刘筱斌
- 作品数：5 被引量：56H指数：4
- 供职机构：中国科学院华南植物研究所更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目教育部科学技术研究重点项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 水稻小GTP蛋白基因Osrab5B基因的克隆和鉴定被引量：29
- 2001年
- 用已知遗传图位的BAC克隆片段 ,对水稻 (Oryzasativa)小穗cDNA文库进行筛选 ,获得一个水稻小GTP结合蛋白 (smallGTP bindingprotein ,SGP)的相关序列 ,序列测定后以该cDNA序列为基础将 4个表达序列标记 (EST)进行了电子克隆 (electroniccloning) ,根据电子克隆结果设计引物 ,利用RT PCR方法获得了一个水稻 (Oryzasati va)中尚未鉴定的cDNA克隆Osrab5B ,长 10 16bp。它与龙船海棠属 (Mesembryan themumcrystallinum)和百脉根属 (Lotusjaponicus)命名为rab5B基因 (序列登录号分别是AJ0 0 62 2 5和Z73939)有着高度同源性 (cDNA核苷酸序列ID值分别大于 74 %和76% ) ,同属rab家族的一个新的亚族。进而根据Osrab5B的cDNA序列设计引物 ,扩增得到Osrab5B的基因组克隆 ,序列分析表明它至少有 7个内含子和
- 林慧贤刘筱斌李发强罗文永刘良式
- 关键词：水稻CDNA克隆基因组序列
- 水稻矮化突变体差异表达cDNA片段的克隆与分析被引量：6
- 2001年
- 利用抑制性消减杂交 (Suppressivesubtractionhybridization ,SSH)分离本实验室获得的一株水稻矮化突变体dwarf6 9与其野生型对照品系特光矮_2 (Oryzasativa ,TGA_2indica)间表达有差异的cDNA片段 .分别以dwarf6 9作为驱赶子 ,TGA_2为检测子 ,以及以dwarf6 9作为检测子 ,TGA_2为驱赶子建立了两个差异表达cDNA文库 ,分别代表在TGA_2和dwarf6 9中特异表达的cDNA .经反式Northern检测这两个文库共得到
- 王永胜王景李发强刘筱斌刘良式
- 关键词：抑制性消减杂交矮化突变体水稻CDNA片段克隆
- 水稻rab5B基因在大肠杆菌中的表达、纯化和GTP结合分析被引量：7
- 2002年
- Rab5B类蛋白因为其编码产物的N端具有特殊结构而被认为是一类特殊的蛋白质 .水稻rab5B基因Osrab5B是这类蛋白质基因在单子叶植物中的首例发现 .将Osrab5B基因的编码序列按正确读码框重组到具有谷胱甘肽硫转移酶 (glutathioneS transferase,GST)融合标签的 pGEX 4T1表达载体中 ,转化大肠杆菌 ,获得了稳定表达目标融合蛋白的菌株 ,经GSTrapTM 柱纯化 ,获得了纯化的目标融合蛋白 .GTP结合试验表明 ,在原核细胞中表达出的GST
- 林慧贤刘筱斌梁承邺刘良式
- 关键词：水稻大肠杆菌纯化
- SSH法获取水稻矮化突变体相关的cDNA片段被引量：18
- 2001年
- 利用抑制性消减杂交 (Suppressivesubtractionhybridization ,SSH)分离水稻矮化突变体dwarf69与其野生型对照品系特光矮 2 (Oryzasativa ,TGA 2indica)间表达有差异的cDNA片段。分别以dwarf69作为驱赶子 ,TGA 2为检测子 ,以及以dwarf69作为检测子 ,TGA 2为驱赶子建立了两个差异表达cDNA文库 ,分别代表在TGA 2和dwarf69特异表达的cDNA。经反式Northern检测这两个文库共得到 1 0个阳性克隆。序列分析表明有两个序列为水稻中首次报道 ,一个序列有相应的基因组序列报道 ,但其cDNA序列是首次报道。
- 王永胜王景李发强刘筱斌刘良式
- 关键词：抑制性消减杂交SSH矮化突变体CDNA片段水稻
- 水稻小GTP蛋白OsRab5A的表达、纯化和GTP结合分析(英文)
- 2002年
- 小GTP结合蛋白是一类在细胞内的运输过程中重要作用的蛋白。它们通过结合子GTP而激活 ,当GTP被水解为GDP后处于非活性状态。哺乳动物中的研究表明 ,Rab5A蛋白是细胞内的形成早期内吞体 (earlyendosome)的限速因子。证实了所克隆的水稻rab5A基因编码的蛋白具有GTP结合功能。将Osrab5A基因的编码序列按正确读码框重组到pGEX4T1载体中 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,电泳判定插入片段大小无误后 ,进一步测序鉴定其读码也无误。将该克隆命名为pG_5AE。以IPTG诱导 pG_5AE所编码的融合蛋白GST_OsRab5A的表达。SDS_PAGE电泳与无外源质粒和表达谷胱甘肽硫转移酶 (GST)的对照相比 ,得到了预计大小的融合蛋白。以GSTrapTM亲和柱纯化融合蛋白。在不同的泳道分离纯化的融合蛋白和作为对照的含GST以及无外源蛋白的细菌总蛋白 ,电转移到硝酸纤维膜上。将该膜与α_3 2 PGTP温育 ,洗膜 ,放射自显影后 ,获得了融合蛋白结合GTP的结果 ,这表明在原核中表达出的水稻Rab5A蛋白能在体外结合GTP。
- 刘筱斌林慧贤梁承邺刘良式
- 关键词：水稻基因表达纯化融合蛋白
