刘晓娟
- 作品数：8 被引量：16H指数：3
- 供职机构：新疆大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 电穿孔法转染293T细胞条件的优化被引量：2
- 2014年
- 为筛选电穿孔转染人胚肾293T细胞的最优条件,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因克隆至启动子p CMV前,获得的重组质粒在不同电压、质粒浓度和电击次数条件下电穿孔转染293T细胞,继而在倒置荧光显微镜下观察转染细胞,根据EGFP表达情况评价转染效率。结果表明400 V电压、45 mg质粒电穿孔转染293T细胞2次时转染效率达到44%,与脂质体转染效率(51%)无统计学差异。
- 刘晓娟赵晓飞曾贝妮张萌马正海
- 关键词：电穿孔293T细胞转染
- 重组溶瘤单纯疱疹病毒抑制小鼠结肠癌肺转移瘤的实验研究被引量：1
- 2020年
- 探讨携载p53和IL-12的重组溶瘤单纯疱疹病毒(Oncolytic Herpes Simplex Virus-1,oHSV)MH1004和MH1006对小鼠结肠癌皮下移植瘤和肺转移瘤的治疗作用.蚀斑法和MTT法分析重组oHSV对结肠癌细胞CT26的感染和溶瘤特性;小鼠背部皮下注射CT26建立皮下移植瘤模型,瘤内注射重组oHSV后分析小鼠血清中IL-12含量,观察肿瘤大小和小鼠生存率;小鼠尾静脉注射CT26建立肺转移模型,尾静脉注射重组oHSV后显微观察肺组织中肿瘤细胞浸润,观察肺脏肿瘤结节和小鼠生存率.重组oHSV能够感染CT26并高效复制和抑制肿瘤细胞.皮下移植瘤小鼠治疗12 d后观察到抑瘤效应,MH1004和MH1006组21 d时肿瘤体积(2477.31±2017.02 mm3和1414.36±1639.19 mm3)均极显著小于Mock组(7682.92±2648.74 mm3)(P<0.01),42 d时生存率(均为100%)明显高于HSV-wt和Mock组(均为50%);MH1006组小鼠血清中IL-12含量增加,第16 d时极显著高于Mock组(P<0.01);治疗后肿瘤消失小鼠血清中IL-12含量明显增高.肺转移瘤小鼠治疗后,MH1004和MH1006组小鼠肺脏肿瘤结节数在治疗5 d、9 d和13 d时均极显著低于Mock组(P<0.01),13 d极显著低于HSV-wt组(P<0.01),且o HSV治疗小鼠肺组织浸润的肿瘤细胞明显减少;60 d时MH1004组、MH1006组、HSV-wt组和Mock组的生存率依次为83.3%、66.7%、66.7%和50%,MH1004组和MH1006组死亡小鼠肺脏肿瘤结节少于Mock组和HSV-wt组.携载IL-12和p53的重组o HSV经尾静脉注射治疗小鼠结肠癌肺转移瘤效果显著,该研究为转移瘤治疗提供了新的思路.
- 张政彭瑞娟阿木提喀日·马木提刘晓娟王雪莹马正海
- 关键词：IL-12P53结肠癌肺转移瘤
- HPV-16早期基因E1在果蝇细胞S2中的表达和鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的:在果蝇S2细胞中表达人乳头瘤病毒16型(HPV-16)E1。方法:PCR扩增HPV-16 E1全长,将PCR产物连接至pMD18-T并测序鉴定,继而将HPV-16 E1构建至果蝇表达载体pMT/Bip/V5-HisA中。大量提取pMT/Bip/V5/His-E1重组表达载体并与筛选质粒pCoBlast共转染果蝇S2细胞,经杀稻瘟菌素(Blasticidin S)筛选获得具有抗性的稳定转染S2细胞。提取稳转S2细胞基因组DNA,PCR鉴定S2细胞中整合的E1。以终浓度为5μmol/L CdCl2诱导表达,收集上清进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果:双酶切及测序结果显示HPV-16 E1基因已克隆人重组质粒pMT/Bip/V5-E1,PCR和Western blot结果表明HPV-16 E1基因已整合至果蝇S2细胞基因组并稳定表达。结论:获得HPV-16 E1转染的果蝇S2细胞株,该细胞株可持续稳定表达E1蛋白。
- 赵晓飞刘琼郭景霞刘晓娟曾贝妮马正海
- 关键词：人乳头瘤病毒16型
- 表达HIV-1 gag蛋白的重组乳酸乳球菌诱导小鼠产生体液免疫应答被引量：3
- 2014年
- 目的分析表达HIV-1 gag蛋白的重组乳酸乳球菌通过口服、滴鼻、皮下注射以及上述3种方式联合免疫小鼠诱导的体液免疫反应。方法将50只BALB/c小鼠随机分成5组,每组10只。表达gag的重组乳酸乳球菌分别通过口服、滴鼻、皮下注射以及上述3种方式联合免疫小鼠,对照组口服含PMG36e空载体的乳酸乳球菌,接种菌量均为109菌落形成单位(CFU),连续免疫3次,每次间隔2周,其中口服和滴鼻每次连续免疫3 d。采集免疫前和每次免疫后2周小鼠的血清,ELISA检测gag特异性的IgG水平。结果表达gag的重组乳酸乳球菌经口服、滴鼻、皮下注射以及3种方式联合免疫均诱导小鼠产生了gag特异性IgG,且联合免疫组gag IgG水平显著高于其他各实验组(P<0.01)。初次免疫后6周,口服和皮下注射免疫组gag IgG水平显著高于滴鼻免疫组(P<0.01)。免疫3次后各组血清中gag抗体的阳性率:口服免疫组分别为40%、40%、90%;滴鼻免疫组分别为10%、20%、20%;皮下免疫组分别为10%、60%、90%;联合免疫组的阳性率在初次免疫后2周已达到100%。结论表达HIV-1 gag的重组乳酸乳球菌载体疫苗经口服、滴鼻、皮下注射及3种方式联合免疫均能诱导小鼠产生特异性的体液免疫反应,多种途径联合免疫可增强乳酸乳球菌载体疫苗的免疫效果。
- 赵晓飞张彩荣刘晓娟马正海
- 关键词：乳酸乳球菌HIV-1GAG免疫途径
- 感染绵羊痘病毒的绵羊睾丸细胞外泌体源性蛋白组学分析被引量：4
- 2018年
- 外泌体是细胞主动分泌的纳米级囊泡，参与机体多种生理和病理学过程，具有重要的生物学功能。为了探究外泌体源性相关蛋白在绵羊痘病毒感染过程中的作用机制，本试验利用绵羊痘病毒感染绵羊睾丸细胞，分离外泌体，并对分离的外泌体源性蛋白进行质谱和蛋白组分析。将获得的原始数据与蛋白质数据库进行匹配和质检筛选，共鉴别出453种宿主细胞相关蛋白和6种绵羊痘病毒蛋白。GO通路分析表明，感染绵羊痘病毒的绵羊睾丸细胞外泌体源性蛋白参与复杂的细胞生理过程，主要包括免疫反应、内吞途径、代谢及生物调控等过程，在绵羊痘病毒的感染和扩散过程中起着重要作用。这有望为绵羊痘疫病的诊断试剂、新型疫苗及治疗药物的研发提供理论基础和依据。
- 吴金恩郑亚东孔贺磊刘晓娟马正海丁军涛
- 关键词：绵羊痘病毒外泌体蛋白组学
- 携带HIV-1抗原的单纯疱疹病毒载体疫苗的构建及鉴定
- 2015年
- 利用细菌人工染色体技术将串联的HIV-1 gp160、gag和protease基因以及表达元件插入1型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus type 1,HSV-1)内部反向重复序列区,以获得携带HIV-1抗原的单纯疱疹病毒载体疫苗。首先将HIV-1 gp160(B型和C型)、gag和protease基因串联克隆入pc DNA3获得重组质粒pc DNA/g Bgp和pc DNA/g Cgp,重组质粒转染293FT细胞,Western blotting检测HIV抗原表达。继而将pc DNA/g Bgp和pc DNA/g Cgp中包括HIV-1抗原基因和表达元件的表达框克隆入p KO5/BN获得重组穿梭质粒p KO5/BN/g Bgp和p KO5/BN/g Cgp,穿梭质粒电转含BAC-HSV的大肠杆菌,筛选重组菌,提取重组DNA并转染Vero细胞,挑取病毒蚀斑纯化重组病毒,Southern blotting鉴定重组病毒DNA,Western blotting检测重组病毒感染细胞中HIV抗原表达,并分析病毒的增殖特性。结果表明,Western blotting在pc DNA/g Bgp和pc DNA/g Cgp转染的293FT细胞中检测到表达的gp160和gag蛋白。p KO5/BN/g Bgp和p KO5/BN/g Cgp分别电转获得重组菌,并从重组DNA转染的Vero细胞中纯化获得重组HSV,Southern blotting检测表明重组HSV基因组发生特异性重组,重组病毒感染细胞中检测到gp120和gp41,且重组HSV保留了在哺乳动物细胞中的复制能力。本研究获得携载HIV-1 gp160、gag和protease基因的重组HSV,并保留了在哺乳动物细胞中的复制能力,可作为HIV-1复制型病毒载体疫苗。
- 赵晓飞郭景霞刘晓娟马正海
- 关键词：1型单纯疱疹病毒细菌人工染色体
- 携带p53基因的重组1型单纯疱疹病毒溶瘤特性的实验观察被引量：3
- 2016年
- 目的利用同源重组技术获得插入p53基因的重组1型单纯疱疹病毒（HSV-1），并在体外培养细胞和荷瘤小鼠中研究其溶瘤特性。方法将含p53基因的真核表达框克隆人含HSV-1同源重组臂的pK05／BN，获得重组穿梭质粒pK05／p53，其电转含pHSV△IR—BAC的大肠杆菌后，筛选获得含有p53的重组DNApHSVAIR—BAC／053。pHSV△IR-BAC／053转染Vero细胞获得重组病毒，经Southem印迹和Western印迹鉴定正确后命名为MH1004。分别检测MH1004感染多种肿瘤细胞24h后的滴度，分析其在肿瘤细胞中的复制特性。建立小鼠黑色素瘤模型，于0、3、6d瘤内分别注射2×106 PFU的MH1004、未插入p53基因的重组HSV-1（MH1001）、HSV-1wt和PBS，观察肿瘤大小和小鼠生存时间并作统计学分析。结果Western印迹检测表明MHl01M所携带的p53基因可在感染细胞中表达；在同种肿瘤细胞中，MHIOIM和HSV-1wt的复制水平差异无统计学意义（P〉O．05）；MH1004在SK—N．SH和U251细胞中的复制水平显著高于其在其他肿瘤细胞中的复制水平；治疗15d后，HSV-1 wt、MH1001和MHl004组小鼠的肿瘤体积分别为（6180±751）、（5760±267）和（4850±532）mm3，显著小于PBS对照组（9860±91）mm3（均P〈0．01），MHl004组肿瘤体积小于MH1001组和HSV．1wt组，但差异均无统计学意义（均P〉0．05）。MH1004组小鼠生存率（5／6）显著高于PBS组（3／6）、HSV-1wt组（3／6）和MHl001组（3／6）。结论MH1004在神经肿瘤细胞中的复制水平较高，能够显著抑制荷瘤小鼠肿瘤生长，并延长荷瘤小鼠的生存期。
- 王雪莹朱慧汪习刘晓娟马正海
- 关键词：溶瘤病毒
- 携载人IL－12的重组1型单纯疱疹病毒溶瘤特性的观察被引量：5
- 2017年
- 目的构建删除ICP47并携载人IL－12的重组HSV－1，并在体外培养细胞和荷瘤小鼠体内研究其溶瘤特性。方法利用细菌人工染色体技术获得删除ICP47的重组HSV－1 MH1005及其携载人IL－12的重组HSV－1 MH1006。检测HSV－wt、MH1005和MH1006感染多种神经肿瘤细胞时的复制水平和抑瘤效果。在小鼠背部两侧皮下注射Neuro－2a细胞建立荷瘤小鼠模型，分别于0、3和6 d在一侧瘤内注射2×106 PFU HSV－wt、MH1001（删除IR的重组HSV－1）、MH1005、MH1006和病毒储液（Mock），观察肿瘤大小和小鼠生存时间。结果MH1005、MH1006和HSV－wt在293FT细胞中的复制能力差异均无统计学意义（均P〉0.05）；重组HSV－1在G422和Neuro－2a细胞中的复制能力高于SK－N－SH细胞；重组HSV－1可显著抑杀神经肿瘤细胞。荷瘤小鼠治疗15 d时，HSV－wt、MH1001、MH1005和MH1006治疗组病毒注射侧肿瘤体积依次为（6 267±484）、（5 730±1 071）、（4 537±538）和（4 150±476） mm3，显著〈Mock组肿瘤体积（6 957±722） mm3（P〈0.01）；未注射侧肿瘤中，MH1005[（5 952±607） mm3]和MH1006[（5 473±661） mm3]治疗组肿瘤体积显著〈HSV－wt组[（6 785±1 063） mm3]、MH1001[（6 774±808） mm3]和Mock组[（6 957±190） mm3]（均P〈0.05）；小鼠治疗35 d时MH1005（100%）和MH1006组（100%）生存率显著高于MH1001组（67%）、HSV－wt治疗组（50%）和Mock组（33%）（均P〈0.05）。结论MH1005和MH1006可感染神经肿瘤细胞并高效复制，其直接抑杀肿瘤细胞的同时还可诱导小鼠对肿瘤细胞的免疫排斥，并延长荷瘤小鼠生存期。
- 刘晓娟王雪莹郭景霞朱红娟张彩荣马正海
- 关键词：白细胞介素12神经胶质瘤
