长因子-β1（TGF-β1）、酪氨酸羟化酶（TH）、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF） mRNA表达量的改变.采用两因素方差分析比较各组间大鼠Müller细胞随不同培养时间的变化增生值的差异,采用单因素方差分析比较各组间不同细胞周期细胞数的变化以及大鼠Müller细胞中各近视相关因子mRNA表达量的差异. 结果 530 nm单色光照射后,Müller细胞均呈典型的多角形,细胞大小均匀,边界清晰.与对照组比较,125 lx组、250 lx组大鼠Müller细胞在培养0、6、12、24 h时A570值的差异均无统计学意义（P＞0.05）,但500 lx组光照12h、24 h后细胞A570值明显低于对照组,差异均有统计学意义（P=0.013、0.001）.与对照组比较,125 lx组、250 lx组大鼠Müller细胞G2/G1细胞数比值的差异均无统计学意义（P=0.073、0.330）,500 lx组G2/G1细胞数比值明显降低,与对照组、250 lx组比较差异均有统计学意义（P=0.028、0.038）.RT-PCR检测结果显示,250 lx组TGF-β
- 夏静张晓峰夏蔚钟蕾孙正太王英明
- 关键词：单色光酪氨酸羟化酶诱导型一氧化氮合酶
- 去卵巢大鼠结膜组织中炎性因子的表达变化及干眼相关检查的评估被引量：6
- 2014年
- 背景 近年来,干眼的发生率逐年增加,其病因及眼部表现多样,研究认为女性绝经是干眼发病的高危因素之一.目前关于炎性因子参与干眼发病的病理机制越来越受到重视,探讨炎性因子,如白细胞介素（IL）和肿瘤坏死因子（TNF）,与性激素改变的关系对干眼病因学和病理机制的探讨具有重要意义.目的 建立去卵巢大鼠模型,观察性激素水平变化对结膜炎性因子表达的影响. 方法 将健康成年雌性SD大鼠20只按随机数字表法随机分为卵巢摘除组和伪手术组.卵巢摘除组大鼠行双侧卵巢摘除术,伪手术组大鼠不摘除卵巢,其他手术步骤同卵巢摘除组.两组大鼠均于术前及术后l、2、3个月行Schirmer试验Ⅰ（SⅠt）和角膜荧光素钠染色检查,评估眼表干眼症状.于术后3个月时大鼠行心脏穿刺采血,用放射免疫分析法检测两组大鼠血清雌二醇、睾酮的质量浓度.以过量麻醉法处死大鼠,收集大鼠结膜组织行苏木精-伊红染色,观察大鼠结膜上皮细胞的形态学变化,分别采用免疫组织化学法和Western blot法检测两组大鼠结膜组织中IL-17A、IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白的表达.结果 卵巢摘除组和伪手术组大鼠术后3个月时血清雌二醇质量浓度分别为（23.53±1.65） pg/L和（47.89±1.05） pg/L;血清睾酮质量浓度分别为（1.84±0.09） ng/L和（2.47±0.12） ng/L,卵巢摘除组大鼠血清雌二醇和睾酮质量浓度均明显低于伪手术组,差异均有统计学意义（t=-35.37、-12.13,P＜0.01）.两组大鼠手术前及术后l、2、3个月SⅠt结果差异均无统计学意义（F分组=0.38,P=0.55;F时间=0.13,P=0.72;F交互作用=0.39,P=0.76）;两组大鼠手术前后各时间点均未发现角膜荧光素钠着染.卵巢摘除组大鼠结膜上皮细胞较伪手术组层数增多,细胞排列紊乱.免疫组织化学法和Western blot法检测均显示,卵巢摘除组大鼠结膜组织中IL-17A表达量（A值）明显高于伪手
- 钟蕾张晓峰夏静孙正太王英明夏蔚
- 关键词：干眼性激素结膜
