刘银冰
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 结核分枝杆菌rv3668c基因的原核表达及多抗制备被引量：1
- 2013年
- 以结核分枝杆菌强毒株H37Rv基因组DNA为模板,扩增rv3668c基因,将其连接于表达载体pET-30a(+),获得重组质粒p30a-68,并将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用1mmol/L IPTG诱导表达组氨酸标签融合蛋白His-Rv3668c。用Ni-NTA His-Bind Resin亲和层析树脂纯化目的蛋白,利用抗6His标签抗体验证蛋白的纯化结果;通过Western-blot分析纯化蛋白与牛结核病阳性血清的反应情况。用重组蛋白纯化产物免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。结果显示,重组质粒的双酶切鉴定和DNA序列测定均完全正确;SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,His-Rv3668c以可溶形式表达,蛋白质分子质量为26ku;纯化的蛋白能与牛结核病阳性血清发生反应,表明其具有很好的免疫原性。所制备的多克隆抗体也具有良好的特异性,可运用于对Rv3668c蛋白的功能特性研究。
- 鄢秋龙陈利苹刘银冰曹俊倪宏波刘思国
- 关键词：结核分枝杆菌原核表达免疫原性
- 结核分支杆菌Rv0199和Rv3802c蛋白单克隆抗体的制备
- 牛结核病是一种由结核分支杆菌复合群引起的多种疾病的总称，牛结核分枝杆菌（Mycobacteriumbovis）是该病的主要病原。该病在人与动物之间可以互相传播，感染宿主非常广泛，尤其是在发展中国家，该病的根除一直是一个难...
- 刘银冰
- 关键词：牛分枝杆菌蛋白单克隆抗体
- 文献传递
- 结核分枝杆菌rv3036c基因的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：2
- 2013年
- 为制备结核分枝杆菌(Mtb)rv3036c基因的多克隆抗体,本研究以Mtb强毒株H37Rv基因组DNA为模板,扩增rv3036c基因,克隆至表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-rv3036c,并转化大肠杆菌BL21(DE3),经1 mmol/L IPTG诱导表达组氨酸标签融合蛋白Rv3036c,采用Ni-NTA His-Bind Resin纯化目的蛋白,经western blot验证纯化蛋白。将Rv3036c蛋白纯化产物免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。SDS-PAGE和westernblot分析结果表明,Rv3036c以可溶形式表达,蛋白分子量大小为28 ku,并且具有良好的免疫原性。以上结果为进一步研究rv3036c基因在Mtb的致病性作用奠定了基础。
- 曹俊陈利苹刘银冰鄢秋龙刘思国
- 关键词：结核分枝杆菌原核表达多克隆抗体
- 副结核分枝杆菌MAP1588C蛋白的原核表达与抗原性分析被引量：2
- 2012年
- 从副结核分支杆菌K-10菌株基因组中扩增出516 bp的MAP1588C基因片段,插入原核表达载体pET-28b(+),转化至大肠杆菌BL21(DE3),在0.5 mmol/L的IPTG诱导下进行表达;利用融合蛋白的组氨酸标签进行亲和层析纯化重组蛋白;通过抗6 His标签抗体的Western blot验证了纯化蛋白产物;另外,副结核阳性牛血清可检测到该蛋白条带。结果表明,表达的重组蛋白MAP1588C的蛋白分子量为21 kDa,具有良好抗原性,有望将此抗原用于建立副结核的ELISA诊断方法。
- 刘银冰陈利苹鄢秋龙曹俊刘思国
- 关键词：免疫性
- 牛源大肠杆菌F41菌毛蛋白的原核表达和多克隆抗体的制备被引量：1
- 2013年
- 目的原核表达及纯化牛源产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)F41菌毛蛋白,并制备F41菌毛蛋白的多克隆抗体。方法以ETEC基因组为模板,采用PCR法扩增F41菌毛基因,克隆入表达载体pQE-30,转化大肠杆菌XL1-Blue,IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE分析,表达产物经切胶纯化,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,采用间接ELISA法测定抗血清效价,Western blot分析F41菌毛蛋白与多抗的反应原性。结果重组表达质粒pQE-30-F41经双酶切及测序证实构建正确;F41菌毛重组蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约为32 000;重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的35%,纯化的重组蛋白纯度可达92%;制备的抗血清效价达1∶2.56×106以上,Western blot结果表明F41菌毛蛋白与制备的多抗具有良好的反应原性。结论已成功原核表达并纯化了F41菌毛重组蛋白,且制备了高效价的多克隆抗体,为单克隆抗体制备及其免疫检测方法的建立奠定了基础。
- 倪宏波郎秀艳邵光喜周玉龙焉秋龙刘银冰宫大庆王春仁
- 关键词：原核细胞基因表达多克隆抗体
