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硅烷化玻璃酸酯的制备及其护肤功效研究被引量：5: 2014年; 以四丁基碘化铵为催化剂,采用二甲基一氯硅烷与混悬在有机相中的玻璃酸钠反应,反应滤液经乙酸乙酯沉淀获得硅烷化玻璃酸酯(SHAC)。考察SHAC的皮肤刺激性、细胞毒性及护肤效果,结果表明,家兔背部涂抹质量分数为1%的SHAC溶液,红斑和水肿积分均为0,对皮肤无刺激;SHAC的IC50值大于5 g·L-1,该数值远大于欧盟化妆品无毒性的判定标准1.5 g·L-1,说明其没有细胞毒性;在相对湿度为65%和30%时,使用SHAC的猪皮表面水分含量分别为(49±2.16)%和(45±2.27)%,相对于现在广泛使用的保湿剂玻璃酸钠,SHAC具有良好的保湿效果;在其质量浓度为0.001 g·L-1时,SHAC作用的角质细胞存活率为(106.0±6.2)%,与表皮生长因子(EGF)对比没有显著差异。; 李燕陈建英王晓梅刘霞陈倩倩凌沛学; 关键词：保湿剂硅烷化细胞毒性

重组人凝血酶真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的稳定表达: 2013年; 目的构建含重组人凝血酶基因的重组真核表达载体,并转染哺乳动物细胞CHO,建立稳定表达重组人凝血酶的细胞株。方法利用限制性内切酶EcoR I和Xba I将凝血酶基因插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建含人凝血酶基因的重组质粒pcDNA3.1(+)/thrombin,利用双酶切和测序法鉴定。采用阳离子脂质体介导方法,将构建的表达载体转染到CHO细胞中,通过G418加压筛选出阳性细胞克隆,建立稳定表达人凝血酶的细胞株,并扩大培养。采用RT-PCR和SDS-PAGE法检测其mRNA和蛋白质的表达,并对其生物活性进行鉴定。结果重组质粒pcDNA3.1(+)/thrombin经双酶切和测序鉴定证实插入序列准确无误;经RT-PCR和SDS-PAGE法鉴定,转染的CHO细胞可表达、分泌人凝血酶,得到的重组人凝血酶表观相对分子质量(Mr)为43 000左右,与预测一致,且具有降解并凝固牛纤维蛋白原的活性,其比活为234.1 U/mg。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)/thrombin,并成功地在CHO细胞中表达了具有生物活性的重组人凝血酶,该体系的建立为进一步规模化生产重组人凝血酶奠定了基础。; 刘霞刘飞刘少英朱希强凌沛学; 关键词：CHO细胞真核表达载体转染

利用毕赤酵母基因调控直接发酵制备一种抗肿瘤药物复合物的方法: 本发明涉及一种利用毕赤酵母基因调控发酵生产抗肿瘤药物复合物的新方法。该方法包括：将重组质粒pGAPZαA-tnf[可组成型表达肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF-α)]和pPICZαA-ph...; 朱希强刘飞张莉刘霞钊倩倩王绍花陈勉侯重文袁丹丹张林军陈晓燕; 文献传递

人透明质酸酶真核表达载体的构建及稳定转染CHO细胞系的建立: 2013年; 目的构建人透明质酸酶真核表达载体,并将其转染CHO细胞,建立稳定转染的CHO细胞系。方法根据已知的天然人透明质酸酶PH20的氨基酸序列,利用PCR技术,将其克隆至真核表达载体MO2中,得到表达质粒MO2/ph20。经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染CHO细胞,通过G418(800μg/mL)筛选,建立稳定转染的CHO细胞系,SDS-PAGE法检测重组人透明质酸酶的蛋白表达水平,利用3,5-二硝基水杨酸法检测筛选得到的4个阳性细胞克隆的生物活性。结果成功构建了MO2/ph20真核表达载体,并建立了稳定转染的CHO细胞系,成功地表达目的基因。重组人透明质酸酶表观相对分子质量约为70×103,4个阳性细胞克隆的酶活性均高于9000 U/L,其中MO2/ph20-4细胞株酶活性高达10 000 U/L以上。结论本研究成功构建了能够正确表达人透明质酸酶基因的真核表达载体MO2/ph20,并获得了有生物活性的重组人透明质酸酶,该体系的建立为进一步规模化生产重组人透明质酸酶奠定了基础。; 刘霞刘飞刘少英朱希强凌沛学; 关键词：真核表达载体基因表达

一种新型乳糖酶的制备方法及其应用: 一种新型乳糖酶的制备方法及其应用，属于基因工程领域。主要技术特征是构建米曲霉乳糖酶成熟肽编码序列随机突变体库，筛选得到比活高、热稳定性好的突变体。并将突变序列依据毕赤酵母的密码子偏爱性进行优化，连入组成型表达载体进而转入...; 刘飞钊倩倩朱希强袁超侯重文王绍花陈勉刘霞袁丹丹张林军陈晓燕; 文献传递

一种利用毕赤酵母基因调控发酵生产不同分子量透明质酸的方法: 本发明涉及一种利用毕赤酵母基因调控生产不同分子量透明质酸(hyaluronic acid，简称HA)的新方法。该方法包括：分别将组成型表达兽疫链球菌透明质酸合成酶的重组质粒pGAPZαA-szHasA和诱导型表达重组人透...; 朱希强刘飞张莉刘霞钊倩倩王绍花陈勉侯重文袁丹丹张林军陈晓燕; 文献传递

聚谷氨酸的保湿功效及安全性评价被引量：16: 2015年; 通过CM825型皮肤水分测试仪和皮肤斑贴试验,研究聚谷氨酸的保湿功效及安全性。结果表明:不同分子量和质量分数的聚谷氨酸在保湿特性上差异较大,其中分子量为1 200 k Da的聚谷氨酸在质量分数为0.1%时,保湿效果最好;受试者涂抹该受试物2和4 h后皮肤水分含量的变化率分别为(103.9±0.2)%和(112.2±0.2)%,接近现在广泛使用的保湿剂透明质酸钠的(114.0±0.3)%;皮肤斑贴试验结果表明聚谷氨酸对皮肤安全、无刺激性。; 刘霞刘飞刘少英陈晓燕孟祥璟朱希强; 关键词：聚谷氨酸保湿

以交联透明质酸钠为支架体外构建组织工程软骨被引量：3: 2014年; 背景:采用组织工程技术再生和重建软骨是目前修复软骨组织缺损效果最好、最有应用前景的方法。目的:以体外培养的软骨细胞和交联透明质酸钠为支架材料,开发一套体外构建组织工程软骨的完整方案。方法:分离新西兰兔膝关节软骨细胞,制成细胞悬液滴加于交联透明质酸钠支架上,体外复合培养21 d,提取RNA进行RT-PCR检测,制备冰冻切片进行显微观察和免疫组织化学观察。结果与结论:软骨细胞接种于交联透明质酸钠支架材料后,可贴附于支架上生长,并且大量细胞聚集成团,在支架材料的纤维间隙中生长或呈单层细胞附着于支架材料纤维。细胞-支架复合物表达软骨组织特异性蛋白聚糖基因和Ⅱ型胶原α1基因,以及软骨组织特异性蛋白Ⅱ型胶原蛋白,可维持软骨细胞表型。表明培养的细胞-支架复合物在体外培养可形成软骨细胞外基质,有望获得组织工程软骨组织。; 刘少英陈建英陈倩倩刘飞刘霞朱希强凌沛学; 关键词：生物材料关节软骨免疫细胞化学形态学观察体外

抗肿瘤多肽和透明质酸酶药物组合物及其制备方法: 利用基因调控制备抗肿瘤多肽和透明质酸酶组合物的方法，属于基因工程领域。主要技术特征是构建抗肿瘤多肽LRR5组成型表达载体及人透明质酸酶rhPH-20诱导型表达载体，并同时整合入毕赤酵母基因组中，利用重组酵母发酵生产抗肿瘤...; 刘飞钊倩倩朱希强王绍花袁超陈勉刘霞侯重文袁丹丹张林军陈晓燕; 文献传递

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刘霞