何亮
- 作品数：10 被引量：57H指数：4
- 供职机构：扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划江苏高校优势学科建设工程资助项目国家蛋鸡产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 牛型布氏杆菌A19株外膜蛋白OMP2b的表达及免疫原性检测
- 根据已发表的牛型布氏杆菌外膜蛋白OMP2b基因的核苷酸序列,设计一对特异性的引物,以牛型布氏杆菌A19株基因组为模板,通过PCR扩增出OMP2b全长,将OMP2b经T-A克隆、序列测定和分析。结果表明,OMP2b全长1 ...
- 何亮韩先干胡青海丁铲于圣青
- 关键词：蛋白表达
- 文献传递
- 溶菌质粒与细胞穿透肽对大肠杆菌菌蜕形成的比较研究
- 革兰阴性细菌被噬菌体PhiX174的裂解基因E构建的溶菌质粒裂解后形成的细菌空壳称为细菌菌蜕。细胞穿透肽是一类小分子肽,具有穿透细菌细胞膜形成菌蜕的作用。本文比较了溶菌质粒和合成细胞穿透肽MAP作用于鸭致病性大肠杆菌分离...
- 韩先干何亮胡青海丁铲于圣青
- 文献传递
- 免疫蛋白组学技术鉴定鸭疫里默氏杆菌的免疫原性蛋白GroEL
- 鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)可引起家鸭、火鸡及多种禽类的急性或慢性败血性传染病,给养鸭业造成巨大的经济损失。在其21个血清型中,国内引起鸭发病的主要是血清1、2和10型。因目前...
- 韩先干胡青海陈文静丁铲何亮于圣青
- 文献传递
- 牛型布氏杆菌铁离子转运蛋白的克隆鉴定及其生物学特性研究
- 对BfuA进行了克隆、表达及多抗的制备，ELISA和Western blot结果均为阳性，表明了该蛋白具有良好的免疫原性并确实表达于布氏杆菌的感染过程中，为进一步研究BfuA的功能和基于BfuA开发布氏杆菌的诊断抗原和亚...
- 孙晓庆韩先干童永亮何亮丁铲胡青海丁家波于圣青
- 关键词：铁离子转运蛋白基因克隆生物学特性
- λpL/pR-cI857温控系统的改造及其对大肠杆菌菌蜕制备的影响被引量：4
- 2012年
- 菌蜕是革兰氏阴性菌在噬菌体Phix174的溶菌基因E的作用下形成的细菌空壳,通常由λpL/pR-cI857温控系统通过调控E基因的表达制备。通过重叠PCR技术,将λpL/pR-cI857温控系统中λpR启动子的第2个操纵基因(OR2)的第9位碱基由T突变为C(T→C)。溶菌试验结果表明,突变后的λpL/pR-cI857系统在37℃时仍能稳定抑制基因E的表达,对大肠杆菌的溶菌率为99.9%。通过对λpR启动子的改造,扩大了λpL/pR-cI857温控系统的温度调控范围,为菌蜕疫苗的研制提供了参考。
- 董洪亮韩先干白灏何亮刘蕾刘瑞柴同杰丁铲刘海文于圣青
- 关键词：大肠杆菌重叠PCR突变
- 牛型布鲁氏菌A19株外膜蛋白OMP2b的表达及鉴定被引量：4
- 2010年
- 根据GenBank中的牛型布鲁氏菌基因序列,设计了1对特异性引物,以A19菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增出外膜蛋白OMP2b的全长基因,将OMP2b经T-A克隆后进行了序列测定和分析。结果表明,OMP2b全长1 128bp,编码376个氨基酸。将OMP2b定向克隆至表达载体pCold TF中,构建重组表达质粒pCold TF-OMP2b,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达融合蛋白His-OMP2b。SDS-PAGE分析结果显示,His-OMP2b约为93ku,与预期大小一致,表明His-OMP2b表达成功;经Wes-tern-blot分析,His-OMP2b能与牛型布鲁氏菌A19株全菌兔抗血清发生特异性反应,表明His-OMP2b具有免疫反应性。
- 何亮韩先干胡青海丁铲于圣青
- 关键词：蛋白表达免疫印迹
- 核磷蛋白B23与新城疫病毒M蛋白相互作用促进病毒的复制
- M蛋白是新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)编码的病毒蛋白中含量最为丰富且高度保守的一种非糖基化膜相关蛋白,在NDV整个感染周期中扮演着重要的角色.M蛋白在病毒感染早期大量聚集在细胞核和核...
- 段志强陈坚许海旭何亮刘慧谋胡顺林王晓泉刘秀梵
- 关键词：新城疫病毒M蛋白相互作用
- 牛型布鲁氏菌铁离子转运蛋白基因的克隆及其表达蛋白的生物学特性被引量：5
- 2012年
- 将通过PCR技术扩增的牛型布鲁氏菌铁离子转运蛋白(Brucellaferric uptake,BfuA)基因克隆至表达载体pCold TF中,构建重组表达质粒pCold TF-BfuA,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,在IPTG诱导下表达出大小约为100ku的融合蛋白His-BfuA。Western-blot分析表明,His-BfuA能与布鲁氏菌阳性牛血清发生特异性反应,表明BfuA具有免疫原性。用His-BfuA作为包被抗原,对35份布鲁氏菌阳性牛血清进行ELISA检测,结果所有被检血清均为阳性反应,表明BfuA为潜在的可用于牛型布鲁氏菌诊断的靶蛋白。此外,对BfuA的亚定位结果表明,BfuA为膜蛋白;对His-BfuA的纤连蛋白结合活性及纤连蛋白溶酶原结合活性的试验结果表明,His-BfuA不具有上述2种活性。上述结果为牛型布鲁氏菌病诊断方法的建立及亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 孙晓庆韩先干童永亮何亮丁铲胡青海丁家波于圣青
- 关键词：生物学特性
- 鸭致病性大肠杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析被引量：41
- 2010年
- 鸭致病性大肠杆菌病是危害养鸭业的最为重要的细菌性传染病之一。本研究分离鉴定了65株鸭致病性大肠杆菌,并对其O血清型、耐药谱以及毒力相关基因进行了检测。结果表明:大肠杆菌O78,O2和O1为主要流行血清型,各占分离株的75%、11%和5%。对15种常规抗菌素或药物的药敏试验结果表明:100%的分离株对利福平和红霉素耐药;94%以上的分离株对头孢噻吩等10种抗菌素或药物耐受;70%以上的分离株对氯霉素、卡那霉素、庆大霉素、壮观霉素和头孢噻肟敏感。对14种可能的大肠杆菌毒力相关基因的检测结果表明:ompA、pfs和luxS三种基因高度保守,在分离菌株中的检出率为100%;iss、iuCD、tsh、fimC、cvaC和iroC基因的检出率达到72%以上,为重要的鸭致病性大肠杆菌毒力相关基因。
- 陈文静韩先干何亮胡青海于圣青
- 关键词：血清型流行病学调查
- 新城疫病毒基质蛋白与禽细胞核磷蛋白B23.1在HEK-293T细胞中的相互作用被引量：4
- 2013年
- 【目的】探讨新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基质(matrix,M)蛋白和禽细胞核磷蛋白B23.1在HEK-293T细胞中的相互作用。【方法】分别参照GenBank中NDV JS/5/05/Go株全基因序列(JN631747)和禽细胞核磷蛋白B23.1基因序列(NM_205267),设计、合成扩增M基因和B23.1基因的引物,利用RT-PCR扩增出M基因和DF1细胞的B23.1基因,分别克隆至真核表达载体获得重组表达质粒pEGFP-M、pCMV-HA-M和pDsRed-B23.1;将pEGFP-M和pDsRed-B23.1共转染HEK-293T细胞,利用荧光显微镜观察M蛋白与B23.1蛋白的共定位;利用免疫共沉淀(Co-IP)技术进一步验证两种蛋白的相互作用。【结果】Western blot结果表明构建的重组质粒在转染的HEK-293T细胞中正确表达;荧光显微镜观察显示M蛋白与B23.1蛋白在核仁具有共定位特征;Co-IP进一步证实两者能发生相互作用。【结论】NDV M蛋白与禽细胞核磷蛋白B23.1存在相互作用,M蛋白可能通过与B23.1蛋白的相互作用进入核仁。
- 段志强陈坚何亮许海旭李群辉胡顺林刘秀梵
- 关键词：新城疫病毒基质蛋白蛋白相互作用
