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成人骨髓间充质干细胞的体外分离培养与鉴定被引量：10: 2010年; 目的对成人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）进行体外分离培养与鉴定，研究其生物学特性。方法将密度梯度离心法获得的单个核细胞，用贴壁培养法分离纯化、扩增获得大量hBMSCs，观察细胞形态，分析细胞生长特性，并经流式细胞仪检测细胞表面抗原、细胞周期，和进行成骨诱导鉴定。结果经密度梯度离心和贴壁培养法可成功分离纯化、扩增得到大量hBMSCs，其细胞形态、分化特性和表型均符合干细胞特点，在特定培养条件下能向成骨细胞分化。结论骨髓间充质干细胞分离扩增容易，细胞增殖能力和成骨性能好，是骨组织工程理想的种子细胞。; 郭奇峰刘青华徐绘华向帅梁俊波温世锋; 关键词：骨髓间充质干细胞种子细胞组织工程骨

成骨诱导双基因共表达腺病毒载体的构建被引量：2: 2011年; 目的探讨用一条Link序列T2A连接骨形态发生蛋白-2（BMP-2）基因与碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）基因构建含目的基因的腺病毒载体的可行性。方法先从cDNA中扩增得到全长BMP-2和bFGF基因片段．再接于Link序列T2A的两端，通过T2APeptide的互补，延伸得到BMP2-T2A—bFGF的全长PCR产物，利用上游引物的BglⅡ酶切位点和下游引物的EcoRV酶切位点将其插入到pShuttle—IRES载体中，酶切、测序鉴定；利用同源重组技术将目的基因表达框从穿梭质粒转移到腺病毒载体，鉴定阳性克隆；将PacI线性化后的腺病毒载体转染到293A细胞，观察GFP表达，PCR鉴定后进行大量扩增，并用CsCl梯度离心法进行纯化；测量A260计算病毒感染滴度。结果克隆得到的BMP-2与bFGF基因测序正确，经BglⅡ和EcoRV双酶切得到的BMP2-bFGF2个基因全长序列完全克隆到穿梭质粒和重组腺病毒载体质粒中；转染293A细胞2周后观察到明显的GFP聚集表达，即病毒包装成功，扩增纯化后滴度为3．6×10^11 VP／ml。结论经酶切鉴定BMP-2与bFGF双基因共表达腺病毒载体构建成功。; 徐绘华郭奇峰厉新妍刘青华向帅娄盼; 关键词：骨形态发生蛋白-2 碱性成纤维细胞生长因子双基因共表达腺病毒

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向帅