任珍芸 作品数:6 被引量:13 H指数:2 供职机构: 兰州生物制品研究所有限责任公司 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 国家科技重大专项 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 轻工技术与工程 化学工程 更多>>
2种14型肺炎球菌多糖-蛋白结合物的制备及免疫原性比较 被引量:2 2016年 目的:以破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)和己二酸二酰肼(adipic acid dihydrazide,ADH)衍生的TT(TTAH)分别作为载体蛋白制备14型肺炎球菌多糖-蛋白结合物,比较2种结合物在小鼠体内的免疫原性。方法:以1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDAC)作为缩合剂,介导TT与ADH反应,制备TTAH衍生物,2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid,TNBS)法测定TTAH的-AH衍生率;将14型肺炎球菌多糖(PS14)水解并用1-氰基-4-二甲基氨基吡啶四氟化硼(CDAP)活化后直接与TT或TTAH结合,结合物经Sepharose 4 FF层析柱纯化后收集分配系数(KD)<0.2的样品并除菌过滤作为结合物原液,并对其生化指标、血清学特异性和小鼠免疫原性进行检测。结果:2种结合物原液游离糖含量均在1%以内,多糖回收率分别为PS14-TT:33.80%及PS14-TTAH:29.15%。与A组(多糖组)相比,2种结合物B组(PS14-TT)和C组(PS14-TTAH)能够诱导更高的抗PS14抗体水平(P<0.001)并具有剂次加强效应;与C组相比,B组能够诱导更高的抗PS14抗体水平且差异显著并具有统计学意义(P<0.05);2组结合物免疫3针后C组抗TT抗体水平高于B组,但差异无统计学意义,B组无剂次加强效应,而C组有剂次加强效应。结论:PS14-TT在小鼠体内诱导了较高的抗PS14抗体水平及较低的抗TT抗体水平,是较理想的多糖蛋白结合疫苗。 刘爱萍 任珍芸 刘佳 王欣茹 王玺 李阿妮 李燕婷 胡浩 吴兵 谢贵林关键词:肺炎球菌 结合疫苗 破伤风类毒素 免疫原性 经验放大法对肺炎链球菌规模化发酵工艺条件的研究 被引量:1 2016年 目的应用经验放大法探索肺炎链球菌规模化基本发酵工艺条件。方法复苏肺炎链球菌菌种,传代培养,最后接种于30 L发酵罐中,以细菌发酵的培养时间、收获液菌浓度A600 nm值、荚膜多糖产率为指标评价发酵工艺;以纯化多糖的功能基团含量、相对分子质量大小(色谱分配系数KD值)、生物活性为指标评价多糖质量。以4型、19F型肺炎链球菌为首选菌株,用于筛选高产菌株、优化传代方法、培养基及30 L发酵罐的通气条件,并应用经验放大法至270 L及1 200 L发酵罐,并将发酵条件推演到其他血清型肺炎链球菌。结果筛选出肺炎链球菌4型和19F高产菌株,利用市售复合培养基,经3代种子液体-液体传代法,0.03 VVM通气条件下,4型和19F菌株在3 0 L发酵罐中获得良好的培养结果;并采用经验放大法至1 200 L发酵罐,获得良好结果。采用此发酵工艺条件,其他20个血清型肺炎链球菌在1 200 L发酵罐中也获得较理想结果。结论应用经验放大法初步探索了肺炎链球菌在1 200 L发酵罐中的发酵工艺条件。 张新庄 白贵杰 张轶 任珍芸 张丽芝 张钦 沈荣关键词:肺炎链球菌 菌种筛选 培养基 18~60岁健康人群肺炎链球菌IgG抗体水平调查 被引量:2 2016年 目的了解18~60岁健康人群肺炎链球菌IgG抗体水平,为肺炎链球菌性疾病的预防与控制提供参考依据。方法选取甘肃、宁夏健康献浆员为调查对象,分为18~30、31~40、41~50、51~60岁4个年龄组,共调查347人。采用WHO推荐的标准化酶联免疫吸附试验检测12种肺炎链球菌血清型IgG抗体水平,并计算IgG抗体阳性率和几何平均浓度(Geometric mean concentration,GMC)。结果质控血清QC907的IgG抗体浓度均值与参考值之间的误差百分数均未超过±40%,测定值符合其参考值范围,各血清型抗体浓度检测结果的CV均〈30%。347份血清样品肺炎链球菌IgG抗体总阳性率为64.8%~96.0%,GMC为0.37~2.24μg/m L。不同血清型间IgG抗体GMC差异具有统计学意义(P〈0.05)。不同年龄组同种血清型IgG抗体阳性率及GMC均无统计学意义(P〉0.05)。除19F型外,不同地区同种血清型IgG抗体阳性率均有统计学意义(P〈0.05);除4、7F、14和18C型外,不同地区同种血清型IgG抗体GMC间差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论 18~60岁健康人群肺炎链球菌IgG抗体水平普遍较高,对肺炎链球菌主要流行血清型均具有一定的保护力。 张轶 熊明郁 张新庄 任珍芸 刘倩 张丽芝 任克明 王玺 陈晓航 王剑虹 沈荣关键词:肺炎链球菌 抗体水平 酶联免疫吸附试验 肺炎链球菌C多糖的纯化方法 本发明涉及肺炎链球菌C多糖的纯化方法。本发明的肺炎链球菌C多糖纯化方法包括菌体裂解、乙醇分级沉淀、去除蛋白杂质等步骤。通过对C多糖纯化方法工艺参数的优化,获得的C多糖结构完整,磷含量、氨基己糖含量、糖醛酸含量等关键指标,... 沈荣 任珍芸富含磷壁酸的肺炎链球菌的培养方法 本发明涉及肺炎链球菌的培养方法。本发明的肺炎链球菌的培养方法,在液体培养基中添加氯化胆碱,并对培养工艺进行了优化,获得的肺炎链球菌菌体富含磷壁酸,特别适合作为提取肺炎链球菌C多糖的材料。 沈荣 任珍芸硫酸-咔唑微孔板法检测肺炎链球菌荚膜多糖中糖醛酸含量 被引量:8 2017年 目的利用微孔板检测肺炎链球菌荚膜多糖中糖醛酸含量,并对该方法进行验证及初步应用。方法以微孔板为反应容器,对常规硫酸-咔唑法的咔唑质量浓度和加热时间进行优化;并对建立的方法进行线性范围、精密度以及准确度的验证及初步应用。结果最佳的咔唑质量浓度为0.10 mg/m L,加热时间为20 min。标准品D-葡萄糖醛酸在4~40μg/m L范围内,其质量浓度与校正后吸光值呈良好的线性关系,r2>0.99;批内及批间CV值分别为1.54%~3.02%及4.53%~7.75%;加入5μg/m L、10μg/m L、20μg/m LD-葡萄糖醛酸的8-160502、9V-160102、22F-160103荚膜多糖,D-葡萄糖醛酸的回收率为92.21%~110.47%。微孔板法校正前与常规方法在测定肺炎链球菌荚膜多糖中糖醛酸含量时差异无统计学意义(P>0.05),与校正后结果差异有统计学意义(P<0.05)。微孔板法测定分子质量分布与常规方法有较好的一致性。结论硫酸-咔唑微孔板法可有效检测肺炎球菌荚膜多糖中糖醛酸含量,操作简便快捷,精密度和准确度良好,可用于肺炎链球菌荚膜多糖疫苗的质量控制。 任珍芸 陈晓航 王玺 张轶 张新庄 刘倩 刘爱萍 沈荣关键词:微孔板 糖醛酸