吴盛
- 作品数：7 被引量：28H指数：2
- 供职机构：南京大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项教育部科学技术研究重点项目国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 液相色谱与串联质谱偶联在蛋白质序列分析中的应用被引量：15
- 2003年
- 本文对液相色谱与电喷雾电离串联质谱仪偶联 (LC ESI MS MS)技术分析蛋白质序列的方法进行了详细介绍。并以尿激酶原的一个酶解片段的LC ESI MS MS图谱为例 。
- 孙自勇吴盛王石泉刘建宁
- 关键词：蛋白质序列分析液相色谱多肽氨基酸序列尿激酶原
- 牛肠激酶轻链在毕赤酵母中的分泌表达、纯化和活性鉴定被引量：12
- 2004年
- 用RT＿PCR扩增肠激酶轻链(EKLC,EnterokinaseLightChain)的cDNA,并克隆至酵母分泌型表达质粒pPICZαA中.将重组质粒pPICZαA/EKLC转化至表达宿主pichiapastorisGS115,经甲醇诱导,目标蛋白EKLC表达并分泌至酵母培养基中.采用Zn＿Sepharose亲和层析一步纯化,从每升培养液可获得1.6mgEKLC,其纯度达90%以上.酶反应动力学结果表明,EKLC对小分子底物Gly＿Asp＿Asp＿Asp＿Asp＿Lys＿β＿naphthylamide的Km为(753±42)mol/L,kcat为(31.5±3.8)s-1.对硫氧化还原蛋白-脑钠素融合蛋白(Trx＿hBNP)的酶解作用显示,当酶与底物重量比大于1∶100时,经37℃保温5h后,超过75%的融合蛋白被裂解.上述结果表明,EKLC能够特异识别并水解Asp＿Asp＿Asp＿Asp＿Lys＿肽键,是一种能将融合蛋白中目标蛋白与载体蛋白裂解释放的有效工具酶.
- 孙自勇陈均勇陈新园汪晶田鹏鹏吴盛刘建宁
- 关键词：肠激酶毕赤酵母分泌表达纯化免疫印迹
- 重组人胸腺肽α1在大肠杆菌中的表达纯化和鉴定
- 2004年
- 用PCR将化学合成的人胸腺肽α1基因扩增并克隆到pMD18-T载体中，经过KpnI／SacI酶切、连接将胸腺肽基因插入到表达载体pET32b中硫氧还蛋白下游．将重组质粒转化至表达宿主BL21(DE3)中，经IPTG诱导，Zn—Sepharose亲和层析纯化以及复性处理，从每升菌液中可获得35mg硫氧还蛋白-胸腺肽α1融合蛋白．经凝血因子Xa酶切、Zn—Sepharose亲和层析以及反相高效液相色谱纯化获得3．8mg重组人胸腺肽．小鼠胸腺细胞凋亡实验表明，重组人胸腺肽能显著地抑制地赛米松诱导的小鼠胸腺细胞的凋亡，且该抑制作用与重组人胸腺肽的浓度呈剂量依赖关系．
- 吴盛陈新园陈均勇刘莉莉朱镇华孙自勇张燕刘建宁
- 关键词：胸腺肽大肠杆菌纯化酶解
- 重组人甲状旁腺激素(1-34)在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：1
- 2004年
- 将化学合成的rhPTH(1 34)基因用PCR扩增后,克隆至表达载体pET＿35b(+),使rhPTH(1 34)融合于纤维素结合结构域(CBDclos)的羧基端,并得到高效表达.融合蛋白经纤维素树脂亲和层析纯化后,经FactorXa裂解释放出rhPTH(1 34),再通过纤维素树脂亲和层析、C4反向高效液相色谱纯化得到rhPTH(1 34)纯品.每升培养液可获取3mg高纯度的rhPTH(1 34).经质谱测定,所得样品的分子量为4117.0Da,与rhPTH(1 34)理论分子量一致.
- 陈均勇陈新园孙自勇刘莉莉朱镇华汪晶吴盛王石泉刘建宁
- 关键词：甲状旁腺激素大肠杆菌纯化FACTOR
- 重组人胸腺肽α<Sub>1</Sub>在大肠杆菌中的表达纯化和活性鉴定方法
- 本发明涉及医药生物工程技术领域，是一种重组人胸腺肽α<Sub>1</Sub>在大肠杆菌中的表达纯化和活性鉴定方法。本发明用PCR将化学合成的人胸腺肽α<Sub>1</Sub>基因扩增并克隆到pMD18－T载体中，经过Kp...
- 刘建宁孙自勇陈均勇张菁吴盛
- 文献传递
- hIL-10在大肠杆菌中的表达及其生物学活性鉴定
- 2006年
- 构建了含有人白细胞介素-hIL-10(Human Interleuk in 10,hIL-10)基因的重组质粒,在大肠杆菌中的高效表达,并对其生物学活性进行了鉴定.用RT-PCR扩增hIL-10 cDNA,并插入原核表达载体PET-32b.将重组质粒转入BL21(DE3)感受态细胞,在37℃用IPTG诱导hIL-10表达.表达的重组蛋白经复性纯化后,用夹心ELISA法检测其对外周血单核细胞(PBMC)合成IFN-γ的抑制作用.重组质粒PET-32b/hIL-10的DNA序列分析显示,克隆的DNA序列和文献报道的hIL-10 cDNA序列一致.SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为18 000.活性测定结果显示,重组蛋白能显著抑制PBMC合成IFN-γ.这表明构建的PET-32b/hIL-10可以在大肠杆菌中高效表达,经复性和纯化后,获得了具有高纯度和活性的hIL-10.
- 王旻东孙自勇陈俊勇吴盛智强刘建宁
- 关键词：克隆大肠杆菌生物学活性夹心ELISA
- 低剂量活骨髓瘤、转染GM-CSF基因的骨髓瘤冻干粉诱导的抗肿瘤免疫及胸腺肽α<,1>的原核表达纯化与活性鉴定
- 根据世界卫生组织和我国卫生部的统计，恶性肿瘤正严重的威胁着人类的健康，我国的情况也不容乐观。尽管健康的生活方式被倡导以及一些有效的治疗手段被研发出来，但是现状距离人类攻克肿瘤的目标还很遥远。
通过对癌基因的研究...
- 吴盛
- 关键词：骨髓瘤抗肿瘤免疫胸腺肽Α1原核表达
- 文献传递
