吕伟华
- 作品数：51 被引量：90H指数：7
- 供职机构：中国水产科学研究院黑龙江水产研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项中国水产科学研究院基本科研业务费专项基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学经济管理环境科学与工程更多>>
- 鲤CCAAT增强子结合蛋白α基因的克隆与时空表达特征
- 2020年
- CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)是脂肪细胞分化中起重要调控作用的转录因子。本研究利用逆转录PCR和RACE技术获得了体质量200~250 g鲤Cyprinus carpio C/EBPα基因全长cDNA序列为1463 bp,开放阅读框861 bp,编码286个氨基酸。C/EBPα蛋白质相对分子量32.5 KD,理论等电点(PI)为7.02。氨基酸同源性分析结果显示,鲤C/EBPα基因与斑马鱼Danio rerio同源性最高为93.36%,与小鼠同源性仅为52.47%。系统进化树结果显示,鲤C/EBPα氨基酸序列与鲫Carassius auratus聚为一支,同源性最高。实时荧光定量PCR检测表明,C/EBPα基因在成体鲤腹腔脂肪组织中表达量最高,肠组织次之,腹部肌肉中表达量最低;胚胎发育期,C/EBPα基因在心跳期表达量最高,七体节期次之,八细胞期最低。鲤C/EBPα基因序列的获得及表达特征研究为进一步深入研究鲤脂肪细胞分化及脂肪发育分子调控机制奠定了基础。
- 孙志鹏吕伟华党红阳曹顶臣匡友谊鲁翠云郑先虎
- 杂交鲟“鲟龙1号”(Huso dauricus♀×Acipenserschrenckii♂)atp1α1与atp1β1基因的克隆、序列分析及碱胁迫下鳃的表达特征
- 2023年
- 为探究碳酸盐碱度胁迫下杂交鲟“鲟龙1号”(Huso dauricus♀×Acipenser schrenckii♂)Na+/K+-ATP酶的分子响应机制,在水温(17±2)℃下,将体长(133.17±16.75)mm、体质量(12.43±3.99)g的30日龄“鲟龙1号”幼鱼饲养在曝气自来水[测定碱度为(3.16±0.03)mmol·L^(-1)(对照组,C组)]和用99%纯度的食用小苏打配置的碱度分别为(7.61±0.12)mmol·L^(-1)(T1组)、(12.10±0.05)mmol·L^(-1)(T2组)和(15.30±0.85)mmol·L^(-1)(T3组)的曝气自来水中。养殖到第30 d时,采集对照组杂交鲟的鳃、皮肤、肌肉、心脏、肝脏、脾脏、头肾、肠道、眼、胃和肾脏和3个试验组的鳃,基于“鲟龙1号”的转录组数据,筛选差异表达基因atp1α1(Na+/K+-ATP酶α1亚基)与atp1β1(Na+/K+-ATP酶β1亚基),采用RACE技术克隆获得atp1α1基因与atp1β1基因的c DNA全长序列并分析其序列信息,采用荧光定量PCR技术分析了组织表达差异和碱度暴露鲟龙1号鳃的表达特征。结果显示,atp1α1基因的c DNA全长序列为3 407 bp,编码1 027个氨基酸(NKAα1),atp1β1基因的c DNA全长序列为2 170 bp,编码304个氨基酸(NKAβ1)。NKAα1和NKAβ1的二级结构主要为α-螺旋与无规则卷曲,有多个跨膜区,潜在磷酸化位点均为丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)。同源比对结果发现,“鲟龙1号”的NKAα1和NKAβ1均与小体鲟(Acipenser ruthenus)的亲缘关系最近。荧光定量PCR结果显示,atp1α1基因在鳃中高表达,显著高于其他组织(P<0.05);atp1β1基因在心脏、肝脏、鳃和肠道中高表达;atp1α1基因在鳃的表达水平随碱度上升呈先上升后下降趋势,当碱度为7.61 mmol·L^(-1)时表达水平达最高;碱度高于12.10 mmol·L^(-1)时,atp1α1基因与atp1β1基因的表达水平均低于正常。综上所述,“鲟龙1号”的atp1α1基因与atp1β1基因分别编码NKA蛋白的重要亚基,参与了碳酸盐碱度应答,本研究为揭示鲟的耐盐碱分子调控机制提供理论基础。
- 杨合霖刘霞飞张颖吕伟华王念民丰超杰徐伟曹顶臣
- 关键词：碱胁迫克隆
- 立体层叠式高效苗种养殖装置
- 本实用新型涉及鱼类养殖技术领域，提供立体层叠式高效苗种养殖装置，包括养殖箱、管道和曝气机，养殖箱的一侧设置有管道，养殖箱的另一侧设置有曝气机，养殖箱顶端的外侧设置有堆叠结构，养殖箱内部的底端设置有辅助结构，养殖箱内部的一...
- 张永泉马凯佟广香吕伟华
- 文献传递
- 肌间刺缺失对斑马鱼骨骼发育的影响被引量：10
- 2020年
- 利用斑马鱼(Danio rerio)野生型与肌间刺完全缺失突变型个体,从骨骼染色和骨骼发育相关基因表达两方面,初步评价了肌间刺缺失对斑马鱼骨骼发育的影响。通过骨骼染色对比观察了两种肌间刺表型个体受精后8dpf(days post fertilization, dpf)到56dpf的骨骼发育情况,结果显示,两种肌间刺表型除肌间刺外,其他骨骼发育基本同步。此外,通过qRT-PCR实验检测分析了6个骨骼发育相关基因(bmp2a、bmp4、smad1、smad4a、runx2a和sp7)在不同肌间刺表型5个胚胎发育时期(3hpf囊胚期、6hpf原肠胚期、12hpf体节期、24hpf咽囊期和72hpf孵化期)和5个胚后生长阶段(15、30、45、60和75dpf)的表达情况。结果显示:在胚胎发育时期,野生型和突变型个体中bmp2a、bmp4、smad1、smad4a基因和突变型个体中sp7基因的表达均呈现先升后降的变化趋势,且在体节期达到最高表达水平;野生型和突变型个体中runx2a基因和野生型个体中sp7基因则表现为逐渐上升的趋势。6个基因在囊胚期和原肠胚期表达量无显著差异, bmp2a的表达水平在体节期、咽囊期和孵化期无显著差异,野生型个体bmp4、smad1、smad4a、runx2a基因在体节期、咽囊期和孵化期的表达水平明显高于突变型,而sp7基因则表现为突变型明显高于野生型。胚后发育阶段6个基因在5个生长阶段均呈现逐渐下降的趋势,且在两种肌间刺表型间其表达仅在个别时期差异显著。综上所述,肌间刺的缺失对斑马鱼骨骼发育表现型无显著影响,只在胚胎发育时期影响骨骼相关基因表达水平的变化;结合骨骼染色结果,推测肌间刺缺失对斑马鱼骨骼发育无显著影响。
- 杨建杨建佟广香郑先虎孙志鹏吕伟华孙效文
- 关键词：斑马鱼野生型突变型骨骼发育
- 施氏鲟促性腺激素α亚基的克隆、序列分析及表达调控被引量：1
- 2020年
- 为了解促性腺激素α基因(GtHα)在施氏鲟Acipenser schrenckii性腺分化过程中的表达、分布及调控作用。采用同源性克隆和cDNA末端快速扩增(RACE)方法从施氏鲟垂体中克隆了GtHα基因的全长cDNA序列。通过腹腔注射不同剂量(1μg/kg、3μg/kg和5μg/kg)的LHRH-A,应用RT-qPCR方法检测在注射LHRH-A后不同时段(1 d、3 d、5 d、7 d)施氏鲟垂体和性腺中GtHα基因的表达变化,并研究GtHα在心、肝、脾、肾、垂体等不同组织中的表达分布。结果表明:GtHα基因的全长cDNA序列中包含54 bp的5'非编码区、348 bp的开放阅读框和243 bp的3'非编码区。该基因共编码115个氨基酸,蛋白质二级结构主要以α-螺旋和无规则卷曲为主,属于含有信号肽、跨膜结构且分泌到细胞外的亲水性蛋白。氨基酸同源性和进化分析表明,施氏鲟与中华鲟Acipenser sinensis GtHα序列一致性最高,与鲟科鱼类亲缘关系最近。实时荧光定量PCR检测发现,GtHα基因的表达具有组织特异性,在性腺、垂体中的表达量较高,显著高于肌肉、肠道等组织(P<0.05)。不同浓度LHRH-A注射表明:与对照组相比,LHRH-A抑制了施氏鲟垂体组织中GtHα基因的表达量;与垂体中GtHα的表达模式不同,各浓度组中性腺组织的GtHα基因则呈先升高后降低的表达趋势,其中注射浓度为3μg/kg组的GtHα表达量,在注射后第3 d达最大值,显著高于其他组(P<0.05)。综上表明:GtHα基因的表达具有组织特异性,LHRH-A可通过HPG轴调控GtHα的表达,参与施氏鲟的早期性腺发育。
- 高雪吕伟华马波王念民韩世成张颖
- 关键词：施氏鲟基因克隆
- 浮球生物过滤器螺旋自动反冲装置及反冲方法
- 浮球生物过滤器螺旋自动反冲装置及反冲方法。目前浮球生物过滤器的反冲都是采用人工反冲的方式，在过滤器内放有浮球然后放水对浮球进行冲洗，冲洗过后需要停机进行排水，然后进行下一批的浮球的冲洗。本发明组成包括：过滤器（4），过滤...
- 张永泉蒋博轩陈帅蒋树义尹家胜佟广香吕伟华杨建
- 文献传递
- 一种细鳞鲑早期幼鱼高密度培育方法
- 一种细鳞鲑早期幼鱼高密度培育方法，本发明涉及一种细鳞鲑早期幼鱼的培育方法。本发明解决了现有细鳞鲑早期幼鱼养殖密度低、养殖效率低下、病害发生率高、成活率低、生长缓慢的问题。方法：细鳞鲑早期幼鱼高密度培育方法：将细鳞鲑早期幼...
- 刘洋韩世成霍堂斌刘红柏常洪淼马淑伟吕伟华佟广香吴文化王常安陆绍霞
- 一种鲟鱼用受精卵搅拌装置
- 一种鲟鱼用受精卵搅拌装置，属于鱼类繁殖设备技术领域。框架水平设置，框架内水平固定有底板，框架的底面上固定有多个定向脚轮，推手支架与框架一端固定连接，底板上设置有多个小型电动旋转盘，受精桶的桶壁底部设有通孔，通孔与安装有开...
- 张颖马波李雷王念民吕伟华
- 文献传递
- 鲤lipea基因表达的时空特征及与脂肪沉积相关性分析被引量：1
- 2019年
- 本文旨在克隆鲤(Cyprinus carpio)激素敏感性脂肪酶a (hormone-sensitive lipase a, lipea)基因,探究其时空表达特征及其与脂肪沉积的关系,以期为鲤脂肪沉积分子调控机制研究奠定理论基础。本实验采用RACE技术克隆获得鲤lipea基因,其cDNA全长为3379 bp,包括230 bp的5′非翻译区(5′-UTR)、1067 bp的3′非翻译区(3′-UTR)和编码693个氨基酸的开放阅读框。多序列比对显示,鲤lipea与斑马鱼(Danio rerio)、牙鲆(Paralichthys olivaceus)和虹鳟(Oncorhynchusmykiss)的氨基酸序列相似性分别为88.17%、64.94%和63.35%,不同物种间序列差异主要集中在C-端的多肽序列上。蛋白质结构分析显示该蛋白含有3个功能域分别具有脂肪酶活性、乙酰基水解酶活性和水解酶活性。应用实时荧光定量PCR技术分析了lipea基因在鲤各组织、不同发育时期以及脂肪含量极端差异个体的肌肉和脂肪组织中mRNA表达量的变化。结果显示, lipea在各组织中均有表达,腹腔脂肪中相对表达量最高,其次是腹部肌肉,血液中最少。随着胚胎的发育, lipea的表达水平呈现下降趋势, 8细胞期表达量最高,其次是囊胚晚期,开口期最少。lipea表达量与背部肌肉脂肪含量呈正相关,但差异不显著(P>0.05),与腹腔脂肪量呈负相关,且差异极显著性(P<0.01),推测lipea基因对鲤腹腔脂肪沉积可能具有抑制作用。本实验结果可为进一步解析鲤lipea基因的功能和基因调控脂肪沉积分子机制研究提供参考。
- 党红阳吕伟华孙志鹏匡友谊曹顶臣孙效文郑先虎
- 关键词：激素敏感性脂肪酶基因克隆基因表达脂肪沉积
- 肌间刺缺失突变对斑马鱼胚胎发育过程中肌肉发育的影响被引量：7
- 2019年
- 为阐明肌间刺缺失对斑马鱼(Danio rerio)胚胎发育时期肌肉发育的影响,采用qRT-PCR的方法,检测分析了斑马鱼不同肌间刺表型间5个肌肉特异性基因(mef2、myf5、myod、myog和sox6)在囊胚期(3hpf,hourspost fertilization)、原肠胚期(6 hpf)、体节期(12 hpf)、咽囊期(24 hpf)和孵化期(72 hpf)5个发育时期的表达情况,对比分析了肌间刺缺失对斑马鱼胚胎发育过程中肌肉发育特异性基因的时序表达差异和肌肉发育的影响,以及对受精率、孵化率和畸形率的影响。结果显示, 5个特异性基因在肌间刺缺失突变型与野生型斑马鱼各发育时期的表达量无显著性差异(P>0.05)。其中,myf5、myod基因在原肠胚期表达量升高,在体节期和咽囊期开始逐步下降;mef2、myog和sox6基因在囊胚期和原肠胚期表达量很低,在体节期和咽囊期表达量迅速升高,并在孵化期开始下降。此外,受精率、孵化率和畸形率的统计结果显示,肌间刺突变型与野生型间亦无显著性差异(P>0.05)。综上,推测肌间刺的缺失对斑马鱼胚胎发育及胚胎发育过程中肌肉的发育没有影响。
- 杨建杨建佟广香郑先虎孙志鹏吕伟华孙效文
- 关键词：斑马鱼胚胎发育
