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以总RNA转染的方式将Bcr-Abl抗原基因导入树突状细胞并表达特异性蛋白P210的实验研究: 目的树突状细胞是目前已知唯一能激活未致敏T 细胞(na?ve T cells),诱导初始免疫反应的抗原提呈细胞 (antigen presenting cells,APC)。本课题利用K562细胞株,来探讨RNA抗原负载...; 高跞范华骅聂晓绚龚裕春刘嬿杨懿铭高峰; 文献传递

4082名上海骨髓库汉族无关供者HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因及单体型多态性研究被引量：12: 2012年; 目的了解上海地区汉族人群HLA-A、B、DRB1在高分辨分型水平上的等位基因及单体型频率分布特征。方法采用PCR-测序分型技术(Sequence-based typing,SBT)对4 082名随机、无血缘关系、健康的中华骨髓库上海分库汉族造血干细胞捐献者进行HLA-A、B、DRB1高分辨基因分型,利用计数法和最大似然性原理方法分别计算HLA-A、B、DRB1等位基因及单体型频率。结果 4 082例样本中,共观察到204个HLA等位基因,其中频率>0.1的HLA-A、B、DRB1等位基因分别有A*11∶01、A*24∶02、A*02∶01、B*46∶01、DRB1*09∶01、DRB1*15∶01。841条A-B单体型中,70条单体型呈现显著的连锁不平衡(ALD>0,HF≥3.67×10-4,χ2>3.84),8条表现为强连锁不平衡(RLD>0.40),17条单体型的频率高于0.01;1 027条B-DRB1单体型中,99条单体型呈现显著的连锁不平衡(ALD>0,HF≥3.67×10-4,χ2>3.84),12条表现为强连锁不平衡(RLD>0.40),12条单体型的频率高于0.01;3 344条A-B-DRB1单体型中,681条单体型是"可靠的"(频率≥3.67×10-4),单体型频率高于0.001有135条。结论获得上海地区汉族人群HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因频率和单体型分布数据及相关遗传参数,为临床移植供者的选择、中国人群CWD表的制订、骨髓库最适库容的评估及人类遗传学研究提供参考数据。; 杨剑豪刘嬿郑皆炜谢军华孙瑛姜跃琴唐晴钧杜可明; 关键词：HLA-A DRB1 等位基因频率单体型频率

人外周血NKT细胞体外扩增及其分泌细胞因子的研究被引量：3: 2004年; 目的　建立人外周血自然杀伤T细胞 (NKT)体外扩增及检测NKT细胞所分泌的细胞因子的方法。方法　分别采用单加α 半乳糖神经酰胺 (α Galcer组 ) ,单加树突状细胞 (DC组 )以及同时加α Galcer、DC(α Galcer、DC组 )的方法从人外周血单个核细胞 (PBMC)和纯化T淋巴细胞中扩增TCRVα2 4+ /TCRVβ1 1 + NKT细胞。采用细胞内细胞因子流式细胞术检测手段测定NKT细胞中IL 4 ,IFN γ、TNF α阳性细胞比例。结果　PBMC中的α Galcer组 ,DC、α Galcer组和纯化T淋巴细胞中的DC、α Galcer组 ,NKT细胞扩增 1 9d后分别占淋巴细胞的 (2 5 .5± 7.2 ) %、(1 8.2± 8.2 ) %和 (2 4 .8± 5 .5 ) % ,NKT细胞分别扩增了 (1 5 .1± 9.1 )× 1 0 3 倍、(2 1 .8± 1 7.3)× 1 0 3 倍和 (2 3.0± 1 6 .7)× 1 0 3 倍 ,与其它各组差异有显著性意义 (P <0 .0 1 )。扩增过程TCRVβ1 1+ NKT细胞中分泌IL 4 ,IFN γ和TNF α的细胞比例均高于TCRVβ1 1 T淋巴细胞 (P <0 .0 5 )。结论　α Galcer具有体外大量扩增NKT细胞的能力 ,同时α Galcer的激活能力受CD1d分子的限制。由于PBMC中的单核系细胞也表达CD1d分子。; 范华骅郑滨刘嬿高跞高峰陆华中; 关键词：细胞因子

不同来源的树突状细胞对扩增脐血NKT的影响被引量：1: 2007年; 目的比较不同来源的DC对扩增脐血NKT的影响。方法分别以外周血和脐血为来源诱生DC,在-αGalcer和IL-2的联合刺激下,对脐血中的NKT进行扩增。用流式细胞检测技术分析不同来源DC的表型区别,并对它们扩增的NKT细胞(TCR Vα24+TCR Vβ11+)进行鉴定。结果在14 d的培养时间里,由PB-DC参与的TCR Vαβ+NKT细胞的扩增量占淋巴细胞的(20.8±5.25)%,是原来的(8.22±2.75)×102倍;而由CB-DC参与的TCR Vαβ+NKT为(11.26±5.63)%,是原来的(4.66±2.12)×102倍;未加DC组,单用-αGalcer和IL-2,NKT的最终扩增量也达到了(10.84±4.00)%。3组较原来都呈现显著性扩增(P<0.01),其中以PB-DC参与的NKT扩增组效率最高(P<0.001)。经流式检测,PB来源的DC,其表面CD1d表达明显高于CB来源的DC(P<0.001),而共刺激分子则较脐血DC低。结论-αGalcer对NKT细胞有特异地扩增功能;NKT的扩增效率与DC细胞之间有着密切的关联,以外周血为来源的DC,其协同刺激脐带血NKT的扩增功能较脐血DC强。; 刘嬿范华骅阮鸣高跞杨懿铭聂晓绚高峰; 关键词：脐带血 DC细胞 NKT细胞 Α-GALCER

PCR-SBT法HLA基因分型模棱两可结果的判读及解决对策: 2009年; 目的研究PCR-SBT法HLA基因分型结果判读中出现的模棱两可问题并提出解决策略。方法对306名随机抽取的组织配型患者的DNA采用PCR-序列特异性引物(Sequence Specific Primer,SSP)低分辨方法检测,同时采用PCR-SBT法进行HLA-A,B,DRB1高分辨基因分型。PCR-SBT法模棱两可结果用PCR-SSP高分辨方法复核确认。结果所有306例检测标本的高低分辨血清学抗原一致,经PCR-SBT基因测序方法检测有111份模棱两可结果,占36.3%(111/306)。其中HLA-A座位有30对等位基因存在模棱两可结果,占所有检测标本等位基因总数的3.3%;HLA-B座位有66对,占7.2%;HLA-DRB1座位有36对,占3.9%。所有模棱两可标本经PCR-SSP HLA基因高分辨分型试剂PCR-SSP等方法复核确认。结论针对PCR-SBT法进行HLA-A,B,DRB1高分辨基因分型模棱两可结果所建立的解决策略,对于提高HLA数据分型的速度和分型准确性有重要意义。; 刘嬿季芸孙瑛杨剑豪毛臻杜可明; 关键词：人类白细胞抗原

人外周血Vα24 NKT细胞和CD3^+CD56^+CIK细胞生物学特性的比较研究被引量：11: 2006年; 目的进一步认识Vα24 NKT细胞和CIK细胞在生物学特性的差异。方法从人外周血单个核细胞扩增NKT细胞和CIK细胞;经免疫磁珠纯化获得高纯度的TCRVα24+NKT细胞和CD3+CD56+CIK细胞。运用流式细胞术测定纯化后的NKT细胞和CIK细胞的表型、细胞因子和细胞坏死相关因子的表达情况,并用DIOC18染色及流式细胞术测定纯化后的NKT细胞和CIK细胞的细胞杀伤活性。结果经纯化TCRVα24+Vβ11+NKT细胞和CD3+CD56+CIK细胞的纯度均达到>90%;纯化后的Vα24 NKT细胞多数为CD4+和DN NKT细胞,高表达TCRVα24、Vβ11、CD3、CD161,低表达CD56;而纯化后的CIK细胞则以CD8+T细胞为主,高表达CD3、CD56,低表达CD161,几乎不表达TCRVα24和Vβ11。在抗原刺激下,CD3+CD56+CIK细胞的IFN-γ、TNF-α、Perforin、FasL、TRAIL表达水平均高于NKT细胞,但CD3+CD56+CIK细胞几乎不分泌IL-4,而NKT细胞则分泌高水平的IL-4;CD3+CD56+CIK细胞对肿瘤细胞株K562、U937、Jurkat的杀伤率均远远高于NKT细胞。结论TCRVα24+NKT细胞和CD3+CD56+CIK细胞是两类完全不同的细胞群,在抗肿瘤免疫和免疫调节中可能起着不同的作用。; 杨洁范华骅聂晓绚高砾刘嬿章平高峰; 关键词：NKT细胞流式细胞术细胞生物学

脐血CD34^+细胞向内皮细胞定向诱导分化的实验研究被引量：1: 2006年; 目的探讨人脐血CD34+细胞体外分离、纯化、诱导扩增和分化为内皮细胞的可行性,并检测其表型。方法采集新鲜脐血经抗凝处理及无菌包装,Ficoll密度梯度离心法得单个核细胞,磁珠分选方法(MACS)分离出CD34+单个核细胞,M-199培养基中诱导分化,细胞形态学观察CD34+和CD34-细胞生长情况,流式细胞仪检测内皮细胞CD31表型,免疫组化验证蛋白水平表达。结果细胞形态学观察发现,刚分离的CD34+和CD34-单个核细胞呈圆形,形态小。CD34+细胞培养3d后有明显集落形成,7d后呈梭行细胞,出现典型线样排列结构。经诱导培养后,内皮细胞表型CD31阳性率为(70.03±10.27)%。免疫组化染色证实了内皮特异性成分ecNOS和flk-1/KDR蛋白水平的表达。而CD34-细胞单独培养,少部分细胞贴壁,呈现出不规则形态。结论MACS法分离脐血CD34+细胞,体外诱导扩增和分化后贴壁细胞具有内皮细胞形态,通过流式细胞仪和免疫组化验证了贴壁细胞中大部分细胞具有内皮系标志物表达。; 邵琴王长谦范华骅何奔刘嬿聂晓绚姜萌高跞; 关键词：脐血诱导分化内皮细胞

^(137)Csγ射线对白膜不同成分的影响被引量：1: 2007年; 目的137Csγ射线对白膜不同成分的影响。方法MTT法测辐照前后淋巴细胞的增殖情况;用荧光素FITC标记DH5α细菌,FCM分析粒细胞荧光强度的变化;用细胞色素C还原法检测中性粒细胞O2-的生成以及用ELISA法测单核细胞辐照前后细胞因子的分泌情况。结果25 Gy能完全灭活T细胞;辐照后粒细胞离体12h后有明显凋亡出现,但辐照前后粒细胞吞噬DH5α的能力无明显改变;而粒细胞释放的O2-在辐照后有明显升高;单核细胞经辐照后仍能分泌细胞因子,且IFN-γ的分泌量较未照组有所下降,而TNF-α的分泌量随着时间的推移呈逐渐升高趋势。结论γ射线对白膜中各成分都有不同程度的影响。分离后的粒细胞应尽早输注,由细胞因子参与的临床输血问题以及由此带来的风险,应当引起关注。; 刘嬿范华骅龚裕春聂晓绚谢如峰高跞高峰; 关键词：白膜粒细胞单核细胞

低氧诱导因子-1α基因体外转染内皮祖细胞的可行性及对其成内皮细胞活性的影响: 2006年; 目的探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因体外转染入内皮祖细胞(EPCs)的可行性及对其表现型的影响。方法构建真核表达载体pEGFP-HIF-1α。分离外周血单个核细胞(PBMC)及脐血CD34+单个核细胞(MNCCD34+)。采用电穿孔基因转染,荧光显微镜检测转染效率,逆转录聚合酶链反应检测HIF-1α的表达。培养1周后,分为4组:A组:只加入血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导培养;B组:转染入空质粒pEGFP-C1,并加入VEGF、bFGF;C组:转染入pEGFP-HIF-1α质粒;D组:未加VEGF、bFGF诱导。采用流式细胞仪检测CD31阳性细胞百分率。结果构建的pEGFP-HIF质粒基因序列与基因库(U22431, gi:881345)HIF-1α的CDS编码区完全一致。PBMC转染效率达38％,MNC CD34+转染效率达到42％。PBMC培养1周时,A、B、C组间CD31阳性率的差异无显著性(P值均>0．05),但均显著高于D组(P值均<0．05)。MNCC CD34+培养1周后,A、B、C组间CD31阳性率的差异无显著性(P值均>0．05)。结论真核表达载体pEGFP-HIF体外电穿孔转染入PBMC,提示转染HIF-1α能促祖细胞向内皮细胞分化,效果与加入细胞因子诱导相似,其能增加祖细胞增殖活性。; 邵琴王长谦范华骅何奔姜萌高跞聂晓绚刘嬿; 关键词：低氧诱导因子单个核细胞内皮祖细胞内皮细胞

5186例上海汉族无关脐带血HLA基因多态性研究被引量：2: 2011年; 目的了解上海地区汉族人群脐带血供者HLA-A、B、DRB1基因及单体型频率的分布特征。方法采用基因分型技术对5 186例脐带血进行HLA-A、B、DRB1基因分型,利用最大似然性原理方法计算HLA-A、B、DRB1基因及单体型频率。结果 5 186例脐带血样本中,共观察到72种HLA基因,其中频率>0.1的HLA-A、B、DRB1基因分别为A2、A11、A24、B60、B13、B46、DR9、DR12、DR4、DR15。385条A-B单体型中,195条单体型呈现显著的正连锁不平衡(A.L.D>0),12条表现为强连锁不平衡(R.L.D>0.40),26条单体型的频率高于0.01;387条B-DRB1单体型中,159条单体型呈现显著的正连锁不平衡(A.L.D>0),7条表现为强连锁不平衡(R.L.D>0.40),20条单体型的频率高于0.01;1847条A-B-DRB1单体型中,760条单体型是"可靠的"(频率≥2.89×10-4),单体型频率高于0.005有29条。结论上海汉族新生人群脐带血HLA基因和单体型多态性较为丰富,其频率分布数据和相关遗传参数为临床移植供者的选择、脐带血库的建立及人类遗传学研究提供了重要的参考。; 杨剑豪刘嬿孙瑛谢军华郑皆炜陆瑶杜可明; 关键词：脐带血造血干细胞基因频率单体型频率

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刘嬿

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