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单纯疱疹病毒2型全长糖蛋白D抗原的原核表达及抗原性分析被引量：1: 2008年; 目的:构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)全长糖蛋白D(gD)基因原核表达质粒,研究其编码的蛋白质在大肠杆菌中的表达,并鉴定重组蛋白的gD抗原性。方法:提取病毒DNA,PCR扩增出gD基因,克隆于原核表达载体pGEX-4T-1,并转化大肠杆菌BL21。PCR、双酶切及测序证实插入的gD基因序列正确后,IPTG诱导表达融合蛋白GST-gD,并进行免疫学鉴定。结果:获得了gDDNA。测序鉴定表明,该序列与Gen Bank中的序列一致,gD基因已正确插入到pGEX-4T-1中。重组融合蛋白表达载体pGEX-4T-gD经IPTG诱导后能在大肠杆菌中高效表达,Western Blotting证实,该蛋白具有天然gD抗原性。结论:成功构建了融合蛋白表达载体pGEX-4T-gD,在大肠杆菌中获得了有效表达,并证实融合蛋白具有gD免疫原性。为进一步研究gD蛋白的免疫学特性,制备gD亚单位疫苗和单克隆抗体奠定了基础。; 周翠曹春来樊建勇杨慧兰; 关键词：单纯疱疹病毒属糖蛋白D 重组融合蛋白抗原性

单纯疱疹病毒II型CTL表位DNA疫苗的Th1/Th2免疫应答研究被引量：6: 2007年; 目的探讨单纯疱疹病毒II型(HSV-2)CTL表位疫苗对小鼠Th1/Th2型免疫应答的影响。方法用构建的HSV-2pVAX-gD-CTL重组质粒免疫BALB/c小鼠3次,末次免疫后第4周检测小鼠血清中gDIgG水平;MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖情况;ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清中INF-γ,IL-4水平;流式细胞仪测定小鼠CD4+,CD8+T淋巴细胞亚群。结果HSV-2pVAX-gD-CTL疫苗免疫小鼠后可以诱导脾淋巴细胞增殖及分泌INF-γ和IL-4,诱导CD4+,CD8+T细胞百分比的升高;并能刺激血清HSV-2gD特异性抗体的产生。其中pVAX-gD-CTL组在脾淋巴细胞刺激指数及其分泌INF-γ水平、CD4+,CD8+T细胞百分比升高方面均显著高于pVAX-gD对照组。结论CTL表位对单纯疱疹II型重组DNA疫苗诱导的Th1型免疫应答有促进作用。; 杨慧兰周翠关蕾赵举峰樊建勇; 关键词：CTL表位 TH1/TH2免疫应答

单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录子蛋白读码框2真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达被引量：4: 2008年; 目的:克隆单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录子蛋白读码框2(LAT ORF2)基因,构建真核表达载体并在真核细胞中表达,用于进一步研究LAT介导的HSV-2潜伏及激活感染机制。方法:以构建成功的pVAX-LAT重组质粒为模板,根据GenBank中HSV-2LATORF2基因的核苷酸序列设计引物,并在引物的5′端分别引入KpnⅠ和PstⅠ酶切位点。用PCR特异性扩增LAT基因ORF2片段,PCR产物纯化回收后经KpnⅠ、PstⅠ双酶切,再次回收后产物与同样经双酶切的pcDNA 6/myc-His B质粒进行连接,Amp抗性筛选阳性重组子,双酶切及测序鉴定连接产物。在脂质体介导下瞬时转染Vero细胞,用RT-PCR及SDS-PAGE检测其在Vero细胞中的表达。结果:重组质粒经KpnⅠ和PstⅠ双酶切获得预期大小的两条片段,测序表明ORF2正确,RT-PCR及SDS-PAGE显示转染了重组质粒的Vero细胞内有目的基因及其编码蛋白的表达。结论:成功构建了ORF2-pcDNA6/myc-His B重组质粒,并可在Vero细胞内有效表达。; 杨慧兰赵举峰樊建勇周翠黄小晏齐维; 关键词：单纯疱疹病毒2型开放读码框

白癜风患者治疗前后外周血单个核细胞Foxp3mRNA水平的检验分析: 目的:观察白癜风患者外周血单个核细胞中Foxp3mRNA表达情况,并分析其治疗前后的变化特点,为探讨CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞在白癜风发病的作用打下一定的基础。方法:采用聚合酶链反应(PCR)的方法在基因...; 吴燕虹蔡金辉廖元兴程飚杨慧兰樊建勇李勤黄晓宴赵举峰周翠陈葵

白癜风患者CD_4^+CD_(25)^+调节性T细胞水平检测被引量：9: 2008年; 目的探讨CD4+CD2+5调节性T细胞在白癜风发病的作用。方法用流式细胞仪直接免疫荧光检测进展期白癜风患者、接受NB-UVB治疗后的白癜风患者及正常人外周血CD4+CD2+5调节性T细胞的百分率。结果进展期白癜风患者CD4+CD2+5调节性T细胞百分比低于正常人,经NB-UVB治疗后的白癜风患者CD4+CD2+5调节性T细胞百分比较进展期白癜风患者明显提高,差异有显著性,与正常对照组相比差异无显著性。结论CD4+CD2+5调节性T细胞可能在白癜风的发病中起一定的作用。; 吴燕虹杨慧兰李薇樊建勇李勤张璇黄晓宴赵举峰周翠陈葵; 关键词：白癜风 CD4^+CD25^+调节性T细胞流式细胞仪

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周翠