吴倩
- 作品数：17 被引量：47H指数：4
- 供职机构：云南师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省应用基础研究基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 魔芋寡糖的膜分离及产物组成分析被引量：4
- 2020年
- 本文采用高速离心、无机陶瓷微孔滤膜、超滤纳滤对250 g/L(w/v)的高浓度魔芋精粉的酶解液进行分离、过滤、浓缩、制备魔芋寡糖,分析了甘露聚糖酶水解催化高浓度魔芋粉形成的具有一定粘性的寡糖溶液,对过滤通量、寡糖的回收率和寡糖产物组成的影响。结果表明,150 g/L的寡糖混合物通过超滤膜过滤,寡糖回收率能达到86%以上;组合纳滤膜能使寡糖混合物进行有效浓缩,可以去除溶液中的金属离子、有机酸小分子和溶剂水,提高寡糖溶质纯度。100~5000 Da的魔芋寡糖混合物通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)分析发现,寡糖的构成比例中三糖为最高单一组分,含量为21.5%,二糖~十四糖的总含量达到90%,十五糖-二十糖的含量为9%。因此,采用膜过滤技术用于魔芋寡糖分离、提纯和浓缩工艺是可行的。
- 唐湘华杨云娟杨云娟慕跃林吴倩慕跃林
- 关键词：膜分离过滤通量
- 粪便微生物宏基因组来源GH1β-葡萄糖苷酶的重组表达及酶学性质被引量：1
- 2021年
- 【背景】β-葡萄糖苷酶是一类重要的纤维素分解酶类。目前较多可培养微生物来源的β-葡萄糖苷酶(Bgl)存在热稳定性和酸碱稳定性差及作用范围窄的问题。【目的】从滇金丝猴粪便微生物宏基因组中挖掘新型β-葡萄糖苷基因,异源表达并研究其酶学性质,为食品等领域提供新型酶资源。【方法】从粪便微生物宏基因组出发,扩增和异源表达β-葡萄糖苷酶基因BglRBS_(2)6和BglRBS_(9),并进行酶学性质研究。【结果】获得GH1家族重组β-葡萄糖苷酶BglRBS_(2)6和BglRBS_(9),分子量分别为60 kD和50 kD。BglRBS_(2)6的最适作用条件为pH 6.0、45℃;BglRBS_(9)的最适作用条件为p H 5.0、40°C。Bgl RBS_(2)6和Bgl RBS_(9)的Km分别为(0.6816±0.1642)μmol/L和(3.3170±0.8714)μmol/L。BglRBS_(2)6具有较好的酸碱耐受性,在pH 5.0–6.0下处理1 h,剩余酶活大于110%;pH 7.0-8.0范围内,剩余酶活仍然保持在100%以上。此外,蔗糖对BglRBS_(2)6和BglRBS_(9)有不同程度的激活,当反应体系中加入20%(质量体积分数)蔗糖,BglRBS_(2)6酶活力可提高至140%;10%(质量体积分数)蔗糖可将BglRBS_(9)酶活力提高至180%。此外,BglRBS_(2)6具有较好的NaCl耐受性和稳定性,其在37°C、2.5 mol/L的NaCl下处理1 h后保留80%活性。【结论】从滇金丝猴粪便微生物宏基因组中获得2个新型β-葡萄糖苷酶基因BglRBS_(2)6和BglRBS_(9),并成功在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。BglRBS_(2)6和BglRBS_(9)具有较好的pH稳定性和蔗糖耐受性,在食品、发酵等行业具有潜在应用价值。
- 范琴杨金茹唐湘华黄遵锡黄遵锡吴倩杨云娟
- 关键词：滇金丝猴Β-葡萄糖苷酶
- 松口蘑的活性成分及其研究进展
- 2023年
- 松口蘑是世界上珍稀名贵的食用菌和药用菌,其活性成分(如松茸多糖、多肽、松茸醇、萜类和甾类等)已被证实在抗氧化、抗肿瘤、调节免疫、抗菌和皮肤护理等方面具有良好作用,在膳食营养补充剂、化妆品和药物开发等领域具有巨大潜力。然而,目前松口蘑在国内的消费方式仍以鲜食和初加工产品为主,存在精加工程度低等问题。本文主要综述了松口蘑活性成分及其研究进展,并讨论了其在商业化应用的建议,旨在为松口蘑的国内深加工利用提供理论参考,为带动乡村振兴发展提供科学依据。
- 黄振帝苗华彪裴丁玉唐湘华吴倩吴倩
- 关键词：松口蘑生物活性活性成分食用菌
- Penicillium sp.JF09酸性果胶酶的发酵条件、酶学性质及其在苹果汁澄清中的应用潜力研究被引量：4
- 2013年
- 对一株产酸性果胶酶的菌株Penicillium sp.JF09的发酵条件、酶学特性及其在苹果汁澄清中的应用潜力进行研究。该菌株发酵产果胶酶的培养基优化后,碳源为1.0%的柚子皮粉,氮源为0.5%的蛋白胨,起始pH值为5.5,发酵时间75~147h,产果胶酶酶活力为16.5U/mL,比活力为199.5U/mg。该果胶酶最适反应温度为60℃,在10~70℃范围内具有活性;最适反应pH值为5.0,酶在pH3.0~5.5范围内活性保持83%以上并在pH3.0~8.0范围内保持稳定;10mmol/L的Hg2＋、Pb2＋、Cu2＋、Fe2＋、Ag＋及SDS对该酶有不同程度的抑制作用,10mmol/L的Mg2＋、Mn2＋对该酶有略微的促进作用,不同浓度的Ca2＋对酶活力有较大影响（最适浓度为0.2mmol/L）。在低温和高温下（10~60℃）添加JF09果胶酶对鲜榨苹果汁都有显著澄清作用,反应1h后澄清率可达88.8%。
- 吴倩周峻沛唐湘华李俊俊董岩岩黄遵锡
- 关键词：发酵培养基优化酶学特性苹果汁澄清
- 通窍活血汤含药脑脊液对OGD/R损伤大鼠BMECs的保护作用被引量：7
- 2020年
- 目的:探讨通窍活血汤含药脑脊液对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的保护作用及潜在机制。方法:通过酶消化法提取原代BMECs,并将细胞随机分为6组,分别为正常组,OGD/R组,通窍活血汤(TQHXT)组(20%),尼莫地平(NMDP)组(10μmol·L^-1),卡博替尼(BMS)组(1μmol·L^-1)和合用药组。除正常组外,其余各组细胞在氧糖剥夺2 h后迅速复糖复氧24 h进行OGD/R造模并分组给药。采用细胞免疫荧光染色法鉴定BMECs,观察OGD/R损伤大鼠BMECs的形态学和超微结构改变并检测细胞跨膜电阻(TEER)值变化。用试剂盒检测细胞内一氧化氮(NO)水平、乳酸脱氢酶(LDH)活性、活性氧(ROS)荧光强度和组织型纤溶酶原激活因子(tPA)含量。采用流式细胞术检测细胞内钙离子浓度及细胞凋亡,观察血管新生标记因子CD34的表达,用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中紧密连接蛋白(ZO-1),血管内皮生长因子(VEGF),黏着斑激酶(FAK)和桩蛋白(Paxillin)蛋白的表达情况。结果:与正常组比较,OGD/R组细胞皱缩、变圆,细胞TEER值和细胞中ZO-1蛋白表达显著降低,细胞中NO,LDH及ROS水平显著升高,tPA含量显著降低,细胞中钙离子浓度和细胞凋亡显著增加,细胞中CD34有所表达,VEGF,FAK和Paxillin蛋白表达显著升高(P<0.01);与OGD/R组比较,TQHXT组细胞损伤明显改善,细胞TEER值和细胞中ZO-1蛋白表达显著升高,细胞中NO,LDH及ROS含量显著降低,tPA含量显著升高,细胞中钙离子浓度和细胞凋亡显著减少,细胞中CD34表达增加,VEGF,FAK和Paxillin蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:通窍活血汤含药脑脊液对OGD/R损伤大鼠BMECs具有保护作用,该保护作用可能是通过VEGF/VEGF受体2(R2)/FAK/Paxillin信号通路促进血管生成来发挥作用。
- 戴纪恒吴思鹏汪宁汪宁吴倩
- 关键词：通窍活血汤含药脑脊液血管新生因子
- “蛋白质与酶工程”教学的课程思政探索与实践被引量：12
- 2021年
- 蛋白质与酶工程是生物技术专业的核心、必修课程,在专业人才培养体系中具有重要地位。文中以教育部颁布的《高等学校课程思政建设指导纲要》为依据、结合专业及课程特色,科学设定教学目标,深入挖掘课程思政教育元素,从融入内容、方法路径及评价等方面进行了课程思政教学改革的探索和实践。通过精心开展教学设计,利用对分课堂、以学生为中心,从讲故事、谈生活、说案例、议热点、读文献、做训练入手,激发并培养学生的科学精神、公民品格、全球视野、生态文明、法治意识、家国情怀和文化自信素养,促进课程思政教育有机融入教学全过程,实现课程育人目标的同时推动教学卓越。
- 许波吴倩韩楠玉唐湘华黄遵锡
- 关键词：教学设计
- 地衣芽孢杆菌B38对产气荚膜梭菌的抑菌性能研究
- 2023年
- 试验旨在探究地衣芽孢杆菌38(Bacillus licheniformis 38,B38)对产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,CP)的抑菌性能,以期为新型替抗产品的开发提供基础。采用抑菌圈法对48株芽孢杆菌经过两次筛选,获得一株对CP抑菌效果最好的芽孢杆菌,测定其最小抑菌效价、抑菌产物生成曲线、抑菌谱和代谢产物的稳定性,并通过硫酸铵沉淀法对抗菌物质进行粗提取。结果表明:B38对CP的抑菌圈直径最大可达31.14 mm,其发酵上清液的最小抑菌效价为64 AU/mL,主要对革兰氏阳性菌发挥抑菌作用;B38代谢产物的抑菌活性在6~<12 h呈指数增长,在12~<24 h保持稳定;B38代谢产物经胃蛋白酶、胰蛋白酶、蛋白酶K和过氧化氢酶处理后,抑菌活性均大于87.78%,对温度和pH具有良好的耐受性;B38代谢产物中的抑菌物质可以被80%硫酸铵完全沉淀,通过该方法获得的抗菌粗品的MIC为6.25 mg/mL。试验通过抑菌圈法筛选得到了一株对CP具有优良抑菌性能的菌株B38,其发酵产物对蛋白酶、温度和pH具有优良的耐受能力。
- 杨梦瀚苗华彪宋婧楠赵香帅陈紫娴吴倩黄遵锡
- 关键词：芽孢杆菌地衣芽孢杆菌产气荚膜梭菌耐受抑菌性能
- 滇金丝猴粪便微生物来源的β-半乳糖苷酶基因的表达及酶学性质被引量：4
- 2019年
- [目的]对滇金丝猴粪便微生物来源的β-半乳糖苷酶进行异源表达和纯化,并研究其酶学性质。[方法]从滇金丝猴粪便微生物的宏基因组中克隆出一个β-半乳糖苷酶基因galRBM20_1,对该基因进行异源表达和酶学性质分析。构建含有T7强启动子的pEASY-E2-galRBM20_1质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后进行酶学性质研究。[结果]滇金丝猴粪便来源的β-半乳糖苷酶(galRBM20_1)最适pH为5.0,在pH 4-7之间能保留70%及其以上的活性。最适温度为45℃,在37℃和45℃下耐受1 h,酶活不变。特别的是,该酶具有良好的NaCl稳定性,经1-5 mol/L的NaCl作用1 h后,相对酶活均能超过初始酶活:当NaCl的作用浓度为4 mol/L时,β-半乳糖苷酶相对酶活最高(146%);当NaCl的作用浓度为5 mol/L时,β-半乳糖苷酶的相对酶活仍达到135%。[结论]本研究从滇金丝猴粪便微生物的宏基因库中克隆得到β-半乳糖苷酶基因galRBM20_1,并成功在大肠杆菌BL21(DE3)表达,首次从动物胃肠道宏基因组中获得具有耐盐和转糖基产Galactooligosaccharides(GOS)性能的β-半乳糖苷酶。该酶具有良好的耐盐性,和较广的pH作用范围,使其在食品、生物技术领域和环保方面的发展具有良好的应用价值。
- 张文洪杨雁霞杨正凤黄遵锡李俊俊李俊俊杨云娟唐湘华慕跃林杨云娟许波
- 关键词：滇金丝猴Β-半乳糖苷酶
- 体外法评估饲用蛋白酶酶学性质、稳定性和酶解效果被引量：6
- 2020年
- 试验旨在探究不同饲用蛋白酶酶学性质、稳定性和酶解效果的差异性。通过福林法研究市场上8种饲用蛋白酶的酶学特性,模拟饲料制粒温度、猪胃肠消化液环境对其活性的影响以及蛋白酶对饲料原料的酶解情况。结果表明,不同饲用蛋白酶酶学特性差异明显;酸性蛋白酶不耐受饲料高温制粒。模拟猪胃液环境对蛋白酶酶活影响较大,尤其是中性、碱性蛋白酶无法有效通过猪胃液环境;模拟猪小肠液环境对蛋白酶稳定性影响较小。蛋白酶对豆粕的酶解效果最好,其次是鱼粉和菜粕,对羽毛粉几乎不能水解;不同蛋白酶对饲料原料的水解效果与模拟胃肠道环境的耐受性一致;其中酸性蛋白酶的水解效果优于中性、碱性蛋白酶。研究表明,不耐受高温制粒和动物胃液环境是限制蛋白酶应用效果的关键因素。
- 苗华彪胡懋吴倩
- 关键词：酶学特性体外试验
- 粪便微生物宏基因组来源的热稳定性邻苯二酚1,2-双加氧酶异源表达及酶学性质被引量：5
- 2017年
- 【目的】克隆倭蜂猴粪便微生物宏基因组的邻苯二酚1,2-双加氧酶基因cat PLCgl,并对该酶进行异源表达及酶学特性研究。【方法】利用宏基因组高通量测序技术获得cat PLCgl,并对其氨基酸序列进行分析。将cat PLCgl重组到载体p EASY-E2中并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达,研究其酶学性质。【结果】cat PLCgl全长852 bp,G+C含量48%,编码283个氨基酸,理论分子量为33.56 k D。重组Cat PLCgl酶学性质分析显示最适作用p H为7.0,其中在p H 7.0–10.0范围内处理1 h后,酶活剩余90%以上;最适作用温度为40°C,在25°C和40°C条件下稳定性较好,耐受210 h酶活性几乎不变。重组酶在最适条件下的动力学参数K_m、V_(max)和k_(cat)分别为24.9μmol/L、8.3 mmol/(min·g)和13.7 s^(-1);Fe^(2+)、Hg^(2+)、Cu^(2+)、Triton X-100、SDS、Ag+强烈抑制该酶活性,而其它金属离子及有机试剂影响较小。【结论】从倭蜂猴粪便微生物宏基因组中克隆得到邻苯二酚1,2-双加氧酶基因cat PLCgl,并对重组Cat PLCgl酶学性质进行研究,该酶具有较好的热稳定性和耐碱性,在降解环境中的邻苯二酚和生产顺,顺-己二烯二酸方面具有应用潜力。
- 邓梦杨正凤黄遵锡戴利铭沈骥冬李俊俊唐湘华慕跃林周峻沛丁俊美韩楠玉吴倩许波
- 关键词：异源表达热稳定性
