卫娜
- 作品数：10 被引量：32H指数：3
- 供职机构：山西医科大学第二医院更多>>
- 发文基金：山西省科技攻关计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- TNFR2突变载体的构建及其对巨噬细胞炎症反应的影响
- :探讨肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)196位基因多态性(T突变为G)对巨噬细胞TNF\TNFR信号通路介导炎症反应的相关性.方法:运用基因重组技术和定点突变技术构建真核表达载体pcDNA6.0-TNFR2196MET和...
- 卫娜边云飞
- 关键词：基因多态性巨噬细胞炎症反应
- 肿瘤坏死因子受体2编码基因重组质粒的构建及意义
- 2012年
- 目的 构建真核表达质粒pcDNA6.0-TNFR2^196MET和pcDNA6.0-TNFR2^196ARG.方法 人工合成TNFR2196MET目的 片段,与pMD18-T simple 载体连接形成克隆载体,再通过设计突变引物,PCR定点突变扩增出含有突变位点的质粒,转化到肠埃希菌感受态细胞JM109中,通过氨苄青霉素抗药性筛选出成功转化的阳性克隆,并进行扩增.抽提质粒进行测序鉴定,得到pMD18-T simple-TNFR^2196ARG.双酶切pMD18-T simple-TN-FR^2196MET、pMD18-T simple-TNFR^2196ARG及pcDNA6.0,将TNFR^2196MET、TNFR^2196ARG插入pcDNA6.0线性质粒,即构建成pcDNA6.0-TNFR^2196MET和pcDNA6.0-TNFR^2196ARG真核表达质粒,转化到Ecoli感受态中,筛选阳性克隆行菌液PCR和双酶切及测序鉴定.结果 酶切鉴定和测序分析验证TNFR2基因196MET和196ARG表达载体构建成功.结论 成功构建表达载体为下一步心血管疾病研究奠定了实验基础.
- 卫娜白瑞车星星王泽慧肖传实边云飞
- 关键词：突变心血管疾病
- 脂联素受体在正常SD大鼠乳鼠心肌细胞的分布和表达
- 2012年
- 目的通过体外培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,研究脂联素受体1(AdipoR1)、脂联素受体2(AdipoR2)及T-钙黏蛋白(T-cadherin)三种脂联素受体在大鼠乳鼠心肌细胞上的分布和表达。方法采用酶消化法原代培养乳鼠心肌细胞,通过α-肌动蛋白免疫荧光法对原代培养的心肌细胞进行鉴定,并在倒置相差显微镜下观察细胞生长状态。选用原代培养96h的单层心肌细胞进行实验,使用RT-PCR和细胞免疫组织化学方法检测AdipoR1、AdipoR2、T-cadherin的mRNA和蛋白在心肌细胞中的表达情况。结果在SD大鼠乳鼠心肌细胞上均检测到了AdipoR1、AdipoR2、T-cadherin的mRNA和蛋白表达,其中以AdipoR1和T-cad-herin的mRNA和蛋白表达量高,与AdipoR2的表达量相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论脂联素受体1、脂联素受体2和T-钙黏蛋白,三种脂联素受体在SD大鼠乳鼠心肌细胞上均有表达,并以脂联素受体1和T-钙黏蛋白的表达为主,脂联素受体2表达量较少。
- 王敏柴颖儒肖传实卫娜边云飞
- 关键词：心肌细胞脂联素受体1脂联素受体2
- 脂联素上调心肌细胞缺氧/复氧损伤后T-钙黏蛋白的表达被引量：4
- 2012年
- 本文旨在研究脂联素(adiponectin, APN)对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)损伤的心肌细胞T-钙黏蛋白(T-cadherin,T-cad)表达的影响。采用酶消化法原代培养Sprague-Dawley (SD)乳鼠心肌细胞,随机分为:正常对照组、H/R组、H/R+脂联素(3, 10, 20, 30 μg/mL)组。H/R组置缺氧环境(高浓度N2饱和过的缺氧液)中培养3 h后, 再置于复氧环境(纯氧饱和过的复氧液)中培养1 h。APN处理组先用不同浓度APN预处理24 h后中随后处理同H/R组。用化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)的释放,通过流式细胞术和脱氧核糖核苷酸缺口末端标记(TUNEL)法来检测心肌细胞的凋亡,用RT-PCR和Western blotting方法检测T-cad的表达。结果显示,与正常对照组相比,H/R组心肌细胞凋亡率显著升高,心肌细胞LDH的释放量明显增加,T-cadmRNA和蛋白水平表达均明显下降;而和H/R组相比,APN预处理可剂量依赖性地降低心肌细胞凋亡率,减少LDH释放量,并上调T-cad mRNA和蛋白水平。以上结果提示,脂联素可能通过上调T-cad的表达逆转H/R所致的心肌细胞损伤及凋亡,对心肌细胞有保护作用。
- 王敏柴颖儒肖传实赵旭静卫娜白瑞边云飞
- 关键词：脂联素心肌细胞
- 肿瘤坏死因子受体2突变载体对巨噬细胞炎症反应的影响
- 2013年
- 目的探讨肿瘤坏死因子受体超家族1B(TNFRSF1B)196位基因多态性(T突变为G)与巨噬细胞TNF/TNFR2信号通路介导炎症反应的相关性。方法运用基因重组技术构建真核表达载体pcDNA6.0-TNFR2196Met和pcDNA6.0-TNFR2196Arg,采用脂质体转染法分别转染至巨噬细胞中,转染48 h后使用杀稻瘟菌素抗性筛选4周,建立稳定转染细胞系。将酶消化法培养的巨噬细胞分为四组:空白对照组、pcDNA6.0空质粒组、pcDNA6.0-TNFR2196Met组及pcDNA6.0-TNFR2196Arg组。采用酶切及测序法鉴定重组质粒,RT-PCR检测肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)、cIAP1、cIAP2mRNA的变化;Western blot检测p-JNK、cIAP1、cIAP2、TNFR2及核因子κB(NF-κB)的蛋白表达;ELISA检测细胞上清液可溶性TNFR2(sTNFR2)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)水平。结果酶切测序结果显示成功构建了TNFR2基因196Met和196Arg表达载体。转染到巨噬细胞后,与空白对照组和pcDNA6.0空质粒组比较,pcDNA6.0-TNFR2196Arg组、pcDNA6.0-TNFR2196Met组TNFR2、cIAP1、cIAP2、IL-1β、IL-6和p-JNK的表达增高(P<0.05);与pcDNA6.0-TNFR2196Met组比较,pcDNA6.0-TNFR2196Arg组TNFR2、cIAP1、cIAP2、IL-1β、IL-6和pJNK的表达明显降低(P<0.05),TNFR2196Arg介导的NF-κB活性显著降低。结论成功构建稳定表达TNFR2196Met、TNFR2196Arg载体,TNFR2突变通过TNF/TNFR2信号通路介导炎症反应,可能是参与慢性炎症性疾病的作用机制。
- 岳莉英卫娜白瑞杨慧宇王敏边云飞
- 关键词：巨噬细胞炎症反应
- TNFR2突变载体的构建及其对巨噬细胞炎症反应的影响
- 目的：构建肿瘤坏死因子受体2（humantumornecrosisfactorreceptor2，TNFR2）野生型196Met和突变型196Arg的真核表达载体，将重组质粒转染到巨噬细胞中，建立稳定转染细胞系，探讨TN...
- 卫娜
- 关键词：基因多态性炎症反应巨噬细胞
- 冠心病患者血浆TNF-α与CK-MB、LDH、cTnI水平及冠脉病变的相关性分析被引量：18
- 2012年
- 目的研究分析冠心病患者血浆肿瘤坏死因子(TNF-α)与冠脉病变及心肌酶学指标的相关性,探讨其临床意义。方法从山西医科大学第二临床医院选取经冠状动脉造影证实为冠心病的患者60例,其中稳定型心绞痛(SA)12例,不稳定型心绞痛(UA)31例,急性心肌梗死(AMI)17例,另设对照组28例。用酶联免疫吸附(ELISA)法测定各组血浆TNF-α浓度,用免疫标记法测定肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)及肌钙蛋白I(cTnI)浓度;Gensini积分法对冠脉狭窄程度进行定量评价,并分析TNF-α与冠脉病变程度的相关性。结果冠心病组血浆TNF-α、CK-MB、LDH浓度显著高于对照组(P<0.05);AMI组TNF-α、CK-MB、LDH、cTnI水平明显高于对照组、SA组和UA组(P<0.01);UA组TNF-α、CK-MB水平明显高于对照组和SA组(P<0.05),LDH水平明显高于SA组(P<0.01),TNF-α水平明显高于对照组(P<0.05),LDH水平明显低于对照组;SA组CK-MB水平与对照组比较差异无统计学意义。Gensini积分与TNF-α呈正相关(P<0.01);AMI组TNF-α与CK-MB、LDH、cTnI呈正相关(P<0.01)。结论冠心病患者血浆TNF-α炎症因子的水平明显升高,随冠脉病变的严重程度增高而增高,提示冠心病患者体内已存在炎症反应,TNF-α在其发病机制中起一定作用,可作为冠心病炎症活性的独立指标。CK-MB、LDH、cTnI反映心肌损伤及坏死的程度,联合评估两种指标的水平对于临床估计冠心病的危险程度具有重要的意义。
- 卫娜李俊男任俊峰边云飞
- 关键词：肌酸激酶同工酶肌钙蛋白I
- 肿瘤坏死因子受体2基因多态性与冠心病分型的相关性分析被引量：1
- 2012年
- 目的研究肿瘤坏死因子受体2基因6号外显子rs1061622(+676)位点的基因型及血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2与冠心病临床分型及其危险因素的关系,分析两者与冠心病分型的相关性。方法选取经冠状动脉造影证实为冠心病的患者250例,其中稳定型心绞痛54例、不稳定型心绞痛110例、急性心肌梗死86例;同时选取我院正常体检者98例作为对照组。记录所有研究对象的病史、体格检查、辅助检查、冠状动脉造影结果等临床资料。采用聚合酶链反应-连接酶检测反应的方法检测各组肿瘤坏死因子受体2(+676)位点的等位基因及基因型频率;应用酶联免疫吸附法测定各组血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2水平。同时结合其基因型综合分析冠心病各临床分型与血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2水平、基因型的关系及肿瘤坏死因子受体2基因型与血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2间的关联度。结果 (1)肿瘤坏死因子受体2(+676)位点上有3种基因型,即TT、TG和GG型;(2)在冠心病组,肿瘤坏死因子受体2(+676)位点GG基因型频率(6.8%)高于对照组(4.1%),差异有统计学意义(P=0.008);冠心病组G等位基因频率高于对照组(χ2=3.993,P=0.046);(3)稳定型心绞痛组T/G等位基因频率与不稳定型心绞痛组、急性心肌梗死组相比差异有统计学意义(P<0.05),不稳定型心绞痛组与急性心肌梗死组相比差异无统计学意义;(4)在冠心病组中,血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2水平显著高于对照组,差异有统计学意义,冠心病组3种基因型血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2水平与对照组比较有统计学差异,但对照组和冠心病组中血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2水平与各自的基因型和等位基因无明显关联;(5)TG+GG基因型的患者空腹血糖、总胆固醇、收缩压水平与TT基因型患者相比差异无统计学意义,且患冠心病的风险是TT型的1.648倍。结论肿瘤坏死因子受�
- 卫娜李俊男任俊峰肖传实边云飞
- 关键词：基因多态性冠心病
- 吡格列酮对糖尿病大鼠血管钙化的影响及机制被引量：2
- 2012年
- 目的研究吡格列酮对糖尿病大鼠血管钙化的影响及其可能机制。方法将36只SD雄性大鼠随机平均分为6组:对照组、糖尿病组、钙化组、糖尿病+钙化组、钙化+吡格列酮组、糖尿病+钙化+吡格列酮组;建立大鼠血管钙化模型(维生素D3+华法林)和糖尿病模型(链尿佐菌素);并对血管组织进行Von Kossa染色、钙含量和碱性磷酸酶活性检测,qRT-PCR检测mRNA表达,免疫组织化学法检测骨保护素蛋白表达。结果钙化组血管平滑肌细胞及其间质内有大量黑色颗粒沉积;糖尿病+钙化组较糖尿病组和钙化组血管组织钙含量、碱性磷酸酶活性分别升高3.63倍、1.35倍和3.69倍、1.30倍(P<0.05),骨保护素mRNA含量及其蛋白表达降低(P<0.05);糖尿病+钙化+吡格列酮组较糖尿病+钙化组钙含量、碱性磷酸酶活性分别下调13.70%、18.04%(P<0.05),骨保护素mRNA含量及其蛋白表达升高(P<0.05)。结论吡格列酮可以减轻血管钙化程度并上调骨保护素mRNA含量及蛋白表达,骨保护素可能是抑制血管钙化主要因素之一。
- 车星星边云飞卫娜王泽慧肖传实
- 关键词：血管钙化糖尿病吡格列酮骨保护素
- 大鼠microRNA-145慢病毒表达载体的构建及其对血管平滑肌细胞表型转化的影响被引量：7
- 2012年
- 目的构建针对Rno-miR-145的慢病毒表达载体并探讨其在血小板源生长因子(PDGF)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化中的作用。方法人工合成含有酶切位点粘端miR-145 shDNA双链模板序列,克隆于LV3 pGLV/H1/GFP+Puro-miRNA慢病毒穿梭载体中,转染293T细胞,收获并浓缩慢病毒颗粒,感染大鼠原代VSMC,倒置荧光显微镜下观察VSMC感染后的荧光表达情况,实时荧光定量PCR检测miR-145的表达情况;实验分为空白对照组、PDGF组、PDGF+miR-145组和细胞转染阴性慢病毒载体组(miR-NC组);采用实时荧光定量PCR测定miR-145对VSMC增殖相关基因PCNA、c-Jun及分化相关基因SM22αmRNA表达水平的影响。结果成功构建了microRNA-145慢病毒载体,测定病毒滴度为1×109TU/mL。倒置荧光显微镜下观察大鼠microRNA-145慢病毒表达载体感染成功,MOI值为50,感染72 h时感染率最高。实时荧光定量PCR结果显示PDGF可使PCNA、c-Jun表达增加,而使SM22α表达降低;miR-145可使PDGF诱导的去分化型VSMC增殖相关基因PCNA、c-Jun表达降低,分化相关基因SM22α表达增加。结论 miR-145慢病毒载体可高效感染大鼠原代VSMC。感染miR-145慢病毒后可抑制VSMC的表型转化。
- 王泽慧边云飞卫娜车星星肖传实
- 关键词：慢病毒表达载体血管平滑肌细胞表型转化
